喹诺酮类抗生素对体外获取耐氟嗪酸结核菌的抗菌机制研究

目的:如何早期判断结核菌是否对氟嗪酸已经产生耐药,如何划分结核菌对氟嗪酸敏感与耐药界限是临床工作中殛待解决的问题.     

结核分枝杆菌黏附素HBHA在结核病免疫学诊断中的应用

目的 探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝黏附素(Heparin-binding haemagglutinin adhesin,HBHA)在结核病免疫诊断方面的应用价值.方法 将在苏通培养基中培养至稳定期的卡介苗菌株(BCG)菌体超声裂解,离心后取上清并通过CL-6B层析柱,利用含0～500 mmol/L氯化钠的磷酸盐缓冲溶液(PBS)进行梯度洗脱后获得天然HBHA.以BCG基因组为模板PCR扩增结核分枝杆菌hbha基因片段,质粒pET-32a为载体,大肠杆菌作为宿主菌制备原核表达的HBHA重组蛋白.以纯化的天然HBHA蛋白和原核表达的HBHA蛋白为包被抗原,分别对肺结核组、肺外结核组、PPD阳性和PPD阴性健康对照组各47例血清通过ELISA方法检测抗HBHA的抗体水平.应用SPSS 11.5统计软件对各研究组数据进行方差齐性检验,然后进行t检验,并计算各研究组的敏感度和特异度.结果 含有375 mmol/L氯化钠的PBS洗脱液可以洗脱获得较纯的天然HBHA蛋白.利用重组HBHA所带的组氨酸标签进行特异分离、纯化.ELISA检测结果表明天然HBHA蛋白和重组HBHA蛋白、PPD阳性和PPD阴性健康对照组之间血清抗体水平差异不明显.肺结核组与肺外结核组的血清抗体ELISA检测的吸光度值在散点图中分布有明显差异,肺结核组吸光度值集中分布在0.30～0.40之间,肺外结核组吸光度值分布在0.35～0.45之间,经统计学检验结果差异具有统计学意义(t=12.224,P＜0.05).结核组(肺结核和肺外结核)与对照组(PPD阴性,PPD阳性)吸光度值分布具有显著不同,对照组全部小于0.30,结核组吸光度值则集中分布于0.30～0.45之间.经统计学检验(t=25.909,P＜0.05)血清抗体水平具有显著性差异.结论 结核分枝杆菌黏附素HBHA在结核病免疫学诊断的应用中具有较好的特异度和敏感度,有望用于结核病、尤其是肺外结核病的实验室辅助诊断.     

脊柱结核脓液中结核分枝杆菌的培养及菌种鉴定

目的：利用脊柱结核术中所取得的脓液进行结核分枝杆菌的培养及菌种鉴定，以了解脊柱结核感染菌种病源学的情况，为其病源学及耐药性方面的进一步研究做工作基础准备。方法：将脊柱结核病灶中的脓液经前处理后接种于改良罗氏培养基上，4～8周后观察结果和脓液涂片检查。结果：1．43份脊柱结核脓液中，应用改良罗氏法培养出临床分离株13株，阳性率为30．1％；2．涂片阳性者培养的阳性率较高；3．化疗时间短、时间在两月以内者，其培养的阳性率较高；结论：脊柱结核感染HIV阴性者的菌种以人型为主。     

观察改良的药物敏感性检测法对检出耐药结核分枝杆菌的影响

目的利用经改良的最低抑菌浓度法（IMIC）检测结核分枝杆菌临床分离株对异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素和氧氟沙星的药物敏感性,观察其对耐药结核分枝杆菌检出的影响。方法利用改良的最低抑菌浓度法检测135株临床分离株对INH、RFP、EMB、SM及OFLX的敏感性。结果在相同的药物浓度中,与接种1×10^5/ml菌量的试验管相比135株接种1×10^7/ml活菌数的试管中有68.89%的结果与之相同,有31.1%的结果与之不相同。判断结果由阴性转阳性的标本共有20株,（其中耐RFP的1株、耐INH的3株、耐OFLX的3株、耐EMB的5株以及耐SM的8株）约占135株受试菌株总数的14.8%。结论利用改良的最低抑菌浓度法可发现潜在的耐药结核病患者,提高耐药菌的检出率。     

