靶向CD40的shRNA干扰抗大鼠异体肢体移植急性排斥反应的实验研究

目的 探讨靶向CD40的RNA干扰对大鼠异体肢体移植急性排斥反应的影响. 方法以纯系SD大鼠为供体,纯系Wistar大鼠为受体,行同种异体右后肢移植.27只大鼠肢体移植后随机分为三组,A组:注射入梭华.Sofast.siCD40-2/pSilencer载体复合物600 μL;B组:注射Sofast-pSilencer4.1-CMV neo空载体复合物600 μL;C组:注射生理盐水600μL,以上均通过阴茎背静脉注射.观察移植物排斥反应征象及存活情况,并于第7天对产生免疫耐受大鼠进行混合淋巴细胞反应,同时进行组织学检查. 结果与B、C组相比,A组移植物发生排斥反应的时间及存活时间均显著延长,差异有统计学意义(P＜0.01)(＞13 d),未见排斥反应征象;B、C组均于术后近期发牛排斥反应.A组大鼠对供体的淋巴细胞呈现低反应性,移植的供体同系大鼠的肢体得以存活. 结论术后不应用免疫抑制剂的情况下,靶向CD40的shRNA干扰可以抗大鼠异体肢体移植急性排斥反应.     

带血管蒂组织瓣移位修复膝以下软组织缺损和畸形(附5例报告)

本文介绍了临床应用带蒂组织瓣修复膝以下软组织缺损5例,组织瓣均成活,获得满意疗效。同时讨论了所应用组织瓣的优点及手术中的注意事项。     

融合基因骨形态发生蛋白-4/7重组腺相关病毒载体转染对骨髓基质干细胞成骨活性的作用

目的 应用高效细菌内同源重组系统pAd-Easy制备融合基因骨形态发生蛋白-4/7(BMP-4/7)基因的重组腺相关病毒(AAV),转染兔骨髓幕质干细胞(BMSCs),检测BMP-4/7的成骨活性.方法 采用RT-PCR一步法和基因重组法,从胎盘组织中克隆BMP-4和BMP-7成熟肽cDNA,获取BMP-4/7融合基因,克隆到pGEM质粒中;从pGEM-BMP-4/7质粒中切取BMP-4/7融合基因克隆到穿梭载体,在大肠杆菌内重组,在293细胞中构建AAV-BMP-4/7重组腺相关病毒载体;采用SDS-PAGE电泳榆测BMP-4/7融合基因蛋白在大肠杆菌的表达;采用ELISA法检测融合基因BMP-4/7在BMSCB中的表达.AAV-BMP4/7转染兔BMSCs细胞7、14 d后,行碱性磷酸酶及骨钙素含量测定,观察成骨活性,以非转染组作为对照. 结果成功构建高滴度的携带BMP-4/7融合基因的重组腺相关病毒AAV.BMP-4/7.AAV-BMPd/7重组质粒载体转化大肠杆菌进行诱导表达,SDS-PAGE电泳可见29～830 KD蛋白带,大多数蛋白存在于包涵体内.ELISA检测显示经AAV转染的BMSCs中BMP-4/7蛋白有表达,随着转染MOI值的增加,BMP-4/7蛋白的表达增高(P<0.01).AAV-BMP4/7转染细胞后,碱性磷酸酶及骨钙素含量均明显增高,并与转染后诱导培养的时间呈正相关,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01). 结论融合基因BMP-4/7可提高BMPs表达水平,有成骨活性,通过AAV可稳定表达.     

异体手移植的组织配型探讨

目的：研究组织配型在异体肢体移植中的基础作用和意义。方法：对患者和供者进行ABO血型和Rh血型，群体反应性抗体（PRA）检测及淋巴细胞毒性试验，测定人类白细胞抗原（HLA），结果：ABO血型（B－B）Rh血型相符，PRA和淋巴毒性交叉实验均为阴性，人类白细胞抗原（HLA）配型HLA－B，D，DR，DQ位点有4个抗原相合，手术后联合免疫抑制剂，移植双手成功，结论：理想的组织配型可避免异体手移植发生排斥反应，提高异体手移植成功率。     

骨囊肿植骨后持续被动运动促进骨愈合的疗效观察

Background: Bony cyst is a kind of common benign bone disease, for which, cause is unclear. Multiple bony cyst is rare in clinic. It is supposed metabolic and genetic factors may be involved. People aged 5～ 15 years are commonly affected population (Female: Male 1:2).     

