幽门螺杆菌细胞毒素相关基因、空泡毒素基因及其表达产物与儿童胃十二指肠疾病的关系

目的　研究幽门螺杆菌 (Hp)的细胞毒素相关基因 (cagA基因 )、空泡毒素基因 (vacA基因 )及其表达产物cagA蛋白、vacA抗体与儿童消化性溃疡 (PU)、慢性胃炎 (CG)之间的关系。 方法　对 15 2例Hp感染患儿 (PU 31例 ,CG 12 1例 )的胃黏膜应用 4对不同引物 ,通过聚合酶链反应 (PCR)技术检测cagA、vacA基因 ;用免疫印迹法测定 139例血清cagA、vacA抗体。结果　 15 2例胃黏膜 10 0 %具有vacA基因 ( 15 2 /15 2 ) ,cagA基因经用 3对不同引物检测 ,其总阳性率为 78% ( 118/15 2 ) ,其中PU 71% ( 2 2 /31) ,CG 79% ( 96 /12 1) ,两组间差异无显著性 ( χ2 =0 .996　P >0 .0 5 )。 139例血清vacA抗体阳性率 92 .1% ( 12 8/139) ,PU 86 .7% ( 2 6 /30 ) ,CG 94 .5% ( 10 3/10 9) ( χ2 =1.14 6　P >0 .5 ) ;cagA抗体阳性率 91.4 % ( 12 7/139) ,PU 83.3% ( 2 5 /30 ) ,CG93.6 % ( 10 2 /10 9) ( χ2 =3.130　P >0 .5 ) ,以上两组间差异均无显著性。结论　 1.浙江地区儿童感染的Hp绝大多数为具有cagA基因的毒力菌株。 2 .亚洲地区与西方人群中感染的Hp菌株可能存在等位基因的多态性、变异性     

16S-23S rRNA基因区间细菌鉴定实验研究

目的 :探讨 16 S- 2 3S r RNA基因区间对细菌鉴定的应用。方法 :以 16 S- 2 3S r RNA基因区间为靶序列设计引物 ,采用聚合酶链反应检测标准菌株及临床菌株 DNA。结果 :对 2 7株代表 2 7个菌种的标准菌株进行 PCR扩增 ,分别出现不同的 DNA图谱 ,该图谱能直接或经核酸内切酶处理后用于细菌分类 ,敏感性可达 2 .5 CFU/ml的细菌 ,与人外周血白细胞 DNA和真菌及病毒无交叉。 32株临床细菌标本均扩增出与相应标准菌株一致的图谱。结论 :16 S- 2 3S r RNA基因区间 PCR扩增技术检测细菌 ,具有敏感、特异、快速、准确的优点 ,为临床败血症病原的快速诊断提供了新的方法     

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目的 探讨新生儿化脓性脑膜炎(以下简称化脑)新的快速诊断方法.方法 2003年8至2006年2月浙江大学医学院附属儿童医院采用脑脊液细菌16S rRNA基因芯片技术对24例临床上疑似化脑患儿脑脊液(CSF)的细菌DNA进行测定,同期进行与CSF细菌培养的对照.结果 (1)49株细菌PCR扩增产物基因芯片杂交结果显示,33株C+菌其G+探针和通用探针均阳性,G-探针阴性;16株G-菌中,G-探针和通用探针均阳性,G+探针阴性,均能与相应特异的探针发生杂交.(2)大肠埃希菌DNA的PCR产物其16S rRNA基因芯片的最小检出量为1pg,约等于10个拷贝教,相当于2个细菌.(3)16S rRNA基因芯片检测24份脑脊液标本发现11份阳性,阳性率为45.83%(11/24),明显高于脑脊液培养的阳性率12.50%(3/24),差异有统计学意义(P<0.01).结论 脑脊液细菌16S rRNA基因芯片检测技术特异性强、敏感性高,需标本量少,是早期快速诊断儿童化脑的可靠方法,具有较大的应用价值.     