应用不同引物检测耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变对结果判定的影响

目的探讨以PCR-SSCP技术为基础,应用不同引物检测耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变以及固定/终止液的组成对判定结果可能会产生的影响。方法采用2对引物,经PCR-SSCP检测,利用银染显色的方法显现耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变的DNA单链位移。结果对比标准株H37Rv及H37Ra gyrA基因的单链带位置,在被测试的89株菌株中发生位置变化的;对氧氟沙星的耐药程度〉10μg/ml的分别有4株与14株,约占89株检测总数的4.49%和87.5%,对氧氟沙星的耐药程度介于≥2且≤10μg/ml之间的26株中,有与标准株gyrA基因的单链带位置发生改变的分别有20株与7株,约占89株检测总数的22.47%和7.87%;对氧氟沙星的耐药程度〈2μg/ml的47株中分别有2株与11株,约占89株检测总数的2.25%和12.36%。用含5.0%乙醇和4.5‰冰醋酸配比的固定/终止液可为利用银染法显现核酸凝胶分离DNA提供温和的反应环境,操作过程方便,观测效果较为理想。结论应用不同引物检测耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变会对结果的判定产生影响,采用含5.0%乙醇、4.5‰冰醋酸的固定/终止液可为应用非变性聚丙烯酰胺凝胶分离核酸检测的银染着色法提供温和的反应环境,并产生清晰可辨的被检测标本的DNA单链条带。     

细菌whi基因及其在分枝杆菌中的特点和功能

whi基因是根据链霉菌中形成白色孢子突变体的相关基因来命名的。目前发现的whi基因分别为除whiC基因和whiF外的whiA～O中的13种基因。存在whi基因的细菌种类已经在链霉菌和分枝杆菌等17种细菌属中发现。目前对两者的研究资料较少,而研究较多的是whiB家族,其中whiB2、whiB3和whiB7具有重要的临床意义。该文对现阶段严重威胁人类健康的致病分枝杆菌属中存在的whi基因(whiA、whiD和whiB)其功能与特点进行讨论。     

结核分枝杆菌黏附素HBHA的克隆表达及其免疫原性研究

目的应用克隆表达技术从大肠杆菌中获得重组的结核分枝杆菌黏附素HBHA蛋白，并以重组HBHA免疫小鼠观察抗HBHA抗体的产生并探讨其免疫原性。方法①应用PCR技术扩增结核分枝杆菌hbhA编码基因的特异片段。②结核分枝杆菌hbhA编码基因的克隆及在大肠杆菌中的表达。③应用克隆表达的HBHA蛋白免疫小鼠，并用ELISA法测定小鼠血清抗HBHA抗体水平。结果①结核分枝杆菌hbhA基因成功地克隆到PET-32a（＋）表达载体中，并在大肠杆菌中获得了高效表达。重组HBHA主要存在于包涵体中，纯化包涵体并获得了大量的重组HBHA。②重组HBHA免疫小鼠可产生较高水平的抗HBHA抗体（〉1：102400），这表明重组HBHA在纯化过程中仍保留较强的免疫原性。结论结核分枝杆菌黏附素HBHA具有较好的免疫原性。     

多中心评价逆向系统印迹分析在临床结核分枝杆菌分离株耐药性检测中的应用

一项多中心研究用于评价逆向系统印迹分析(RLB)以检测结核分枝杆菌临床分离株对利复平(RFP)、异烟肼(INH)、链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)的耐药性。将对野生株特异的几种寡核苷酸及选择(与耐药性相关的)ropB、inhA、ahvC、rpsl，rrs和embB基因密码子的突变等位基因固定在尼龙膜上。     

单链构象多态性与核酸杂交联合检测耐氧氟沙星的结核分枝杆菌

目的探讨聚合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP）并Southern杂交检测耐氧氟沙星（OFLX）结核分枝杆菌的可行性，并探索结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药的界限。方法（1）体外筛选人工诱变的耐OFLX的耐药突变株，并检测OFLX对这些耐药株的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）。（2）扩增结核分枝杆菌的gyrA基因，包括H37 Rv1株、H37 Ra 1株、临床分离的OFLX敏感株10株及人工诱变的耐OFLX H37 Rv（17株）、H37Ra（17株）及临床分离菌株（51株）共计85株，并对此扩增产物进行SSCP分析及Southern杂交，对比观察耐OFLX结核分枝杆菌的核酸单链条带位移的变化。为了验证PCR-SSCP并Southem杂交结果的可重复性，对36株临床分离的耐OFLX菌株的耐药界限进行初步检测。结果经PCR-SSCP及Southern杂交，85株人工诱变的耐OFLX菌株，全部检测到gyrA基因突变。在OFLX 10μg／ml这一点上，明显地存在着一个结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药并存的交叉区。对36株临床分离的OFLX耐药菌的PCR-SSCP合并Southem杂交检测结果显示，对比标准株H37Ra，在临床分离的耐OFLX菌株间观察到了类似的因单链构象变化而引起的单链位移的结果。结论PCR-SSCP合并Southern杂交可以清晰地区分对OFLX敏感与耐药的菌株，以100μg／m1为界作为判别结核分枝杆菌对OFLX是否已经产生耐药的标准是适宜的。     

黄芪对T细胞E受体的影响

<正> 近年来,关于黄芪对机体免疫增强作用已有不少研究。例如,对单核巨噬细胞系统的吞噬功能,对T细胞的转化功能等有明显增强作用。但对T细胞E受体的影响,尚未见有文献报告。本文仅就黄芪对T细胞E受体的影响,简要报告如下。