HPLC-MS/MS 法在检测慢性粒细胞白血病患者帕纳替尼血药浓度中的应用

目的　建立测定慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia, CML) 患者血浆帕纳替尼浓度的高效液相色谱- 串联质谱法（HPLC-MS/MS）,并应用于帕纳替尼血药浓度日常监测,为帕纳替尼合理使用提供实验室依据。方法　采用含内标（帕纳替尼-d8）的甲醇对患者血浆进行沉淀蛋白处理。色谱柱为Ultimate XB-C18,柱温60℃,流动相为甲醇相（0.1% 甲酸）和水相（0.1% 甲酸和2 mmol/L 乙酸铵）,梯度洗脱。质谱检测方式为电喷雾离子阱正离子模式,MRM 扫描,同时监测帕纳替尼m/z 533.1>260.1 和帕纳替尼-d8 m/z 541.2>260.1。采用内标法定量,以帕纳替尼和帕纳替尼-d8 峰面积比为定量依据,计算血浆帕纳替尼浓度,并分别对其线性、专属性、精密度、准确度及稳定性进行考察。结果　帕纳替尼浓度在（1 ～ 250） ng/ml 范围内与峰面积线性关系良好,Y = 0.019 3X + 0.028 4 （r= 0.999 1）。专属性较好,血浆中的内源性物质不干扰帕纳替尼及其内标的测定;日内及日间RSD 均小于5%;相对回收率为100.91%~105.18%;室温放置稳定性及冻融稳定性RSD 均小于5%。结论　该文建立的HPLC-MS/MS 法,前处理简单,特异度及灵敏度高,能准确、快速地检测血浆帕纳替尼浓度,适合慢性粒细胞白血病患者帕纳替尼血药浓度的日常监测。     

多项血清自身免疫抗体及红细胞分布宽度对自身免疫性肝炎鉴别诊断价值分析

目的　探讨联合检测多项血清自身免疫抗体及红细胞分布宽度（red blood cell distribution width ,RDW）对自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis,AIH）鉴别诊断价值。方法　检测73 例AIH 组、80 例病毒性肝炎（viral hepatitis,VH 组）和80 例对照的血细胞检测和4 项自身免疫抗体[ 包括抗肝特异性胞浆抗原I 型抗体(anti hepatospecific cytoplasmicantigen type I antibody,LC1),抗核抗体(antinuclear antibody,ANA),抗平滑肌抗体(anti smooth muscle antibody, ASMA)和抗可溶性肝抗原/ 抗肝胰抗原抗体(anti soluble liver antigen / anti hepatopancreas antigen antibody,SLA/LP)],比较三组4 项自身抗体的阳性率及RDW 水平差异,并分析三组ANA 抗体滴度及核型。结果　AIH 患者4 项自身免疫抗体阳性率分别为LC 12.7%,ANA 64.4%,ASMA 58.9% 和SLA/LP 27.4%,其中ANA,ASMA,SLA/LP 与非AIH 患者比较差异有统计学意义（P<0.05）;AIH 患者中ANA 以高滴度（≥ 1∶320） 核颗粒型和核均质型为主,与非AIH 患者比较滴度（≥ 1∶320）及核型（核颗粒型和核均质型）差异均有统计学意义（P<0.05）;AIH 组患者RDW 水平为14.65%±2.01%,与非AIH 患者差异有统计学意义（P<0.05）。结论　4 项血清自身免疫抗体及RDW 联合检测对AIH具有鉴别诊断价值。     

