甘露聚糖结合凝集素的分离纯化及其与单糖配体的结合活性鉴定

从羊血清中分离纯化甘露聚糖结合凝集素 (MBL ) ,并研究其与单糖配体的结合活性 ,为进一步研究MBL与病原微生物的识别结合活性提供研究基础。用甘露聚糖 Sepharose 4B亲和柱行亲和层析 ,从羊血清中分离纯化出MBL分子 ,行还原性SDS PAGE测定其分子量。用VII型胶原酶鉴定其胶原样结构。用酶联凝集素试验 (ELLA)鉴定其与单糖配体的结合活性。得到纯化的羊血清MBL分子有两种单体 ,相对分子质量分别为 2 90 0 0和 330 0 0。羊血清MBL具有胶原样结构 ,可以被胶原酶消化。羊血清MBL与辣根过氧化物酶表面糖链中甘露糖的结合受N 乙酰葡糖胺、L 岩藻糖、D 氨基葡糖、N 乙酰氨基半乳糖不同程度的抑制。MBL与单糖配体的结合活性预示了其潜在的与表面富含这些糖基结构的病原微生物的识别结合能力。     

黏液型肺炎链球菌的表型和遗传学特征

目的了解儿童临床标本中分离的黏液型肺炎链球菌的表型和遗传学特点。方法用奥普托欣试验、乳胶凝集试验和菊糖发酵试验鉴定肺炎链球菌,用纸片扩散法(KirbyBauer法)和Etest法完成菌株的药敏试验,用BOXPCR技术和青霉素结合蛋白基因PCR扩增及限制性内切酶消化分析菌株的遗传学特点。结果分离到黏液型肺炎链球菌5株,占同期肺炎链球菌临床株的2.1%。5株菌株均对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、甲氧苄啶磺胺异唑、红霉素、氯霉素、利福平、氧氟沙星和万古霉素敏感,仅3株对四环素中介。5株菌株的BOX图谱各不相同,其中1例同时分离到黏液型和非黏液型菌落,两者具有相同的BOX图谱。5株黏液型菌株3种青霉素结合蛋白基因指纹图谱均彼此相同。结论黏液型肺炎链球菌在儿科临床不常见,且对常用抗生素往往敏感,5株黏液型菌株系不同的克隆。     

儿童巨细胞病毒感染与甘露聚糖结合凝集素表达相关性研究

目的探讨甘露聚糖结合凝集素（MBL）基因多态性及血浆蛋白水平与儿童巨细胞病毒（HCMV）感染的相关性。方法收集2007年3～11月在浙江大学医学院附属儿童医院诊断为HCMV感染的患儿作为HCMV感染组,选择同期行健康体检的儿童作为对照组。对两组行MBL基因检测和分型,并对HCMV感染组进行随访,分别测定其急性期和恢复期血浆MBL蛋白水平。分别比较两组基因变异频率和血浆MBL蛋白水平。结果HCMV感染组纳入104例,对照组纳入105例;HCMV感染组有50例患儿进行随访,HCMV感染组MBL基因启动子区-550位点的L型变异频率明显高于对照组（56.7%vs34.3%,P=0.001）,野生单体基因型HYPA的频率明显低于对照组（47.6%vs62.8%,P=0.002）,完整基因型中高水平表达基因型（YA/YA）的频率低于对照组（41.3%vs60.0%,P=0.007）,而低水平表达基因型（YA/XA,YA/YB,XA/XA）的频率高于对照组（52.9%vs29.5%,P=0.001）。HCMV感染组急性期和恢复期血浆MBL蛋白水平均低于对照组（P=0.019和0.000）。HCMV感染组急性期血浆MBL蛋白水平高于恢复期（P=0.000）。结论MBL基因多态性导致的血浆MBL蛋白水平低下与儿童HCMV感染相关,提示MBL可能对儿童HCMV感染具有保护作用。     