应用骨髓基质细胞及组织工程方法修复兔桡骨实验性缺损

背景：应用干细胞移植及组织工程的方法修复骨缺损是近年来研究的热点。目的：观察应用自体骨髓基质细胞的组织工程骨修复骨缺损的效果。设计：左右侧对照实验。单位：哈尔滨医科大学第一临床医学院实验中心。材料：10-个月新西兰大白兔12只，雌雄不限，体质量2～2．5k。方法：实验于2002-06／2003-06在哈尔滨医科大学第一临床医学院实验中心完成。将兔自体骨髓基质细胞经淋巴细胞分离液分离培养、传代扩增。取兔12只行桡骨中段截取1．5cm骨质，造成完全骨缺损。于左侧缺损处植入载有骨髓基质细胞的胶原海绵，右侧植入单纯胶原海绵对照。12周后麻醉状态处死动物，比较基质细胞和胶原海绵复合物移植与单纯胶原移植治疗骨缺损的疗效。x射线片评价标准按骨缺损修复分期方法（分为0-5级，5级为骨缺损全部被新骨替代，0级为无新骨修复）。主要观察指标：兔桡骨缺损处大体观察，X射线观察，组织化学观察及电镜观察结果。结果：纳入12只兔均进入结果分析。①两侧兔桡骨缺损处大体观察：第12周实验组骨缺损处骨痂坚实突出于骨缺损处，与断端连续性好。对照侧无连续骨痂通过骨缺损处，断端间有纤维组织连接。②两侧兔桡骨缺损处X射线观察：在第12周实验侧有连续骨痂通过骨缺损处，髓腔通畅，塑形不完全。对照侧无连续骨痂通过断端。③两侧兔桡骨缺损处组织学观察：第12周实验侧骨缺损处可见大量成骨细胞及新生基质。对照侧仅在断端间见少量骨细胞，断端处为纤维组织充填。④兔桡骨缺损电镜观察：实验侧成骨细胞接近正常骨细胞可见大量丰富扩张内质网，蛋白合成旺盛，细胞器含量丰富。结论：骨髓基质细胞作为一种骨源干细胞，具有良好的成骨作用，经过扩增可以用作种子细胞，通过组织工程的方法可以修复骨缺损性疾病。     

高位颈椎管内肿瘤显微手术切除及颈椎稳定性重建

高位颈椎(C1～4)管内肿瘤在临床并不少见,由于肿瘤所处部位解剖结构复杂,毗邻重要神经血管组织,生物力学情况特殊,手术治疗难度高、风险大.目前治疗上多单纯应用显微手术方法进行切除,早期疗效满意,但常并发晚期高位颈椎不稳、鹅颈畸形及脊髓迟发性损伤等并发症,远期疗效欠佳.我们在显微手术切除肿瘤同时,应用颈椎后路内固定技术重建颈椎稳定性,临床效果满意,现报告如下.     

小隐静脉-腓肠神经逆行筋膜瓣的临床应用

目的 探讨应用小隐静脉-腓肠神经筋膜瓣联合全厚皮片移植修复小腿远段及足踝部软组织缺损的临床疗效. 方法 在小腿后侧设计小隐静脉-腓肠神经的筋膜瓣联合全厚皮片移植治疗小腿远段及足踝部单纯软组织缺损12例,软组织缺损伴胫骨骨髓炎3例、跟骨骨髓炎2例,皮肤缺损范围3cm×5 cm～9 cm×13 cm,切取筋膜瓣最大13 cm×18 ca.供筋膜瓣区保留皮肤及髂腹股沟取皮区皮肤均直接缝合. 结果 术后17例筋膜瓣联合全厚植皮均完全成活,成功治愈软组织缺损及骨髓炎,筋膜瓣供区、受区以及髂腹股沟取皮区均一期愈合,所有病例获得随访,随访时间为6～12个月,平均9个月,外形平整美观,供区保留皮肤感觉正常. 结论 带小隐静脉-腓肠神经筋膜瓣联合全厚皮片移植既能充分治愈小腿远段及足踝区软组织缺损以及骨髓炎,同时也能最大程度保护患肢功能及整体外观.     

小腿外侧皮瓣复合二期皮瓣扩张修复足跟缺损

足跟缺损在交通事故中出现较多，尤其在高速运动中的绞伤、摩擦、拖位常导致小腿足跟的皮肤软组织损伤，轻者皮肤缺损，跟骨外露，重者会导致跟骨缺损，此种损伤治疗上比较复杂，常常需要转移皮瓣来修复，以保证足跟软组织厚度，高度及需磨性。我院自2002年采用小腿外侧皮瓣复合二期皮瓣扩张修复足跟缺损患者7例，取得良好效果。     

第二届海峡两岸矫形外科研讨会暨学习班纪要

第二届海峡两岸矫形外科研讨会于2004年8月13-17日在黑龙江省哈尔演市召开，参加会议的代表分别来自22个省（含台湾省）、自治区、直辖市、中国人民解放军以及中国人民武装警察部队。他们中有多年从事骨科临床的老专家，更多的是从事骨科临床一线工作的中青年专家学者以及来自康复医疗，康复工程及临床护理方面的代表。大会共收到论文206篇，大会宣读论文49篇。大会的主题是展示祖国海峡两岸矫形外科领域的临床与基础研究成果