腺病毒介导神经营养素-3基因转染施万细胞

[目的]构建神经营养素 3(NT 3)基因转染的施万细胞.[方法] NT 3基因重组腺病毒(AdvNT 3)扩增、纯化和测定后,转染体外培养的施万细胞(SCs).用免疫细胞化学和 ELISA方法分别检测 NT 3基因转染 SCs的 NT 3表达及培养液中 NT 3的含量. [结果]实验中获得的 AdvNT 3中外源基因序列与大鼠 NT 3的 DNA序列完全一致,与未基因转染 SCs相比,NT 3基因转染 SCs的 NT 3阳性增强,培养液中 NT 3含量增高.[结论]通过腺病毒介导可以获得 NT 3过量表达的基因转染 SCs.     

施万细胞移植促进大鼠脊髓全横断损伤后大脑皮质锥体神经元和红核神经元的存活

[目的] 探讨施万细胞移植对大鼠脊髓全横断损伤后大脑皮质感觉运动区神经元和脑干红核神经元存活的影响.[方法] 大鼠脊髓全横断损伤后移植吸附施万细胞的胶原或明胶,术后 3个月计数大脑皮质感觉运动区锥体神经元和脑干红核神经元密度以及红核体积.同时以单纯移植胶原或明胶或不移植物体的脊髓损伤大鼠为对照.[结果] 脊髓全横断损伤后,大脑皮质感觉运动区锥体神经元密度和脑干红核神经元密度明显较正常大鼠相应区域内的神经元密度降低;移植施万细胞的两个组(胶原施万细胞组和明胶施万细胞组)上述两个区域的神经元密度较未移植施万细胞的 3个组(对照组,胶原组和明胶组)高,差异有统计学意义;而移植施万细胞的两个组之间比较或未移植施万细胞的 3个组之间比较,上述区域的神经元密度无显著性差异.[结论] 脊髓全横断损伤可导致大脑皮质感觉运动区锥体神经元和脑干红核神经元发生死亡,施万细胞移植能够促进脊髓损伤后大脑皮质感觉运动区锥体神经元和脑干红核神经元的存活.     

微型皮瓣瓦合修复示指末节脱套伤

2000年6月-2004年5月，我院应用中指中节带指背神经的邻指皮瓣和示指近节的指背皮神经营养血管蒂皮瓣，急诊修复示指末节脱套伤，临床效果较好，报告如下。     

三种穿支蒂皮瓣修复肘关节周围软组织缺损的回顾性分析

目的探讨3种穿支蒂皮瓣修复肘关节周围软组织缺损的临床效果及适应证。方法回顾性分析2013年12月至2022年11月, 上海健康医学院附属崇明医院(上海新华医院崇明分院)骨科修复重建中心收治的肘关节周围软组织缺损患者的临床资料。根据受区缺损部位、形状、面积及供区穿支血管穿出点, 在上臂中下段设计上臂内侧远端穿支蒂皮神经营养血管皮瓣, 在前臂近端设计肘下动脉穿支蒂螺旋桨皮瓣或骨间后动脉穿支蒂V-Y推进皮瓣, 转位修复肘关节周围创面;供区直接拉拢缝合, 或切取患肢较隐蔽区全厚皮片移植修复。术后对供、受区进行随访观察, 并在末次随访时从以下3个方面对修复效果进行评价。(1)由患者对治疗效果进行自我评价, 分为满意、一般、不满意3个等级;(2)肘关节功能评价:参照Mayo肘关节功能评分标准进行评价, 分为优、良、可、差4个等级;(3)综合评价:参考下肢踝关节周围创面修复评价标准进行评分, 16～21分为优, 11～15分为良, 6～10分为可, 0～5分为差, 同时计算优良比例, 即优、良例数之和/总例数×100%。结果共纳入51例患者, 男31例, 女20例;年龄16～87岁, 平均56.1岁...     