急性缺血性脑卒中患者血清小而密低密度脂蛋白胆固醇水平与心脑血管狭窄程度的相关性研究

目的　研究急性缺血性脑卒中患者血清小而密低密度脂蛋白胆固醇（small and low density lipoprotein cholesterol,sdLDL-C）与心脑血管狭窄程度的相关性。方法　收集上海市交通大学附属瑞金医院神经内科2015 年5 月 ~2017 年10 月期间,已确诊为缺血性脑卒中患者146 例。按照其血管造影（MRA）和颈部超声结果,分为血管正常组 18 例、血管闭塞组34 例和血管狭窄组94 例( 包括血管单支狭窄组28 例、血管多支狭窄组66 例),分别检测其血清胆 固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、脂蛋白a[Lp(a)] 和小而密 低密度脂蛋白胆固醇（sdLDL-C）水平。另选取对照组112 例。比较各组间sdLDL-C 的检测结果,并用多元logistic 回 归分析各检测项目与急性缺血性脑卒中的关系。结果　病例组中TG,Lp(a) 和sdLDL-C 明显高于对照组,差异均具有 统计学意义（t=-6.011, -2.776, -3.744,均P ＜ 0.05）;对照组的HDL-C 明显高于病例组,差异具有统计学意义（t=9.665, P ＜ 0.05）;TG,Lp(a),sdLDL-C 和sdLDL-C/LDL-C 比值与急性缺血性脑卒中的发生呈正相关（相关系数分别为0.316, 0.166,0.20,0.243）;血管闭塞组sdLDL-C 的血清水平（33.77±14.57mmol/L）明显高于血管正常组sdLDL-C 的血 清水平（25.38±12.29mmol/L）;血管多支狭窄组sdLDL-C 的血清水平（30.10±13.61 mmol/L）明显高于单支狭窄组 （20.88±6.46 mmol/L）;血管闭塞组LDL-C,sdLDL-C 明显高于血管正常组和血管狭窄组,差异具有统计学意义（F=3.34, 3.719, 均P<0.05）;多支狭窄组血清TG,TG,LDL-C,sdLDL-C 和sdLDL-C/LDL-C 结果均高于单支狭窄组,差异均 具有统计学意义（t=-3.381, -2.372, -2.17,-4.323,-2.193,均P ＜ 0.05）。结论　急性缺血性脑卒中患者sdLDL-C 水 平升高,且升高水平与血管病变程度密切相关。     

福建省泉州地区健康成人 UF5000 尿沉渣分析仪相关参数参考范围调查

目的　调查泉州地区健康成人 UF5000 尿沉渣分析仪相关参数参考范围。方法　选取 2019 年 7 月 ~2020 年 1月于泉州市第一医院进行体检的健康成人 1 120 例随机新鲜中段尿液标本,在 UF5000 尿沉渣分析仪进行检测,记录红细胞（RBC）、白细胞（WBC）、上皮细胞（EC）、管型（CAST）和细菌（BACT）等结果。将标本按照不同性别、不同年龄组（青年组、中年组、老年组）进行划分,参考 CLSI C28-A3 文件的研究方法,建立泉州地区 UF5000 尿沉渣分析仪上述检测参数的参考范围。非参数检验用于不同性别、不同年龄组间的差异性比较。结果　参考范围:男性RBC:0.0~8.1 (/μl),WBC:0.0~7.2 (/μl),EC:0.0~3.3 (/μl),CAST:0.0~0.70 (/μl),BACT:0.0~44.8 (/μl);女性RBC:0.0~12.9 (/μl),WBC:0.0~13.1 (/μl),EC:0.0~24.9 (/μl),CAST:0.0~0.42 (/μl),BACT:0.0~698.0 (/μl)。男女之间比较,各参数差异均有统计学意义（Z=-21.217~-2.982,均 P<0.05）。男性 RBC 各年龄组间比较、BACT 青年组和中年组间比较,差异均有统计学意义（Z=-4.720~-2.268,均 P<0.05）;女性 EC 和 BACT 各年龄组间比较、WBC 青年组和中年组、老年组间比较均有统计学意义（Z=-10.691~-2.649,P 均 <0.05）。结论　研究对 UF5000 尿沉渣分析仪的参考范围进行了调查,明确了不同性别、不同年龄的参考范围,为目前各地区调查 UF5000 尿沉渣分析仪相关参数参考范围提供了临床资料。     

新型冠状病毒肺炎患者血液CRP,CREA, ALB,IL-6 水平检测对疾病预后的应用价值分析

目的　探讨性别、年龄以及血液指标联合检测在预测新型冠状病毒肺炎（COVID-19）患者预后的应用价值。 方法　选择2020 年2~3 月在泰康同济（武汉）医院的145 例COVID-19 确诊患者,根据出院预后状况分为治愈组（130 例）和死亡组（15 例）,对两组患者的性别、年龄及血液中淋巴细胞绝对值（LYMPH）、C 反应蛋白（CRP）、肌酸 激酶MB 同工酶（CK-MB）、肌酐（CREA）、清蛋白（ALB）、白细胞介素6（IL-6）和降钙素原（PCT）表达水平 进行比较。应用多因素logistic 回归分析和受试者工作曲线（ROC 曲线）评价相关检测指标对COVID-19 预后的判断价值。 结果　治愈组、死亡组患者性别之间差异无统计学意义（χ ２=0.412,P ＞ 0.05）, 年龄之间差异有统计学意义（t =-4.341, P ＜ 0.05）, LYMPH,CRP,CK-MB,CREA,ALB,IL-6 和PCT 之间差异均有统计学意义（U =97.000~1 907.000, 均 P ＜ 0.05）,而经多因素logistic 回归分析仅筛选出CRP,CREA,ALB 和IL-6 四项是死亡的独立危险因素。CRP, CREA,ALB,IL-6 以及CRP+CREA+ALB+IL-6 联合检测的ROC 曲线下面积（AUC 值）分别为0.978,0.881,0.950, 0.979 和0.988,敏感度分别为100%,86.7%,91.5%,100% 和100%,特异度分别为93.8%,84.6%,86.7%,88.5% 和 95.4%。 结论　CRP,CREA,ALB 和IL-6 可以作为COVID-19 患者预后的判断指标,CRP+ALB+CRP+CREA 联合检 测能够提高COVID-19 患者预后的评估能力。     

