转染人骨形成蛋白2共培养条件下NIH3T3细胞生物学性状的观察

目的利用细胞共培养系统研究转基因诱导表达的分泌型人骨形成蛋白2（hBMP-2），对NIH3T3细胞超微结构和碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法用阳离子聚合物转染试剂将hBMP-2真核表达载体peDNA3．1-B2导入NIH3T3细胞，G418筛选获得阳性细胞克隆。免疫组化和酶联免疫吸附试验检测BMP-2胞内和胞外的表达，并利用细胞共培养系统Transwell，将转基因细胞与NIH3T3细胞共培养。结果转染hBMP-2基因的NIH3T3细胞胞内和胞外都有BMP-2的表达。与转基因细胞共培养的NIH3T3细胞在共培养后超微结构的变化和ALP的高表达，都提示其向成骨样细胞分化的趋势。结论经转基因诱导表达的分泌型BMP-2具有诱导成纤维细胞向成骨样细胞分化的作用。     

健康教育对长期住院慢性精神分裂症患者康复效果的影响

为了提高患者的生活质量，促进患者早日康复，我们积极开展健康教育的探索，现报告如下。     

X线平片、CT和MRI在骨关节创伤中的应用

X线平片、CT和MRI在骨关节创伤诊断中有非常重要的作用，它们各有优势，互为补充。骨科医生了解X线平片、CT和MRI各自的优势，根据病人具体情况，合理选择。达到既能明确诊断疾病，又能减少病人检查费用的目的。     

含KSHV vIL-6基因重组分泌型表达载体的构建及其分泌蛋白对内皮细胞增殖和血管生成能力影响的初探

目的:构建含卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-assoliated herpesvirus,KSHV)致瘤基因vIL-6的重组分泌型质粒.将其导入内皮细胞系EA.hy926中进行表达,并检测vIL-6对内皮细胞增殖和血管生成作用的影响.方法:根据本实验室先前构建的pvIL-6 F表达载体中的核酸...     

卡波氏肉瘤病毒K9基因重组慢病毒表达载体的构建及其编码蛋白功能初探

目的: 构建卡波氏肉瘤病毒（Kaposi′s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV）K9基因的重组慢病毒载体,并探究K9基因编码的病毒干扰素调节因子1（viral IFN regulatory factor 1,vIRF1）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）增殖的影响。方法: 根据K9基因的核酸序列设计聚合酶链式反应（PCR）的上下游引物。以实验室已有的真核表达载体pCI-K9-Flag为模板,PCR扩增K9基因序列。PCR产物经限制性内切酶双酶切后插入慢病毒载体pHAGE-CMV-MCS-Izs Green(简称pHAGE）中,构建重组慢病毒质粒pHAGE-K9。将pHAGE-K9质粒与包膜质粒pMD2.G、包装质粒psPAX2共同转染人胚肾上皮细胞（293 T细胞）,包装K9基因的重组慢病毒。采用病毒梯度稀释法测定病毒滴度。慢病毒感染HUVECs后,观察绿色荧光蛋白(GFP）的表达,蛋白质印迹法检测HUVECs中K9编码的vIRF1蛋白的表达。采用流式分选技术获得稳定表达vIRF1蛋白的HUVECs。运用细胞增殖实验检测vIRF1对HUVECs增殖的影响。结果： 核酸序列测定结果表明,重组慢病毒质粒pHAGE K9构建成功。蛋白质印迹结果显示,K9基因重组慢病毒感染HUVECs后其编码蛋白成功表达。细胞增殖实验结果表明,稳定表达vIRF1的HUVECs增殖能力显著强于对照组。结论： KSHV K9基因编码的vIRF1能够促进HUVECs的增殖。     

