重组人内皮抑素在大肠杆菌中表达及其生物学活性鉴定

目的 利用大肠杆菌原核表达系统表达重组人内皮抑素Endostatin，并对其进行生物学活性鉴定。方法 采用RT—PCR方法从人胚肝中钓取人内皮抑素cDNA，将其克隆入pGEM—T Easy克隆载体中；经全自动序列分析仪测序确证后，将人内皮抑素cDNA亚克隆入原核表达载体pWR450—1，构建含人内皮抑素cDNA的重组质粒；将该重组质粒转化入大肠杆菌TG1中进行诱导表达，表达产物经SDS-PAGE鉴定；表达产物初步纯化复性后以鸡胚尿囊膜血管生成抑制实验和小鼠伤口愈合实验对其进行生物学活性鉴定。结果 成功获得549bp 人 endostastin基因，测序证实序列正确。经IPTG诱导的重组原核表达质粒表达出重组人内皮抑素的融合蛋白，此蛋白在SDS-PAGE凝胶上显示出一条约75KD的阳性条带。重组人内皮抑素融合蛋白的初纯物在体外能抑制鸡胚尿囊膜血管生成及延长小鼠伤口愈合时间。结论 人内皮抑素融合蛋白在大肠杆菌原核表达系统中高水平表达，并具有抗血管生成活性，为采用抗血管生成方法治疗恶性实体肿瘤的研究奠定了基础。     

甲基莲心碱增强阿霉素对骨肉瘤的抑制作用及机制初探

目的　研究甲基莲心碱 (Nifeine ,Nef)与化疗药物合用时 ,对骨肉瘤的化疗增敏作用及其机制。方法　用MTT法测定药物的细胞生长抑制率 ,PI染色流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。间接免疫荧光流式细胞术和S P免疫组化检测蛋白表达。结果　 5 ,10 μmol·L-1Nef能降低ADM对Saos 2的IC50 。 10 μmol·L-1Nef增加了ADM诱导的Saos 2凋亡 ,增强了细胞的Rb蛋白表达 ,使G1期细胞增多。结论　Nef能增加ADM对Saos 2的化疗敏感性 ,其机制可能与增强Saos 2的Rb蛋白表达和G1期阻断有关     

重组人内皮抑素在大肠杆菌中表达及其生物学活性鉴定

目的　利用大肠杆菌原核表达系统表达重组人内皮抑素Endostatin ,并对其进行生物学活性鉴定。方法　采用RT-PCR方法从人胚肝中钓取人内皮抑素cDNA ,将其克隆入pGEM-TEasy克隆载体中;经全自动序列分析仪测序确证后,将人内皮抑素cDNA亚克隆入原核表达载体pWR450-1 ,构建含人内皮抑素cDNA的重组质粒;将该重组质粒转化入大肠杆菌TG₁中进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定;表达产物初步纯化复性后以鸡胚尿囊膜血管生成抑制实验和小鼠伤口愈合实验对其进行生物学活性鉴定。结果　成功获得549bp人endostastin基因,测序证实序列正确。经IPTG诱导的重组原核表达质粒表达出重组人内皮抑素的融合蛋白,此蛋白在SDS-PAGE凝胶上显示出一条约75KD的阳性条带。重组人内皮抑素融合蛋白的初纯物在体外能抑制鸡胚尿囊膜血管生成及延长小鼠伤口愈合时间。结论　人内皮抑素融合蛋白在大肠杆菌原核表达系统中高水平表达,并具有抗血管生成活性,为采用抗血管生成方法治疗恶性实体肿瘤的研究奠定了基础     

硫化氢对抗过氧化氢对PC12细胞的损伤作用

目的探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对抗过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)对PC12细胞的损伤作用及有关机制。方法应用H2O2在PC12细胞建立氧化应激损伤的实验模型;应用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)染色FCM检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量。应用硫化氢钠(sodium hydrosulfide,NaHS)作为H2S的供体。结果200μmol和400μmolH2O2作用PC12细胞24h均使细胞的存活率明显降低及凋亡率显著增加,200μmolH2O2引起PC12细胞的MMP明显降低及ROS生成显著增多。当NaHS与H2O2(200或400μmol/L)共同作用于PC12细胞时,NaHS(100～400μmol/L)浓度依赖性的阻断H2O2引起PC12细胞的存活率降低及细胞凋亡率增加。400μmolNaHS明显地阻断200μmolH2O2引起PC12细胞的MMP降低及ROS增多。结论H2S能明显地保护PC12细胞对抗H2O2引起的损伤,阻断MMP降低及ROS生成可能是H2S的细胞保护机制之一。     

