实验室管理信息系统在标本检测前质量控制中的应用

目的：通过实验室管理信息系统对标本检测前质量控制模块的应用,介绍标本检测前质量管理模式。方法：在检验信息管理系统与医院信息系统实现无缝连接的基础上,由Oracle作为数据平台和Windows 2000 Server为操作系统实现数据互联,利用完善的信息处理系统和流程管理服务器,实现检验信息管理系统与医院信息系统（医生工作站、护士工作站）共享管理标本检测前质量控制模块,对每一份申请及标本按执行时段、执行情况、运输时间、样本接收等方面进行控制监测。结果：标本检测前质量控制模块从医生开单、标本采集、标本运送、接收及实验室标本处理等多个环节进行检测前质量控制,从时间上控制质量和划分责任并可查看每个环节的执行情况。结论：实验室管理信息系统的标本检测前质量控制模块是科学优化的质量控制体系必不可少的一部分,是流程管理最规范、最有效、最易行的手段,值得推广。     

缺失型α地中海贫血漏检7例原因分析

目的探讨造成缺失型α地中海贫血（α地贫）漏检的现象与原因防范此类事件的发生。方法采用红细胞平均体积（MCV）、红细胞脆性实验和血红蛋白（Hb）电泳联合进行筛查,阳性者用多重PCR（mPCR）及DNA芯片反向斑点杂交（ASO/RBD-PCR）检测技术有针对性的进行α或β地贫基因检测。结果发现7例缺失型α地贫在以上检测体系中漏检,其均为α地贫合并β地贫复合型双重杂合子,MCV（66.5±7.6）fl、红细胞脆性（29±16）%,HbA2（5.69±1.03）%。结论当α地贫合并β地贫复合型双重杂合子时,常规筛查HbA2均出现升高,容易给检测人员造成单纯β地贫的假象,而只针对其进行β地贫基因检测而忽视了α地贫基因检测,造成了此类缺失型α地贫的漏检。     

GRM4正向别构调节剂抑制乳腺癌细胞的增殖并促进细胞凋亡

背景与目的：代谢型谷氨酸受体4（glutamate metabotropic receptor 4，GRM4）在多种恶性肿瘤中高表达并与肿瘤患者的预后相关，但GRM4在乳腺癌中的生物学作用仍不清楚。本研究拟探讨GRM4的两种正向别构调节剂VU0364439及VU0364770对乳腺癌细胞的增殖及凋亡的影响，进而为乳腺癌的靶向治疗提供思路。方法：在体外培养的乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7和SK-BR-3中分别单独加入VU0364439、VU0364770以及联合使用两种试剂，利用CellTiter-Glo^®发光细胞活力测定法定量检测各组乳腺癌细胞系的增殖活性；利用Annexin Ⅴ-PI双染法检测各组乳腺癌细胞系的凋亡水平；通过实时荧光定量聚合酶链反应（realtime fluorescent quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）技术测定GRM4基因在6种乳腺癌细胞系中的表达情况，在GRM4表达水平最高的细胞中单独加入或联合使用VU0364439及VU0364770，用RTFQ-PCR检测GRM4基因表达的改变。结果：与对照组相比，单独使用及联合使用VU0364439及VU0364770显著抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231和SK-BR-3的增殖水平，并促进MCF-7细胞凋亡现象的发生；联合使用与单独使用VU0364439及VU0364770对乳腺癌细胞增殖及凋亡的作用差异无统计学意义（P＞0.05）；RTFQ-PCR实验表明GRM4在MCF-7细胞中的表达水平最高；在MCF-7细胞中分别单独使用或联合使用VU0364439及VU0364770均能激活GRM4的表达。结论：GRM4的正向别构调节剂能够抑制乳腺癌细胞增殖并促进细胞凋亡，其作用可能是通过激活GRM4基因的表达引起的，本研究为探索GRM4在乳腺癌中的作用机制以及开发新的乳腺癌靶向治疗方法奠定了基础。     