血清总胆汁酸与甘胆酸水平诊断妊娠期肝内胆汁淤积症能力的Meta 分析

目的　评估总胆汁酸（total bile acid,TBA）与甘胆酸（cholylglycine,CG）对妊娠期肝内胆汁淤积症（intrahepatic cholestasia of pregnany, ICP）的诊断能力。方法　检索PubMed,Embase,Cochrane,CNKI,维普和万方数据库自 建库至2020 年2 月的相关文献,纳入符合标准的文献;运用诊断精确性研究的质量鉴定标准（quality assessment of diagnostic accuracy studies-2, QUADAS-2）进行文献质量评价;计算灵敏度、特异度及受试者工作特征曲线下面积（area under the cure,AUC）,判断总胆汁酸与甘胆酸的诊断能力。结果　共纳入8 项研究总胆汁酸、甘胆酸诊断妊娠期肝内 胆汁淤积症的灵敏度分别为 0.81(95%CI:0.72~0.88) 和0.93(95%CI:0.9~0.95);特异度依次为0.93(95%CI:0.87~0.97) 和0.97(95%CI:0.91~0.99);AUC 分别为0.93（95%CI:0.90~0.95) 和0.96（95%CI:0.94~0.98)。结论　总胆汁酸和甘 胆酸均是诊断妊娠期肝内胆汁淤积症的有效指标,且甘胆酸的诊断能力高于总胆汁酸。     

全自动酶免分析仪和酶标板快速孵育器联合进行 ELISA 检测操作其时间流程优化的实用性探讨

目的　采用全自动酶免分析仪和酶标板快速孵育器相结合,优化酶联免疫吸附操作流程,缩短检测时间,提高工作效率。方法　收集化学发光法检测结果为高（≥ 250 IU/ml）、中（101~250 IU/ml）、低（0.05~100 IU/ml）值的HBsAg 阳性标本及阴性对照各 50 例,分别用全自动酶免分析仪,以及全自动酶免仪联合酶标板快速孵育器设置孵育时间为常规时间的 1/2,1/3,1/4 进行检测,比较与化学发光检测结果的差异性。结果　与化学发光检测相比较,全自动酶免分析仪对 HBsAg 的检测结果差异无统计学意义（χ 2 =0.053,P>0.05）,全自动酶免仪联合酶标板快速孵育器分别缩短孵育时间至常规 1/2,1/3 和 1/4 对 HBsAg 检测结果差异均无统计学意义（χ 2 =0 ～ 0.323,均 P>0.05）。各方法比较差异均无统计学意义,但其中将快速孵育时间缩短至试剂盒规定时间的 1/2 时的总样本符合率和敏感度最高。结论　全自动酶免分析仪联合酶标板快速孵育器缩短孵育时间至常规的 1/2 时,显著提高检测结果准确度,同时提高工作效率,在临床标本检测中具有较高的推广应用价值。     