2015年杭州地区新生儿肠道病毒脑炎病原分型及临床特征

目的分析2015年夏季杭州地区新生儿肠道病毒脑炎病原分型及临床特征。方法选择浙江大学医学院附属儿童医院2015年5-9月收治的45例有颅内感染的新生儿为研究对象,采用RT-PCR法检测脑脊液中的肠道病毒,根据结果分为病例组（阳性）与对照组（阴性）,比较与分析新生儿肠道病毒脑炎病原分型及临床特征。结果45例患儿脑脊液中检出肠道病毒阳性17例（37.8%）。病例组脑脊液中糖含量高于对照组（P＜0.05）,蛋白含量少于对照组（P＜0.05）;两组患者发热、黄疸、呕吐、抽搐等临床症状比较,差异均无统计学意义（均P＞0.05）。将17例脑脊液肠道病毒阳性标本进行基因分析,得到埃可病毒（ECHO）30（13例）、ECHO16（2例）和柯萨奇病毒（CV）B2（2例）;对上述临床株进行进化树分析,发现与参考株的同源性达89.6%~98.3%。结论2015年夏季杭州地区新生儿肠道病毒脑炎局部暴发流行,脑脊液生化指标的变化符合病毒性脑炎的特点,但临床表现无明显特异性;ECHO30是主要病原体,进化树分析显示本次暴发流行可能是浙江省ECHO30分离株的又一暴发流行。     

青春期前期女童外阴阴道感染常见病原菌及其耐药性分析

目的了解女童外阴阴道感染的常见病原菌,分析其体外耐药模式,以指导临床合理用药。方法回顾疑诊为细菌性外阴阴道感染的患儿825例,常规进行阴道分泌物培养,细菌鉴定和药敏试验采用Vitek系统;流感嗜血杆菌的鉴定采用V因子、X因子需求实验,药敏试验采用Kirby-Bauer琼脂扩散法,淋球菌鉴定采用api-NH板条鉴定。结果共分离到病原菌424例,阳性率51.4%。主要病原菌的分离率为：白色假丝酵母菌12.3%,淋病奈瑟菌10.7%,化脓链球菌7.6%,金黄色葡萄球菌5.4%,大肠埃希菌5.1%,肺炎克雷伯菌1.9%,肺炎链球菌1.9%,B族链球菌1.9%,变形杆菌1.3%。药敏结果显示：所有化脓链球菌和无乳链球菌对青霉素敏感,金黄色葡萄球菌对苯唑西林的耐药率为18.2%。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产生超广谱β-内酰胺酶的检出率为38.1%和25.0%,对头孢曲松的耐药率分别为38.1%和25.0%,所有变形杆菌均对头孢曲松敏感。白色假丝酵母菌和淋病奈瑟菌未作药敏,57.0%的淋病奈瑟菌产生β-内酰胺酶。结论白色假丝酵母菌、淋病奈瑟菌、化脓链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、肺炎链球菌和变形杆菌是小儿外阴阴道炎的常见需氧菌,经验治疗时应通过分析可能的病原选择敏感抗生素。     

16 SrRNA基因聚合酶链反应检测细菌感染的研究

目的：探索快速可靠的检测细菌感染的新方法。方法：通过自行设计合成的细菌１６ＳｒＲＮＡ基因高度保守区引物,对２０ 种标准菌株、１２ 种２７ 株临床分离的细菌株、人基因组ＤＮＡ及巨细胞病毒进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。结果：对所测细菌株均获得３７１ ｂｐ 扩增产物,而与人基因组ＤＮＡ、巨细胞病毒无交叉阳性反应,ＰＣＲ最低能检测ｌｐｇ 大肠杆菌ＤＮＡ。结论：建立了用共同引物ＰＣＲ扩增以判断是否存在细菌感染的方法,该方法检测快速,敏感性和特异性高。     

汉族儿童MBL基因启动子-221位点、外显子I区SNP和基因单体型分析

研究浙江省汉族儿童MBL基因启动子-221位点和外显子I区单核苷酸多态性(SNP)、基因单体型与血浆MBL水平的关系。血浆MBL浓度的检测采用ELISA法,MBL基因SNP分析采用序列分析法,基因单体型分析采用SHEsis软件,统计分析采用SPSS软件11.0版。结果105例汉族儿童中MBL基因启动子区-221位点X/Y和Y/Y基因型分别占19%和81%,该位点变异频率为0.095;外显子I基因型A/A、A/B和B/B分别占69.5%、27.6%和2.9%,B型变异频率为0.167。基因单体型有YA、YB、XA三种,其中以YA最多见,频率为0.741,其次是YB,频率为0.164。血浆MBL浓度范围为3~6 025 ng/ml,中位数为1057 ng/ml,外显子A/A型的MBL浓度显著高于A/B型,后者又显著高于B/B型;而启动子Y/Y型的MBL浓度比X/Y型高。本研究中汉族儿童MBL基因外显子I区+230位点的变异频率为0.167,外显子I区+230位点变异可导致血浆MBL水平明显下降。     