逆转录病毒介导Fcy::Fur融合基因联合5-FC治疗胶质瘤的体内试验研究

目的构建含融合自杀基因Fcy::Fur重组逆转录病毒,用自杀基因治疗系统Fcy::Fur/5-氟胞嘧啶(5-FC)对裸鼠胶质瘤进行体内抑瘤作用的实验研究。方法扩增Fcy::Fur基因并构建Fcy::Fur基因重组逆转录病毒载体;载体转染包装细胞获得高滴度病毒并转染鼠胶质瘤细胞C6,筛选并鉴定阳性转基因克隆;构建裸鼠荷胶质瘤动物模型,腹腔注射5-FC,观察裸鼠肿瘤重量变化及电镜、流式细胞仪(FCM)检测肿瘤的凋亡。结果PCR法扩增出全长Fcy::Fur基因,经测序证实序列正确;构建了PLXSN-Fcy::Fur逆转录病毒载体,载体转染包装细胞PT67,获得滴度为3.5×106CFU/mL的逆转录病毒;转染C6获转基因阳性克隆C6-Fcy::Fur,检测C6-Fcy::Fur有Fcy::Fur基因的mRNA表达;裸鼠前肢背部接种转基因细胞,成瘤后腹腔注射5-FC,转基因肿瘤的生长较对照组明显抑制。FCM法检测到凋亡峰,电镜观察到转基因肿瘤细胞有凋亡小体。结论AdE1CMVCD与5-FC联合在体内对胶质瘤有明显的抑制作用,为临床胶质瘤基因治疗提供了可靠的理论及应用依据。     

RT-PCR检测外周血K-ras基因突变和CA-199、CA-50联合检测在胰腺癌诊断中的作用

目的：研究外周血K—ras基因突变和CA-199、CA-50联合检测在胰腺癌诊断中的作用。方法：选择同一时期住院的14例胰腺癌患者和16例非胰腺癌患者．同时应用反转录PCR检测外周血K—ras基因突变和CA-199、CA-50检测,统计分析检测结果。结果：外周血K-ras基因突变检测对胰腺癌诊断的敏感度和特异度分别为42．9％和93．8％,胰腺癌患者CA．199、CA一50二者检测结果差异无显著性．K—ras基因突变和CA-199联合检测系列试验诊断胰腺癌的敏感度和特异度分别为35．7％和93．8％．平行试验的敏感度和特异度分别为78．6％和62．5％。部分胰腺癌患者外周血K-ras基因的检测结果和CA—199、CA-50值与胰腺癌病期呈一定的相关性,结论：RT—PCR检测外周血K—ras基因突变和CA—199联合检测可以弥补单一检测的不足,部分结果与临床病期有一定相关．有助于胰腺癌的辅助诊断,但敏感度偏低,应用临床还需进一步研究。     

含HIV-1 Tat基因重组反转录病毒表达载体构建与表达Tat蛋白功能检测

目的：构建含HIV-1 Tat基因重组反转录病毒表达载体及评价表达Tat蛋白的功能。方法：使用HindⅢ将HIV-1 Tat101蛋白编码基因从pEV质粒中切出，插入到表达质粒LZRSpBMN—Z中，构建成重组反转录病毒表达质粒IZRS-Tratl01。采用磷酸钙转染法将重组质粒LZRS-Tat101转染进含反转录病毒erw、gal和pol编码基因的包装细胞phoenix(φNX)中，嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系。免疫组化(IHC)染色检查Tat在临时转染和稳定转染删x细胞中的表达水平。收集临时转染和稳定转染包装细胞分泌的病毒上清，并分别感染293细胞，Western blot检测Tat在293中表达。与此同时，收集感染293细胞培养上清，加入到HL3T1细胞(HELa—HIV-1-LTR／CAT报告基因)中，共培养72h后收集细胞，提取蛋白作CAT活性检测。结果：①含Tat101基因重组反转录病毒表达质粒转染包装细胞后，Tat在临时转染φNX中表达水平显高于在稳定转染中的水平；②临时转染病感染293细胞，Tat在感染细胞中得到了表达，且分泌至上清中的Tat蛋白能够激活靶细胞HL3T1中HIV-1的LTR启动子，使得其下游的CAT基因得到表达。结论：重组IZRS-Tat101反转录病毒能够在其感染靶细胞中表达Tat蛋白，且表达蛋白具有转录激活功能。     

磁共振神经根成像对腰椎间盘病变的诊断价值

磁共振三维快速梯度回波成像在显示腰骶神经根病变部位,分析病变原因方面有一定优势.