病毒性肝炎联合诊断cDNA芯片的研制与临床应用性研究

目的 制备病毒性肝炎联合诊断cDNA芯片,并进行系列优化及临床应用性研究.方法 对于基因组较小的HBV、HDV病毒,采用Primer Premier 5.0软件针对其保守区域设计特异引物,普通PCR技术制备探针;利用限制性显示PCR(RD-PCR)技术制备基因组较大且复杂的HCV芯片探针.为了便于摸索实验条件和更好地进行探针优化,先后制备3种芯片,包括HBV与HDV诊断芯片、HCV诊断芯片及HBV、HDV、HCV联合诊断芯片.结果 杂交结果显示HBV与HDV诊断芯片、HCV诊断芯片的诊断效果较为满意.从以上2种芯片中选取探针制备HBV、HDV、HCV联合诊断芯片,并对该芯片的检测质量进行初步评估:①检测线性:病毒质粒拷贝数在104～1011copies/ml之间时,芯片检测法显示了较好的线性(r分别为0.990 2、0.992 1、0.981 9,P＜0.01);②特异性:检测黄热病病毒(YFV)、乙型脑炎病毒(JEV)、登革热病毒(DV)等其他病毒样品结果均为阴性,说明该芯片特异性较好;③重复性:检测HBV、HDV、HCV的批内精密度变异系数(Cv)值为7.1%、7.2%、6.6%,批间精密度Cv值为7.9%、8.2%、7.6%;④准确性:将HBV、HDV PCR片段(共14条)、HCV限制性片段(24条)和部分临床阳性血清(PCR产物)全部进行序列测定,在GenBank中进行Blast比较,结果表明克隆基因均属于相应基因,与理论一致.为了适应临床诊断的要求,对实验条件进行优化,包括减少杂交时间、取消预杂交、将杂交温度提高到52℃等措施.在实验室对芯片进行初步评估后,对临床血清标本进行小规模批量检测实验: 用芯片法和实时定量PCR法检测HBV阳性血清(98例)、HCV阳性血清(42例)和阴性血清(130例),对两种方法进行对比,结果显示芯片法检测与实时定量PCR法有良好的相关性(HBV、HCV的r值分别为0.985 4和0.958 2),检测HBV、HCV、HDV的敏感性和特异性分别为85.7%、76.2%、80.0%和96.7%、95.0%、100%.结论 本研究研制的联合诊断芯片敏感性、特异性均较佳,临床应用前景较好.     

CBL通过泛素化降解NCK2抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭

目的 阐明Casitas B系淋巴瘤（CBL）蛋白对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响并探讨其作用机制。方法 乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF7常规培养,实验分为NC组、过表达CBL组和siNC组、siCBL组,采用克隆形成法和细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、伤口愈合实验、Transwell实验检测过表达（沉默）CBL对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;流式细胞术和Western blot验证CBL对乳腺癌细胞周期进程、细胞周期标志物和上皮-间充质转化（EMT）的影响;罗丹明标记的鬼笔环肽染色细胞骨架观察CBL对细胞丝状伪足数量的影响。采用IP-质谱法筛选CBL的相互作用蛋白并确定NCK2为研究对象。实验分为CBL组、NCK2组、CBL+NCK2组,通过免疫共沉淀（IP）和免疫荧光共定位实验验证CBL与NCK2蛋白互作情况。通过环己酰亚胺追踪实验和泛素化实验检测CBL对NCK2蛋白稳定性和泛素化的影响。采用CCK-8和Transwell实验检测NCK2对CBL介导的乳腺癌细胞增殖及迁移能力的影响。结果 过表达CBL组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低（P<0.05）;沉默CBL组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加（P<0.01）。沉默CBL促进MCF7细胞周期G1/S转换（P<0.05）。过表达CBL下调乳腺癌细胞周期相关蛋白 CDK2/4（P<0.01）、Cyclin A2/B1/D1/D3/E2（P<0.05）、EMT 相关蛋白 Snail、N-Cadherin、Claudin-1（P<0.05）,同时上调E-Cadherin（P<0.05）;沉默CBL上调乳腺癌细胞周期相关蛋白CDK2/4/6（P<0.05）、Cyclin A2/B1/D1/D3/E2（P<0.05）,EMT相关蛋白Snail、Vimentin、Claudin-1（P<0.05）,同时下调E-Cadherin（P<0.05）。过表达CBL使乳腺癌细胞系MDA-MB-231中丝状伪足数量减少;沉默CBL使乳腺癌细胞系MCF7中丝状伪足数量增加。NCK2与CBL相互作用。过表达CBL抑制NCK2蛋白稳定性（P<0.05）,并促进其泛素降解（P<0.01）。过表达NCK2能够逆转CBL介导的乳腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用（P<0.01）。结论 CBL可通过泛素化降解NCK2抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

