实时荧光定量PCR法观察Hsp90αRNAi在HEK293细胞中的沉默效率

目的:采用实时荧光定量PCR方法观察Hsp90αRNAi的沉默效率.方法:通过T-A克隆构建扩增Hsp90α,Hsp90β,GAPDH的标准品,建立实时荧光定量PCR方法;采用脂质体转染法将Hsp90αRNAi瞬时转染至HEK293细胞24 h后,检测Hsp90α,Hsp90β-mRNA水平的变化.结果:建立的实时荧光定量PCR标准曲线相关系数大于0.99,PCR扩增效率在95%以上.与对照组相比较.Hsp90αRNAi可使HEK293细胞中的Hsp90α mRNA表达量降低61%,而Hsp90β表达未受影响.结论:成功建立检测Hsp90α,Hsp90β实时荧光定量PCR方法,且Hsp90αRNAi具有高效特异的沉默效率,为下一步研究Hsp90α在创伤应激中的作用奠定基础.     

β-地中海贫血与先天性软骨发育不全诊断性基因芯片的构建

目的建立一种能同时快速、准确地检测β-地中海贫血与先天性软骨发育不全常见基因突变的技术。方法将针对2种疾病常见突变的特异性氨基修饰寡核苷酸探针点样于醛基修饰的玻片上，制成基因芯片，对β-地中海贫血、先天性软骨发育不全的病例和正常样本进行基因诊断。结果该基因芯片成功检测到相应的突变位点。结论该芯片制作成本低，重复性好，特异性高，能满足临床标本检测的要求，具有良好的临床应用前景。     

急性肺损伤血栓素A2受体、受体mRNA的变化及拮抗剂酚红对它们的影响

目的研究急性肺损伤（ＡＬＩ）肺组织特异性膜受体（ＴＸＡ２Ｒ）的变化及受体拮抗剂酚红对它们的影响，从分子水平阐明血栓素Ａ２（ＴＸＡ２）在ＡＬＩ中的作用机制。方法采用大鼠油酸肺损伤模型，分析伤后６小时肺组织ＴＸＡ２Ｒ、ＴＸＡ２ＲｍＲＮＡ表达的变化以及酚红（５０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ）对它们的影响。结果油酸肺损伤后肺组织ＴＸＡ２Ｒ结合容量明显“降低”，其ｍＲＮＡ的转录显著升高。酚红的应用使ＴＸＡ２Ｒ结合容量明显“降低”，并能抑制油酸肺损伤ＴＸＡ２ＲｍＲＮＡ转录的增高。酚红能显著降低肺体指数（ＬＢＩ）、肺含水率（ＲＬＷ），改善动脉血氧分压（ＰａＯ２），减轻肺组织损伤程度。结论ＴＸＡ２在ＡＬＩ的病理过程中具有重要作用。体内试验证明酚红能有效地调节ＴＸＡ２Ｒ及其ｍＲＮＡ的表达并对ＡＬＩ的发生有防护作用     

衰老大鼠主动脉及其平滑肌细胞G蛋白信使核糖核酸的变化

目的衰老引起的血管功能减退与Ｇ蛋白有关，本实验研究２４月龄大鼠主动脉及平滑肌细胞（ＳＭＣ）中Ｇ蛋白α亚基的信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）变化。方法用Ｇｓα、Ｇｉ２α、Ｇｉ３α和Ｇｏα的ｃＤＮＡ探针按Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和ｄｏｔｂｌｏｔ法对６和２４月龄大鼠主动脉和主动脉ＳＭＣ相应的Ｇ蛋白α亚基ｍＲ－ＮＡ进行定量分析。结果Ｇｏα在主动脉及其ＳＭＣ中均为２条带（３．５和３．８ｋｂ），Ｇｉ３α和Ｇｓα在二者中各为１条带（３．２和１．８ｋｂ），但Ｇｉ２α主动脉有２．１ｋｂ的强带和１．７ｋｂ的弱带，而ＳＭＣ只有２．１ｋｂ的１条带。主动脉中各Ｇα均无显著变化，而ＳＭＣ中Ｇｏα、ＧｓαｍＲＮＡ轻度升高，Ｇｉ２α显著升高（Ｐ＜０．０５）。结论主动脉ＳＭＣ中Ｇ蛋白α亚基的ｍＲＮＡ表达是有变化的，其趋势与主动脉基本一致，但变化更明显一些。     

小鼠急性脑损伤后微量脑脊液谷氨酸浓度的测定

目的建立急性脑损伤后微量脑脊液谷氨酸浓度测定方法.方法采用邻苯二甲醛柱前衍生,梯度高效液相色谱荧光检测法测定急性脑损伤小鼠脑脊液中谷氨酸(glutamate, GLu)含量.结果谷氨酸的平均加样回收率为84.26%～125.6% (n=3),日内相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)均小于4.94%(n=3),日间相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)均小于0.78%(n=3).急性脑损伤后6 h小鼠脑脊液谷氨酸含量相对于假手术组有明显升高(P《0.01).结论本方法准确、快速,可用于微量脑脊液谷氨酸含量的测定.