人感染甲型H1N1流感病毒的研究进展

2009年4月以来,包括墨西哥、美国和加拿大在内的许多国家发生了人感染甲型H1N1流感病毒疫情,WHO已于2009年4月29日将此次流感流行的预警级别不断提升至5级。现已基本明确,引起此次流感疫情的甲型H1N1流感病毒是猪流感病毒（swine influenza virus,SIV）的一种新型变异株。     

小儿下呼吸道感染的细菌病原学分析

目的：下呼吸道感染是造成儿童住院的最常见疾病之一。在发展中国家,病原菌以细菌感染相对多见,而病原菌的分布特点则常因年代不同而发生变迁。该研究的目的是了解本地区小儿下呼吸道感染常见病原菌及其对常用抗生素的耐药性,为临床药物治疗提供有价值的参考。方法：对2001年8月至2002年7月住院的所有下呼吸道感染患儿,常规进行深部痰培养,并用纸片扩散法、Etest法和Vitek系统进行药敏试验。结果：下呼吸道感染儿共4238例,其中1181例分离到1种或1种以上致病菌,阳性率为27.9%,最常见的病原菌为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌,分离率分别为5.2%,5.1%,5.1%,4.0%和2.1%。女性患儿肺炎链球菌的分离率显著高于男性(χ2=4.63,P<0.05),而肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌在男性中的分离率均高于女性(χ2=5.71,4.57,P<0.05)。年龄分布显示,1~3岁是肺炎链球菌和流感嗜血杆菌的好发年龄段,而肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和阴沟肠杆菌以及非常见菌感染则在1岁以内的婴儿中多见。季节分布上,12月份至3月份是大多数细菌感染分布较集中的时段。药敏结果显示青霉素不敏感肺炎链球菌、耐氨苄西林流感嗜血杆菌、耐苯唑西林金黄色葡萄球菌和产ESBL肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌的比率分别为55.0%,16.5%,41.2%,42.6%和4.5%。结论：肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌是小儿下呼吸道感染常见致病菌,但在不同年龄的感染率存在明显差异,治疗上应根据药敏结果选择敏感抗生素。     

手足口病病原体流行特征分析及临床意义

Objective To investigate the epidemic characteristics of etiological agents in children with hand, foot and mouth disease (HFMD) and analyze the differences between the severe and mild cases with HFMD seen from 2008 to 2009 in the Children's Hospital Methods A total of 154 patients with HFMD were enrolled from May 2008 to September 2008 and from May 2009 to September 2009, including 28 severe HFMD patients. Data from 80 cases with suspected herpangina were collected as control. Enterovirus universal type, enterovirus type 71 (EV71) and coxsackie virus group A 16 (CA16) were detected by realtime RT-PCR respoctively. Results The positive rate of enterovirus universal type in the 154 patients with HFMD was 81.82% (126/154). EV71 positive rate in these 126 patients with enterovirus universal type infection was 57.14% (72/126). The positive rate of enterovirus universal type in the 80 cases with suspected herpangina was 68.75% (55/80). There was no EV71 infection in these 80 cases with suspected herpangina. EV71 infection was mainly popular in 2008. Both EV71 and CA16 were prevalent in 2009. The epidemic characteristics of enterovirus infection with HFMD between 2008 and 2009 had significant differences (X2 = 23.50, P = 0.000) ( P ＜ O.01 ). The epidemic characteristics of enterovirus infection between severe and mild HFMD patients also had significant differences (X2 = 29.85, P ＜ O. 01). There were 28 cases with severe HFMD, in whom the EV71 positive rate was 92.86% (26/28). EV71 positive rate in the mild HFMD was 36.51% (46/126) (X2 =29.22, P ＜0.01). There was no significant difference in the gender ( X2 = 0.135, P = 0.714) and virus load (t = 0.141, P = 0.889) between the mild and severe HFMD cases. But the age of mild and severe HFMD showed a significant difference ( t = 2.926, P =O.009). Patients who were less than 2 years of age had a proportion of 88.89% (8/9) with severe HFMD.The mean age of mild HFMD patients was 3.19 years. Conclusion HFMD showed different epidemic characteristics at different times of enterovirus infection. There was no significant difference in the gender and virus load between the mild and severe cases with HFMD. Children under 3 years of age with EV71 infection were at high risk for severe HFMD.