胰升血糖素样肽-1类似物与甘精胰岛素治疗2型糖尿病患者疗效及安全性的Meta分析

目的评价胰升血糖素样肽-1(GLP-1)类似物与甘精胰岛素对采用口服降糖药(OADs)治疗但血糖控制不佳的T2DM患者疗效及安全性。方法采用Medline、PubMed、Embase、The National Register、Cochrane、Current Controlled Trials、中国生物医学文献数据库、中国期刊全文数据库、VIP、CNKI和万方数据库检索,查找符合标准的随机对照试验(RCTs)进行质量评价。结果最终纳入7篇RCTs,共2653例患者,其中,GLP-1类似物(包括艾塞那肽、利拉鲁肽)组1347例,甘精胰岛素组1306例。两组均可降低FPG、HbA1c水平,GLP-1类似物组降低HbA1c水平较甘精胰岛素组高,甘精胰岛素组降低FPG水平较GLP-1类似物组高(P<0.01)。GLP-1类似物组可降低体重,甘精胰岛素组可增加体重,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。GLP-1类似物组低血糖事件发生率较甘精胰岛素组降低43%。GLP-1类似物组胃肠道不良反应较甘精胰岛素组常见,多为恶心、呕吐,症状短暂、轻微。结论采用OADs治疗但血糖控制不佳的T2DM患者,GLP-1类似物和甘精胰岛素均可降低其FPG、HbA1c水平,但GLP-1类似物可降低体重,低血糖发生风险低,胃肠道不良反应较常见,症状短暂、轻微,是T2DM患者新的治疗选择。     

重组肿瘤坏死因子-α抗血清对大鼠实验性结肠炎的影响

目的 探讨灌胃给予肿瘤坏死因子-α(TNF-α)多克隆抗体对溃疡性结肠炎的作用。方法 以50mg／kg三硝基苯磺酸(TNBS)经肛门注入大鼠肠腔，复制大鼠溃疡性结肠炎模型；用兔抗人TNF-α多克隆抗体血清10mg／kg给大鼠灌胃，观察一氧化氮(N0)含量、髓过氧化物酶(MPO)活性及TNF-α在大鼠溃疡性结肠炎组织中的表达。结果 抗TNF-α多克隆抗体治疗可明显减轻溃疡性结肠炎的病理改变，抑制局部结肠组织NO的产生、MPO活性以及TNF-α表达。结论 抗TNF-α血清通过中和TNF-α，可抑制溃疡性结肠炎结肠组织表达TNF-α及炎性介质的释放，从而减轻溃疡性结肠炎的病理损伤。     

TNF受体封闭肽对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

目的：观察TNF受体封闭肽在体外对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法：用NBT的方法检测呼吸爆发；用RT—PCR检测大鼠腹腔巨噬细胞IL-1β mRNA和TNF-α mRNA水平；用Western blot检测大鼠腹腔巨噬细胞NF-kBp65核转位。结果：TNF受体封闭肪可完全拮抗TNF-α诱导大鼠腹腔巨噬细胞呼吸爆发，明显抑制TNF-α诱导的IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的转录，使腹腔巨噬细胞TNF-α诱导的NF-kBp65核转位明显减少。结论：TNF受体封闭肽在体外能有效抑制TNF-α诱导的大鼠腹腔巨噬细胞功能。     

NK92细胞的胞吐效应与SNAP-23蛋白转位相关

的研究SNAP-23蛋白在NK细胞系NK92细胞胞吐效应中的作用，探讨NK细胞胞吐的分子机制。方法利用已糖氨酶(β-hexosaminidase)释放实验检测NK细胞的胞吐作用。通过RT-PCR和Western blot显示NK92细胞中SNAP-23a mRNA和蛋白的表达，利用激光共聚焦显微镜扫描术确定靶细胞触发前后SNAP-23a在NK92细胞中的定位。结果NK细胞的胞吐作用在靶细胞刺激后2h明显，4～6h达高峰；NK92细胞组成性表达SNAP-23a mRNA和蛋白，靶细胞刺激前后蛋白表达量虽无明显差异，但其定位发生了显著改变：激光共聚焦显微镜扫描结果显示在静息NK92中SNAP-23a主要表达在胞浆内的颗粒上，经靶细胞刺激后逐渐向细胞膜发生转位，2h明显转位，4～6h几乎完全转位。结论NK细胞的胞吐效应与SNAP-23蛋白转位相关。     

人可溶性TNF受体(sTNFRI)在大肠杆菌中的表达及其活性鉴定

目的 :构建人可溶性TNF受体I(sTNFRI)基因表达载体 ,并在大肠杆菌中高效表达。方法 :用RT PCR扩增编码人TNFRI胞外段基因片段 ,将其插入到表达载体pET 2 8a ,并转入大肠杆菌进行表达。结果 :在IPTG诱导下 ,转入外源基因的大肠杆菌BL 2 1可高效表达sTNFRI蛋白 ,SDS PAGE显示在 2 7kD处有一特异表达条带 ,其表达量占菌体蛋白总量的 31%。纯化的sTNFRI可有效封闭TNF对L92 9细胞的胞毒效应 ;间接免疫荧光显示它可特异性抑制TNF与靶细胞TNFR的结合。结论 :通过基因工程技术获得了人sTNFRI重组蛋白。     