严重急性呼吸综合征患者血清特异性抗体变化规律的长期追踪研究

严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(SARS-CoV)是2003年从严重急性呼吸综合征患者中分离出的一种新的冠状病毒.该病毒在较短时间内感染了8 000多例患者,导致700例患者死亡.SARS-CoV是正链RNA病毒,基因组由29 727个核苷酸组成,含11个开放阅读框架,与其他冠状病毒的基因组结构相似,系统研究抗-SARS-CoV产生及其转归规律,对于SARS冠状病毒的防治具有重要意义.本研究从2003年开始,连续4年追踪研究了广州市41例SARS患者抗体的变化规律.     

STA-R Evolution全自动凝血分析仪加样针移位的处理

STA-R Evolution全自动凝血分析仪是一台自动化程度很高的精密仪器,该仪器一般运行良好,偶有一些小故障出现,我们曾总结出了一些维护技巧。本文介绍加样针移位时的表现及处理。     

β—地中海贫血的分子杂交诊断技术及其进展

β -地中海贫血 (简称 β -地贫 )是世界上最常见和发生率最高的一种单基因遗传病 ,其主要特征为 β珠蛋白肽链合成不足 ( β )或缺如 ( β0 ) ,引起遗传性溶血性贫血。β -地贫的分子病理具有高度异质性 ,主要为少数核苷酸的缺失、插入或置换 ,从而造成基因不表达或表达水平低 ,或导致无功能ｍＲＮＡ产生 ,ｈｎＲＮＡ加工及ｍＲＮＡ翻译异常 ,或合成不稳定的珠蛋白链[1] 。该病在地中海地区、美国黑人、东南亚、印度次大陆及中国南方 (广东、广西、贵州、四川等省 )发病率较高。由于目前对地贫的治疗无特异的方法 ,所以 ,除加强遗传咨询、…     

国内首例总状共头霉所致原发性皮肤毛霉病及文献复习

目的:报道1例总状共头霉所致的原发性皮肤毛霉病并进行文献复习。方法:患者,女,67岁。反复右踝结节、渗液伴疼痛3年。取患者皮损进行真菌镜检及培养,对皮损进行组织病理检查,并对分离菌种行r DNA ITS测序鉴定。结果:显微镜下可见宽而无分隔、成直角分支的菌丝。培养见白色菌落生长,生长较快,菌落呈疏松絮状,灰褐色绒毛状,边缘呈羊毛状向外延伸。皮损组织病理示:真皮全层弥漫性炎细胞浸润,散在多核巨细胞,可见大量团块状菌丝。PAS和嗜银染色阳性。分子测序鉴定为总状共头霉。确诊后外科结合伊曲康唑等治疗取得良好效果。结论:该病例致病菌为总状共头霉,外科治疗结合伊曲康唑治疗有效。     

广东地区严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清的IFA检测

目的：证实新分离出的冠状病毒与SARS患者的关糸。方法：应用IFA诊断试剂做免疫荧光染色，检测2003-02-04-04-13期间，广东地区3所医院临床诊断为SARS的72例患者血清特异性抗体，以及直接参加救治SARS患者但末发生感染的109名医护人员的血清标本，并以疾病流行期间70例健康体检者作为正常对照组。结果：72例SARS患者中，62例血清特异性：IgG呈阳性；而109例密切接触但末发生感染的医护人员及70例SARS流行期间健康体检者，血清特异性IgG和IgM均呈阴性。结论：SARS冠状病毒是引发广东地区SARS的病原体。