Prohibitin 表达及对乳腺癌细胞系MCF-7 抑制生长的机制研究

目的　该研究从细胞水平研究了抗增殖蛋白（prohibitin）高表达在乳腺癌细胞中的生物学功能,并研究其抑制 MCF-7 生长的分子机制。方法　使用基因重组法构建pEGFP-PHB 重组质粒,脂质体瞬时转染乳腺癌细胞系MCF-7, real time-PCR 和Western Blotting 验证其高表达后,检测细胞生物学功能。包括:MTT（噻唑蓝）法检测细胞生长、流 式细胞仪检测细胞周期与凋亡、肿瘤相关基因P53, Bcl-2, ERBB2 及E2F-1 的检测和Transwell 小室侵袭实验。两样本差 异比较采用t 检验,多样本差异采用单因素方差分析。结果　MTT 显示PHB 高表达组在转染24, 48 和72h 对细胞生长 的抑制率分别为20.98%, 14.93% 和62.94%,差异有统计学意义;流式细胞仪检测细胞分裂周期,phb 高表达G1 期无差异, S 期降低,G2 期增加;凋亡检测中,高表达组细胞总凋亡率为33.67%±8.68%,阴性对照组的凋亡率12.13%±3.76%, 空白对照组凋亡率为6.99%±2.33%,高表达组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义（F=18.992, P=0.003）; PHB 高表达时,肿瘤相关蛋白P53 和ERBB2 的表达量高于对照组（t=4.590, P=0.044; t=9.489, P=0.011）,Bcl-2 表达降 低,差异有统计学意义(t=7.143, P=0.019),E2F-1 蛋白各组间差异无统计学意义(t=2.175, P=0.162);PHB 高表达组细胞 侵袭能力低于对照组,差异有统计学意义（t=3.221, P=0.01;t=4.057, P=0.003）。结论　PHB 高表达抑制S 期DNA 的合 成,阻滞细胞于G2/M 期,增加细胞凋亡率,抑制肿瘤细胞MCF-7 的生长。其与肿瘤相关蛋白P53 和ERBB2 的增高, Bcl-2 表达的降低紧密相关。     

孕妇葡萄糖耐量和血清胰岛素及 C- 肽释放水平检测对妊娠糖尿病的诊断研究

目的　研究孕妇葡萄糖耐量试验（ oral glucose tolerance test,OGTT）、胰岛素、C- 肽释放曲线特点,探讨其对妊娠糖尿病（gestational diabetes mellitus ,GDM）的诊断价值。方法　选取 2017 年 12 月～ 2019 年 6 月在西京医院进行产前检查的孕妇 420 例,平均年龄 30.6±4.5 岁,根据 OGTT 测定结果将妊娠妇女分为妊娠糖尿病 (GDM) 组 55 例,正常妊娠者（对照组）365例。分析各组OGTT、胰岛素和C-肽释放曲线特点,比较各组胰岛素抵抗和胰岛分泌功能情况。结果　① GDM 组空腹、1h 和 2h 血糖水平高于对照组 (t=5.599, 19.253, 5.486, 均 P<0.05),3h 血糖水平与对照组比较,差异无统计学意义（t=1.543,P>0.05）; GDM 组和对照组空腹胰岛素、C 肽水平比较差异无统计学意义（t=1.698,2.12,均 P>0.05）,1h,2h 和 3h 胰岛素和 C 肽水平高于对照组（t=2.662~6.909,均 P<0.05）。胰岛素抵抗程度（HOMA-IR）GDM 组高于对照组（t=2.2,P<0.05）;胰岛分泌功能（HOMA-β）GDM 组低于对照组（t=2.235, P<0.05）。②约 17.8% 的孕妇糖耐量曲线、胰岛素释放曲线及 C 肽释放曲线呈“N 字型”,3h 血糖、胰岛素及 C 肽未恢复至正常水平。③GDM孕妇胰岛素、C肽释放出现峰值延迟。结论　OGTT正常孕妇中有部分存在N字形双峰,胰岛素和C肽峰值后移,表明存在胰岛功能受损;GDM 孕妇较正常孕妇胰岛素抵抗更严重,同时有胰岛 β 细胞功能受损。     

不同保存方式对标本常规生化项目检测结果的影响

目的探讨血清标本不同保存方式对25项常规生化项目检测结果的影响。方法采集32名志愿者静脉血,每人10 mL分装于2支分离胶促凝管中,分别置于室温24~25℃和2~8℃冰箱冷藏保存,并于0、2、4、6和8 h后检测,将结果同0 h时结果比较。制备22支儿童混合血清,每支分装8份,1支当日检测,其余置于-80℃冰箱冷冻保存。之后每隔1周检测1份。据第1批留取标本1周后采用同样操作制备检测第2批标本,2周后制备检测第3批标本。将3批检测结果进行比较分析。结果室温下在不同保存时间的乳酸脱氢酶(LDH)和游离脂肪酸(NEFA)水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);LDH、NEFA水平随保存时间延长而升高。2~8℃冰箱冷藏保存不同时间的尿素(UREA)和NEFA水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中NEFA水平随保存时间延长而升高,但其升高程度低于室温,UREA水平则随保存时间延长而降低。-80℃保存时各项目变异均在可接受范围内。结论在室温24~25℃和2~8℃冰箱冷藏保存下,除UREA、LDH和NEFA外,离心后分离胶储存管标本在8 h内常规生化项目结果变异基本控制在可接受范围。分离后儿童血清-80℃冰箱冷冻保存7周,生化结果基本保持稳定。