腺病毒介导神经营养素-3基因转染施万细胞

【目的】构建神经营养素-3(NT-3)基因转染的施万细胞。【方法】NT-3基因重组腺病毒(AdvNT-3)扩增、纯化和测定后，转染体外培养的施万细胞(SCs)。用免疫细胞化学和ELISA方法分别检测NT-3基因转染SCs的NT-3表达及培养液中NT-3的含量。【结果】实验中获得的AdvNT-3中外源基因序列与大鼠NT-3的DNA序列完全一致，与未基因转染SCs相比，NT-3基因转染SCs的NT-3阳性增强，培养液中NT-3含量增高。【结论】通过腺病毒介导可以获得NT-3过量表达的基因转染SCs。     

督脉电针治疗大鼠全横断性脊髓损伤的实验研究

目的　探讨督脉电针对大鼠全横断性脊髓损伤的行为和结构修复的影响。方法　用BBB评分法和爬网格试验检测全横断性脊髓损伤及督脉电针治疗后大鼠的运动功能 ,荧光金逆行标记法检测再生神经元 ,用生长相关蛋白 - 43(GAP - 43)免疫组织化学夫观察脊髓损伤区周围神经元GAP - 43表达。结果　督脉电针治疗后大鼠后肢运动功能有明显地恢复 ,损伤区脊髓组织退变减轻 ,躯体感觉运动区内锥体细胞层及红核内的神经元密度增大 ,脊髓组织内GAP - 43阳性神经元增多 ,在脊髓横断头侧端灰质内、躯体运动感觉区及红核内有少量被标记细胞。结论　督脉电针治疗可减轻脊髓损伤后的继发性损伤 ,促进脊髓下行纤维再生和脊髓功能恢复。     

携带SARS-CoV刺突蛋白N端片段重组腺病毒的构建

[目的]构建携带SARS冠状病毒刺突蛋白N端基因片段的重组腺病毒.[方法]从SARS病毒cDNA扩增刺突蛋白N端基因片段(-45～1469nt,截短的S1区,SN),插入腺病毒穿梭质粒pShuttle,通过体外连接法构建重组腺病毒Ad-SN.用Ad-SN感染Vero-E6细胞,通过RT-PCR和Western blot法检测SN的表达.[结果]克隆的SN基因序列与文献报道基本一致;Ad-SN基因组结构与预期一致.在Ad-SN感染的Vero-E6细胞中存在SN基因的转录和分泌型SN蛋白的表达.[结论]体外连接法是一种简便易行的重组腺病毒载体构建方法;重组腺病毒Ad-SN能正确表达分泌型SN蛋白,可用于诱导抗SARS免疫的动物实验研究.     

人神经营养素-3受体基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建

【目的】构建人神经营养素-3（neurotrophin-3，NT-3）受体（即酪氨酸蛋白激酶受体C，tyrosine protein kinase C，TrkC）基因重组的腺病毒表达载体。【方法】从人脑组织mRNA中扩增Trkc基因全长cDNA，定向克隆于穿梭质粒pShuttle中，获得一个带有CMV启动子的表达盒。再将表达盒与腺病毒骨架DNA（Adeno-X viral DNA）体外连接，形成重组腺病毒质粒（pAd-TrkC）。用pAd-TrkC转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒（Adeno-Trkc）。【结果】TrkC基因RT-PCR扩增产物为2478bp。Adeno-TrkC经PCR鉴定为正确重组子。【结论】应用体外连接法已构建了人TrkC重组腺病毒表达载体，这为进一步应用NT-3进行基因治疗中枢神经损伤奠定了基础。     

人神经营养素-3受体基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建

[目的]构建人神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)受体(即酪氨酸蛋白激酶受体C,tyrosine protein kinase C,TrkC)基因重组的腺病毒表达载体.[方法]从人脑组织mRNA中扩增TrkC基因全长cDNA,定向克隆于穿梭质粒pShuttle中,获得一个带有CMV启动子的表达盒.再将表达盒与腺病毒骨架DNA(Adeno-X viral DNA)体外连接,形成重组腺病毒质粒(pAd-TrkC).用pAd-TrkC转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(Adeno-TrkC).[结果]TrkC基因RT-PCR扩增产物为2 478 bp.Adeno-TrkC经PCR鉴定为正确重组子.[结论]应用体外连接法已构建了人TrkC重组腺病毒表达载体,这为进一步应用NT-3进行基因治疗中枢神经损伤奠定了基础.     

正交设计法优选半夏厚朴泡腾片制备工艺

目的:优化半夏厚朴泡腾片的制备工艺条件。方法:采用正交试验方法,以pH值、崩解时限、口感及硬度作为评价指标对泡腾片中柠檬酸与碳酸氢钠的配比、聚乙二醇6000的用量、甜蜜素的用量进行优化;并用HPLC法测定泡腾片中厚朴酚、和厚朴酚的含量。结果:确定了泡腾片的制备工艺,即柠檬酸∶碳酸氢钠=0.65∶1,聚乙二醇6000用量为8%,甜蜜素用量为1.0%。结论:该工艺稳定、可靠。