跨膜型肿瘤坏死因子信号肽氨基酸部分缺失对细胞毒作用影响

目的　探讨跨膜型肿瘤坏死因子 (TM TNF)信号肽在其杀瘤中的作用。方法　用PCR构建突变体及体外转录、翻译蛋白质 ,分别获得TM TNF信号肽胞浆段、胞外与分泌型肿瘤坏死因子(S TNF)连接段以及部分跨膜段缺失即信号肽第 73～ 4 7、 73～ 34、 34～ 1、 2 1～ 1位氨基酸缺失的TM TNF体外翻译蛋白。用MTT法检测其对HL 6 0细胞的杀伤率。结果　 34～ 1、 2 1～ 1位氨基酸缺失可提高TM TNF对HL 6 0细胞的杀伤 , 73～ 4 7位氨基酸缺失对其杀瘤力无明显作用 ,而 73～ 34位氨基酸缺失可使其杀瘤率明显下降。结论　去除信号肽胞外段可提高TM TNF α对HL 6 0细胞的杀伤率 ,而TM TNF α信号肽 4 7～ 34位氨基酸在其杀瘤过程中有重要作用。     

Syntaxin 4蛋白在NK细胞中的表达及与SNAP-23蛋白的相互作用

目的　研究NK细胞中与囊泡分泌有关的膜蛋白syntaxin 4的表达和与其它蛋白的相互作用 ,为进一步研究NK细胞免疫效应的分泌调节分子机制提供新思路。方法　RT PCR和免疫印迹方法检测人类NK细胞syntaxin 4的表达 ,免疫荧光显微镜观察静息状态和经靶细胞激活后syntaxin4蛋白在NK92细胞中表达和分布的变化 ,免疫共沉淀检测syntaxin 4蛋白和SNAP 2 3蛋白的相互作用。结果　人类NK细胞中在mRNA水平和蛋白质水平均有syntaxin 4组成性表达 ,蛋白产物主要分布在细胞膜上。异种靶细胞刺激后 ,syntaxin 4蛋白有明显的细胞内定位变化和极化现象。syntaxin 4蛋白和SNAP 2 3蛋白有较强的相互作用。结论　syntaxin 4蛋白与NK细胞对靶细胞的识别过程有关 ,并与胞内膜交换相关分子SNAP 2 3蛋白相互作用 ,可作为研究干预移植排斥反应中杀伤性胞吐的新目标分子。     

TM-TNF-α介导的反向信号下调sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的表达

目的：观测TM-TNF-α介导的反向信号对sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的影响，构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变体，并进一步验证。方法：sTNF-α激活U937细胞后撤除，加入可溶性TNFR（sTNFRⅠ）激活TM-TNF-α介导的反向信号，用RT—PCR方法检测反向信号对活化后U937细胞因子IL-1β、IL-8 mRNA的影响；采用分子克隆技术构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变重组体，采用电穿孔法转染U937，并用Western blot检测蛋白表达。结果：sTNF-α激活U937细胞后撤除，高表达的细胞因子IL-1β、IL-8 mRNA随着时间的延长而逐渐降低；sTNFRⅠ激活的TM-TNF-α介导的反向信号可加速细胞因子mRNA的降解，且使mRNA降解至50％的时间分别由约75、60分钟缩短至约45、35分钟。成功构建TM-TNF—α胞浆段缺失突变重组体pcDNA3．0-△csTM-TNF—α并瞬时转染U937细胞，Western blot结果显示U937细胞膜表面除表达26000的野生型TM-TNF-α蛋白外，还可表达约20000的突变体蛋白。这种缺失胞浆段的突变体蛋白可竞争性抑制反向信号对活化后U937细胞因子mRNA的下调作用。结论：TM-TNF-α介导的反向信号可下调sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的表达；且TM-TNF-α胞浆段为其介导的反向信号所必需。     

跨膜型TNF-α细胞毒作用与其功能域的关系

目的：探讨跨膜型TNF—α(TM-TNFα)的细胞毒作用及其功能域的关系。方法：采用重组PCR对TM-TNFα基因进行定点突变，在微粒体膜的存在下体外转录、翻译突变体，并观察这些突变体的胞毒作用。结果：通过重组PCR分别获得TM-TNFα第-71、31、35、87、95、143与147位氨基酸置换的突变体，这7种突变体对L929细胞系的细胞毒作用，与野生型TM-TNFα相比：第-71、143位氨基酸单个置换使TM-TNFα胞毒作用下降4倍以上，35、95、147位单个置换使TM-TNFα胞毒作用下降1．5—2．5；而第31、87与133位氨基酸突变则对TM-TNFα杀伤作用无影响。结论：除-71位氨基酸外，以上6个位点的氨基酸均参与分泌型TNF—α(S-TNFα)的胞毒功能，提示TM-TNFα和S-TNFα发挥细胞毒功能的功能域可能不完全相同。     

TNF受体封闭肽对大鼠佐剂性关节炎的影响

目的　观察肿瘤坏死因子 (TNF)受体封闭肽对大鼠佐剂性关节炎的影响。方法　注射弗氏完全佐剂建立大鼠佐剂性关节炎模型 ,在关节局部注射TNF受体封闭肽 ,观察对大鼠关节肿胀度、关节组织病理改变及腹腔巨噬细胞表达IL 1βmRNA和TNF αmRNA(RT PCR)的影响。 结果　建立了与人类类风湿性关节炎极其相似的大鼠佐剂性关节炎模型 ;TNF受体封闭肽治疗 10d后 ,大鼠踝关节肿胀完全受到抑制 ;关节组织内炎症细胞浸润减少 ,炎性病理损伤明显减轻 ;大鼠腹腔巨噬细胞表达的TNF αmRNA和IL 1βmRNA明显减低。 结论　TNF受体封闭肽通过抑制佐剂性关节炎TNF α和IL 1的产生 ,而发挥抗炎作用 ,明显减轻关节的病理性损伤 ,有效抑制关节炎的临床进程。