基于甲羟戊酸途径的盐酸小檗碱体外抗肺癌细胞药效及机制

目的 探究盐酸小檗碱（BBH）通过甲羟戊酸（MVA）途径抗肺癌细胞的药效及机制。方法 以人源肺癌细胞A549与鼠源肺癌细胞LLC作为研究对象，细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测BBH（10、20、30、40、50 μmol·L^-1）对2种肺癌细胞增殖的抑制作用（48 h）；然后采用细胞划痕实验检测BBH（40 μmol·L^-1）对A549与LLC细胞迁移能力的影响（24、48 h）；集落形成实验比较BBH（10、20、40 μmol·L^-1）给药下2种细胞的集落形成能力；试剂盒检测BBH（40 μmol·L^-1）对A549与LLC细胞中乙酰辅酶A（A-CoA）和总胆固醇（TC）含量的影响；运用AutoDock Vina软件对接BBH与MVA途径调控蛋白固醇调节结合原件蛋白2（SREBP2）；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测BBH（40 μmol·L^-1）对A549与LLC细胞中MVA途径9个相关mRNA［羟甲基戊二酸单酰辅酶A合酶1（HMGCS1）、羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMGCR）、甲羟戊酸激酶（MVK）、磷酸甲羟戊酸激酶（PMVK）、5-焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶（MVD）、法尼基焦磷酸合酶（FDPS）、角鲨烯单加氧酶（SQLE）、法尼基二磷酸法尼基转移酶1（FDFT1）、异戊二烯基二磷酸合酶1（GGPS1）］表达的影响；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测BBH（40 μmol·L^-1）对2种细胞中MVA途径3个基因（HMGCS1、HMGCR、FDFT1）的关键蛋白表达的影响；使用TCGA数据库分析HMGCS1、HMGCR、FDFT1与SREBP2的转录基因SREBF2在非小细胞肺癌（NSCLC）中的关系。结果 与空白组比较，BBH组A549与LLC细胞的增殖、迁移与集落形成能力均显著降低（P<0.01）；细胞的凋亡率显著升高（P<0.01）；分子对接表明BBH与SREBP2具有良好的对接活性；与空白组比较，BBH组MVA途径的代谢产物A-CoA与TC的含量均显著下降（P<0.01）；给药BBH后，A549与LLC细胞中MVA途径基因HMGCS1、HMGCR、MVK、PMVK、MVD、FDPS、SQLE、FDFT1、GGPS1 mRNA的表达降低（P<0.01），HMGCS1、HMGCR、FDFT1蛋白水平明显下降（P<0.05，P<0.01）。在NSCLC患者中，HMGCS1、HMGCR、FDFT1与SREBF2呈高度相关（R=0.54、R=0.57、R=0.48）。结论 BBH可抑制A549与LLC细胞的增殖、迁移与集落形成能力并促进细胞的凋亡，其原因可能与BBH结合SREBP2调控MVA途径有关。     

基于质量和药理效应比较姜半夏一体化饮片与传统饮片

目的 比较姜半夏一体化饮片与传统饮片在成分含量及药理作用方面的一致性与差异性，以阐释姜半夏一体化生产的合理性。方法 采用薄层色谱法（TLC）、浸出物测定法、紫外分光光度法和高效液相色谱法（HPLC），分别对姜半夏一体化饮片和传统饮片的TLC鉴别、水溶性浸出物、白矾残留量及草酸钙针晶、蛋白质、总生物碱、多糖、3种核苷（肌苷、鸟苷、腺苷）含量进行测定，并进行统计学比较；采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型和家兔眼结膜刺激性实验，对姜半夏一体化饮片和传统饮片的抗炎作用和刺激性进行比较。结果 姜半夏一体化饮片的白矾残留量、草酸钙针晶含量、蛋白质含量、多糖含量、肌苷含量、鸟苷含量及3种核苷总量较传统饮片分别降低16.95%、21.27%、23.78%、4.74%、52.12%、0.24%、26.04%；水溶性浸出物、总生物碱及腺苷含量较传统饮片分别增高7.62%、114.83%、125.42%；姜半夏一体化饮片与传统饮片对小鼠耳肿胀均具有明显的抑制效果，但两者之间差异无统计学意义，提示抗炎作用具有一致性；2种姜半夏饮片对兔眼结膜均无刺激性，且两者之间差异无统计学意义，提示安全性相似。结论 姜半夏一体化饮片与传统饮片的成分含量存在一定差异、抗炎和刺激性作用相近，且一体化饮片质量略优于传统饮片，为姜半夏一体化饮片的工业生产和临床应用提供了参考依据。     