手足口病病原体流行特征分析及临床意义

Objective To investigate the epidemic characteristics of etiological agents in children with hand, foot and mouth disease (HFMD) and analyze the differences between the severe and mild cases with HFMD seen from 2008 to 2009 in the Children's Hospital Methods A total of 154 patients with HFMD were enrolled from May 2008 to September 2008 and from May 2009 to September 2009, including 28 severe HFMD patients. Data from 80 cases with suspected herpangina were collected as control. Enterovirus universal type, enterovirus type 71 (EV71) and coxsackie virus group A 16 (CA16) were detected by realtime RT-PCR respoctively. Results The positive rate of enterovirus universal type in the 154 patients with HFMD was 81.82% (126/154). EV71 positive rate in these 126 patients with enterovirus universal type infection was 57.14% (72/126). The positive rate of enterovirus universal type in the 80 cases with suspected herpangina was 68.75% (55/80). There was no EV71 infection in these 80 cases with suspected herpangina. EV71 infection was mainly popular in 2008. Both EV71 and CA16 were prevalent in 2009. The epidemic characteristics of enterovirus infection with HFMD between 2008 and 2009 had significant differences (X2 = 23.50, P = 0.000) ( P ＜ O.01 ). The epidemic characteristics of enterovirus infection between severe and mild HFMD patients also had significant differences (X2 = 29.85, P ＜ O. 01). There were 28 cases with severe HFMD, in whom the EV71 positive rate was 92.86% (26/28). EV71 positive rate in the mild HFMD was 36.51% (46/126) (X2 =29.22, P ＜0.01). There was no significant difference in the gender ( X2 = 0.135, P = 0.714) and virus load (t = 0.141, P = 0.889) between the mild and severe HFMD cases. But the age of mild and severe HFMD showed a significant difference ( t = 2.926, P =O.009). Patients who were less than 2 years of age had a proportion of 88.89% (8/9) with severe HFMD.The mean age of mild HFMD patients was 3.19 years. Conclusion HFMD showed different epidemic characteristics at different times of enterovirus infection. There was no significant difference in the gender and virus load between the mild and severe cases with HFMD. Children under 3 years of age with EV71 infection were at high risk for severe HFMD.     

维生素C抑制甘露醇诱导的血管内皮细胞凋亡的实验研究

目的：探讨维生素C对甘露醇引起血管损伤及其诱导的血管内皮细胞凋亡基因表达的影响。方法：（1）动物实验：将健康大白兔随机分4组,A组在兔耳缘静脉注射甘露醇;B、C、D组分别以生理盐水、维生素C、维生素E预处理后再静脉推注甘露醇,电镜、光镜下观察局部血管的损伤。（2）利用Biostar H-40s型芯片,检测甘露醇分别在应用三种保护剂前后对凋亡基因表达的影响。结果：（1）动物实验：血管损伤程度上,A组为重度;B组为中～重度;D组为轻度;C组未见明显病理改变。（2）基因芯片检测：330条凋亡基因中,生理盐水组芯片无改变;维生素C组中45条促凋亡基因表达下调,34条抗凋亡基因表达上调;维生素E组3条促凋亡基因表达下调。结论：维生素C通过抑制血管内皮细胞凋亡而起到抑制甘露醇血管损伤的作用。     

应用聚合酶链反应检测各孕期孕妇弓形虫感染

我们通过聚合酶链反应(PCR)、血清学试验及部分动物接种,对367名各孕期孕妇外周静脉血、脐血及死胎组织进行弓形虫检测。结果:PCR DNA阳性 7例,循环抗原(CAg)阳性2例,特异性IgM阳性 1例。总阳性率 1.9％。对其中 1例 PCR DNA、CAg阳性的孕妇血进行动物接种,结果阳性。28份死胎组织中,发现一死胎心、肺、肝、肾、眼、脑组织弓形虫DN A均阳性。提示:孕妇弓形虫感染的危害在我国(省)并非少见。开展对孕妇弓形虫感染的检测,将有利于优生优育工作的开展。PCR较其它方法更具特异性及敏感性,且操作简便、快速,适合于孕妇弓形虫感染的监测。     