甲基莲心碱对MCF-7细胞体外化疗增敏作用

目的 :探讨甲基莲心碱 ( Neferine,Nef)的体外化疗增敏作用。方法 :以人乳腺癌细胞 MCF- 7为研究对象 ,MTT法测定药物的细胞生长抑制率 ,流式细胞仪 ( Flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡。结果 :Nef( 5 um ol· L- 1 、10 um ol· L- 1 )分别与阿霉素 ( ADM)、5 -氟尿嘧啶 ( 5 - FU )、顺铂 ( CDDP)合用 ,可增加它们对 MCF- 7细胞的生长抑制率 ,q>1。Nef( 10 um ol· L- 1 可增强 10 umol· L- 1 ADM诱导 MCF- 7细胞凋亡的作用。结论 :Nef具有化疗增敏作用。     

绞股蓝总皂苷对化学诱导大鼠大脑中动脉栓塞性脑缺血损伤的保护作用

目的：研究绞股蓝总皂苷（Gyp）对栓塞性脑血损伤的保护作用。方法：应用光化学诱导大鼠大脑中动脉栓塞模型,观察Gyp预防性给药后脑组织超氧化物歧化酶（SOD）的活力,脂质过氧化产物TBARS,钠,钾,钙和水的含量以及缺血区范围的变化。结果：Gyp能缩小光化学反应后的缺血区面积,降低TBARS含量,提高SOD活性,降低缺血区Na^ ,Ca^2 ,H2O含量,升高K^ 水平,结论：Gyp对栓塞性脑缺血损伤具有保护作用。     

绞股蓝总皂苷对光化学诱导大鼠大脑中动脉栓塞性脑缺血损伤的保护作用

目的研究绞股蓝总皂苷(Gyp)对栓塞性脑缺血损伤的保护作用。方法应用光化学诱导大鼠大脑中动脉栓塞模型,观察Gyp预防性给药后脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活力,脂质过氧化产物TBARS,钠、钾、钙和水的含量以及缺血区范围的变化。结果Gyp能缩小光化学反应后的缺血区面积,降低TBARS含量,提高SOD活性,降低缺血区Na     

MPP+对PC12细胞内源性H2S生成的影响

目的： 观察1-甲基4-苯基吡啶离子 (MPP+)对PC12细胞内源性硫化氢（H2S）生成的影响,以探讨MPP+损伤PC12细胞的新机制。方法: RT-PCR方法检测PC12细胞胱硫醚-β-合酶（CBS）mRNA 的表达;亚甲基蓝分光光度计法检测PC12细胞内源性H2S的含量及PC12细胞CBS活性;台盼蓝拒染色法观察PC12细胞的存活率。结果：MPP+ 可以抑制PC12细胞CBS的表达及其活性,减少内源性H2S的生成;MPP+可以明显地降低PC12细胞的存活率;H2S的供体硫氢化钠（NaHS）对MPP+诱导的PC12细胞损伤具有显著的拮抗作用。结论: MPP+能抑制CBS的表达和活性,减少内源性H2S生成,这可能与其损伤PC12细胞的机制有关。     

外源性氧自由基所致脑基底动脉痉挛的机制

氧自由基引起兔脑基底动脉收缩,灌注压明显增高,脑基底动脉内皮源性舒张因子释放明显减少,血管壁组织中亚硝酸盐含量及超氧化物歧化酶活性明显降低,丙二醛含量明显升高。提示氧自由基损伤脑血管作用可能与其损伤血管内皮及促进脂质过氧化产物的生成有关。     

绞股蓝总皂甙对氧自由基所致脑血管痉挛的保护作用

研究绞股蓝总皂甙（GPS）对外源性氧自由基所致家兔脑基底动脑损伤的保护作用，外源性氧自由基由电解克氏液产生，电解后，脑基底动脉灌注压及血管壁丙二醛（MDA）含量明显升高，脑基底动脉内皮舒张作用，亚硝酸盐及超氧化物歧化酶（SOD）活性明显降低，GPS25、50、100μg／mL可浓度依赖性地抑制氧自由基诱发脑血管收缩作用，此外GPS100μg／mL还具有明显抑制血管壁MDA生成，保护SOD活性的作用。