正交设计法优选盾叶薯蓣总皂苷的提取工艺

目的:确定盾叶薯蓣总皂苷的最佳提取工艺。方法:采用正交实验设计进行优选,对提取物进行盐酸水解、石油醚提取制备供试液。以薯蓣皂苷元作为对照品,采用比色法洲定含量。结果:优选提取工艺为:样品粗粒,乙醇浓度80%,溶剂用量8倍,提取次数2次(2 h,1 h)。结论:此工艺简单,适于工业化生产。     

正交设计法优选红花渗漉工艺

目的：优选红花最佳提取工艺。方法：采用L9（3^4）正交试验，以红花黄色素和羟基红花黄色素A的含量作为评价指标，对红花的渗漉工艺进行研究。结果：最佳提取条件是以60％乙醇浸渍12h，25倍量进行渗漉，渗漉流速为0.5ml·min^-1。结论：该优选条件实验结果可靠，方法简便，适于生产中该中药的提取。     

海风藤挥发油成分研究

目的:弄清海风藤挥发油的化学成分及不同提取方法对其成分的影响。方法:采用水蒸气蒸馏法及超临界CO2萃取法分别提取挥发油;通过GC-MS分析其化学成分。结果:两种方法提取的挥发油成分有明显区别,并分析出它们有29个共同成分。     

不同产地菝葜中白藜芦醇的含量比较

目的：比较不同产地菝葜中有效成分白藜芦醇的含量。方法：对采自我国不同产地的菝葜样品进行成分分析比较,以菝葜活性成分白藜芦醇为指标,采用高效液相色谱法测定其含量。结果：不同产地菝葜中白藜芦醇的含量有显著差异。结论：产自安徽潜山菝葜中白藜芦醇的含量显著高于其他产地。     

张力带内固定治疗髌骨骨折83例体会

1996年3月～2006年10月,我们采用张力带内固定治疗髌骨骨折83例,取得良好的效果.现报告如下. 临床资料:本组83例髌骨骨折患者,男62例,女21例;年龄19～79岁,平均47.2岁;骨折位于右侧56例,左侧27例;闭合性骨折70例,开放性骨折13例;横断性骨折52例,粉碎性骨折30例,两极撕脱性骨折1例.     

非血缘关系脐血造血干细胞移植治疗28例恶性血液病患者

山东省脐带血造血干细胞库自1999年12月至今，已冻存脐血8000份，并为临床移植提供脐血110份。现将2001年8月至2002年12月为28例恶性血液病患者提供脐血进行非血缘脐血移植（UCBT）的长期随访结果报告如下：     

基于能量代谢的姜黄连炮制机制初探

目的探究姜黄连炮制前后对大鼠能量代谢的影响差异,阐明姜制黄连药性的改变与能量代谢的关系。方法分别制备生黄连、姜黄连水煎液,大鼠分别ig给予生黄连、姜黄连水煎液15g/kg,每天1次,连续给药7d,取大鼠血浆,检测糖酵解、三羧酸循环和氧化磷酸化3条能量代谢途径中关键酶的活性,并采用主成分分析法对检测结果进行分析,筛选出姜黄连炮制前后能量代谢发生主要变化的途径和关键酶。结果与对照组比较,生黄连组己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸激酶(PK)及线粒体呼吸链复合体I、II、III、IV活性均显著下降,柠檬酸合酶(CS)、异柠檬酸脱氢酶(ICD)、α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)水平均显著下降;姜黄连组PFK、PK及线粒体呼吸链复合体II、III、IV的活性均显著降低,HK和线粒体呼吸链复合体I有一定程度下降,但差异不显著,α-KGDH水平显著降低,CS和ICD水平有一定程度降低,但差异不显著;与生黄连组比较,姜黄连组HK、PFK、PK及线粒体呼吸链复合体I、II、III活性均显著升高,CS、ICD、α-KGDH水平均显著升高,线粒体呼吸链复合体IV没有显著变化。通过主成分分析提取了2个主成分,其中氧化磷酸化途径中复合体II和复合体III分别对主成分2和主成分1有最大贡献率0.916、0.873。结论黄连经姜制后寒凉之性减弱,可能是因为减弱了黄连对氧化磷酸化途径中线粒体呼吸链复合体II和III的抑制作用。     

非血缘关系双份脐血移植治疗血液系统疾病19例分析

自1988年首例HLA相合的相关脐血移植(LICBT)获得成功以来,脐血移植发展迅速.由于受单份脐血细胞数量的限制,UCBT在成人造血干细胞移植中的地位尚存争议.进行双份脐血移植(double-unit UCBT)可增加细胞数量[1].我们总结了2001年5月至2006年12月接受非血缘关系双份脐血移植的19例血液病患者的长期随访情况.