套式聚合酶链反应及限制酶分析对孕早期孕妇巨细胞病毒感染的研究

在人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）－ＡＤ１６９株直接早期基因的ＥｃｏＲＩＪ片段内，自行设计二对引物，建立套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）加限制酶分析检测ＨＣＭＶＤＮＡ，经实验证明有高度的特异性与敏感性，对其它疱疹类病毒及正常人基因组ＤＮＡ无交叉反应，一次性ＰＣＲ检测ＨＣＭＶ－ＡＤ１６９株基因组的最小检出量为１００ｆｇ，而套式ＰＣＲ可达１０ｆｇ，经ＰｓｔＩ酶切后，得到的片段与设计相符，对５８名孕早期孕妇外周静脉血     

荧光定量与芯片杂交快速诊断患儿化脓性脑膜炎

临床确诊化脓性脑膜炎（化脓）主要依赖脑脊液细菌培养，但其耗时较长，阳性率低，难以适应临床早期诊断。为此，我们对疑似化脑患儿行脑脊液细菌DNA荧光定量及芯片杂交检测，并进行脑脊液细菌培养对照，效果较好。     

核糖体DNA聚合酶链反应诊断新生儿败血症

目的比较１６ＳｒＤＮＡ高度保守区引物聚合酶链反应（ＰＣＲ）与血培养及非特异性诊断指标对新生儿败血症的诊断价值。方法对１３１例拟诊为败血症的新生儿血标本进行细菌ＤＮＡ检测。结果１３１例中，ＰＣＲ检测阳性５６例，阳性率为４３％，明显高于血培养的阳性率（血培养阳性２３例，阳性率１８％）。１３１例拟诊败血症中，发现２３例确诊败血症及３１例临床败血症，对这５４例败血症（血培养阳性２３例＋临床败血症３１例）作ＰＣＲ检查，结果阳性４８例，阴性６例；对１３１例中的７７例“非败血症”病例，ＰＣＲ检测阴性６９例，阳性８例。对血培养阳性的２３例进行ＰＣＲ，结果阳性２２例。以血培养作为确诊标准，ＰＣＲ检测的敏感性为９６％，并不受抗生素治疗的影响。３０例阴性对照组ＤＮＡ的ＰＣＲ分析均为阴性。结论在严格控制污染的条件下，细菌共同引物ＰＣＲ技术能为新生儿败血症提供可靠的病原菌诊断依据     

蒙古族与回族人群MBL结构基因型及其与血浆蛋白浓度的关系

目的：分析内蒙古自治区蒙古族人群和宁夏回族自治区回族人群血浆甘露聚糖结合凝集素（MBL）的结构基因型,并探讨其与血浆蛋白浓度的关系。方法：用ELISA法检测血浆MBL浓度,用序列分析法分析MBL基因外显子1区52、54和57密码子的单核苷酸多态性;统计分析采用SPSS软件11.0版,遗传学分析采用SHEsis软件。结果：79例蒙古族人和69例回族人血浆MBL浓度中位数分别为1686和1909ng/ml,两组间无显著性差异（Z=0.63,P=0.4）。蒙古族人群外显子1A/A型、A/B型和B/B型分别占62.0%、35.4%和2.5%,而回族人群A/A型、A/B型和B/B型分别占58.0%、30.4%和11.6%,蒙古族和回族人群＋230位点变异频率分别为0.203和0.268,两者变异频率无显著性差异（χ^2 1.772,P=0.183）。所有样本无C或D型外显子发现。A/A型外显子的血浆MBL浓度显著高于A/B型,后者又显著高于B/B型（χ^2 86.526,P〈0.01）。结论：蒙古族和回族人群MBL基因只有A/A,A/B和B/B3种外显子基因型,A/A型结构基因MBL浓度显著高于A/B型,又显著高于B/B型。