胶质细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤具有高发生率、高致残率、高生存率、高消耗、青壮年多发等特点。其相关治疗的研究主要是从挽救神经元的迟发型损害和死亡，促进神经元的再生和组织移植替代等方面进行。由于哺乳动物中枢神经系统损伤后期内源性修复能力有限，所以细胞移植可能是更为可行的修复途径。目前细胞移植分为神经干细胞移植、胶质细胞移植、基因修饰的细胞移植等。胶质细胞通过广泛分布的凸起构成神经组织的支架，对神经元胞体和突起有支持作用。出生后保持一定的分裂能力．受到创伤刺激时进行分裂增殖，形成胶质瘢痕。星形胶质细胞一方面位于神经细胞的附近．另一方面附着于毛细血管的终足。参与物质运输和血脑屏障的形成。此外，星形胶质细胞可能在神经元生成、突触网络形成、神经元电活动以及特异性神经系统疾病等过程中发挥着调控作用。基于上述理论．国内外进行了一系列胶质细胞移植修复脊髓损伤的实验研究．现就相关研究进展综述如下。     

少突胶质细胞发生过程中S-100β表达的变化

目的:探讨少突胶质细胞发生过程中3个主要不同阶段S-100β的表达.方法:采用振荡法和差速贴壁法,获得纯化的O-2A祖细胞;双重免疫荧光细胞化学显色法观察S-100β在少突胶质细胞发生过程中的表达情况.结果:O-2A祖细胞在含有碱性成纤维细胞因子(10 ng/ml)和血小板源性生长因子(10 ng/ml)培养液中培养48 h,不表达S-100β;换成含有3'碘甲状腺原氨酸(30 ng/ml)培养液继续培养24 h,S-100β免疫反应呈现阳性.前少突胶质细胞、少突胶质细胞中表达S-100β.结论:少突胶质细胞发生过程中S-100β的表达始于O-2A祖细胞过渡到前少突胶质细胞之间,可能与其从多潜能分化阶段过渡到形态学上的分化阶段有关.     

腓深神经和足背动脉关系在足背复合组织瓣中的意义

目的:探讨腓深神经和足背动脉在足背部的位置关系,为带神经血管蒂的足背复合组织瓣的切取提供解剖基础。方法:选用经福尔马林固定的足踝部完好的下肢68侧,逐层解剖,在踝上显露腓深神经和胫前动脉向远端追踪解剖;定量描述腓深神经分支点到足背动脉和踝间线的位置关系,并对神经和动脉的位置关系进行分型。结果:腓深神经分支点集中在踝间线上(9.34±3.4)mm至踝间线下(14.00±5.28)mm;动脉内侧3.46mm至动脉外侧3.32mm这个范围之内,58.0%(36侧)位于动脉的前上。神经分支后,外侧支位于浅面,与深面的跗外侧动脉平行进入短伸肌;内侧支与动脉伴行,根据神经与动脉关系可分为5型:Ⅰ型,神经伴行于动脉的内侧(50.0%);Ⅱ型,神经位于动脉的外侧(11.8%);Ⅲ型,神经和动脉彼此交叉(26.5%);Ⅳ型,动脉自神经内侧支的分支间穿出(2.9%);Ⅴ型:内侧支缺如(8.8%)。结论:腓深神经和足背动脉在足背部位置关系的解剖特点对足背复合组织皮瓣的切取有指导意义。     

体外培养获取高纯度O-2A祖细胞

目的获取较高纯度的O-2A祖细胞,并观察在不同的实验条件下O-2A祖细胞的分化作用。方法 根据星形胶质细胞、O-2A祖细胞的生长时间差异,细胞的粘附特性不同,采用振荡和差速贴壁法结合Ⅰ型星形胶质细胞条件培养液,培养、分离纯化O-2A祖细胞。结果培养的o-2A祖细胞胞体呈椭圆形,有典型的双极突起,少数呈三极突起;经免疫组织化学染色鉴定细胞的纯度达90％。在有血清的情况下,O-2A祖细胞定向分化为Ⅱ型星形胶质细胞;在无血清的情况下,其定向分化为少突胶质细胞。结论通过振荡法和Ⅰ型星形胶质细胞条件培养液结合差速贴壁法分离纯化培养O-2A祖细胞是一种可行的培养方法。     

星形细胞条件培养液对PC12细胞生长的影响

目的观察1、2型星形细胞(T1A,T2A)条件培养液对PC12细胞生长情况的影响,探讨T1A,T2A在神经再生过程中的作用。方法利用分离纯化的T1A和T2A制备条件培养液,观察条件培养液对PC12细胞生长情况的影响,观察PC12细胞突起生长情况,并用MTT法检测PC12细胞活力。结果对照组PC12细胞未见明显突起生长,TIA条件培养液作用组和T2A条件培养液作用组PC12细胞突起生长明显,OD值分别由0.278提高到0.512（P＜0.001）和0.566(P＜0.001)。结论T1A,T2A条件培养液对PC12细胞有刺激生长作用,说明T1A,T2A对中枢神经再生有积极作用。     

硫氧还蛋白还原酶在大鼠阿尔茨海默病模型海马结构中的表达

目的 :探讨硫氧还蛋白还原酶 (thioredoxinreductase,TR)在阿尔茨海默病 (Alzheimer′sDisease,AD)大鼠模型发生中的作用。方法 :注射海人藻酸 (Kainicacid ,KA)毁损Meynert基底核建立AD大鼠模型 ,通过Y形迷宫判断动物模型成功与否 ,采用原位杂交方法检测AD大鼠模型中TRmRNA的表达。结果 :AD模型组大鼠短期学习记忆能力与对照组相比明显下降 (P <0 0 0 1 ) ,说明AD动物模型建立成功 ;TRmRNA原位杂交检测显示模型组大鼠海马各区TRmRNA杂交信号显著增强 ,与对照组相比有显著差异 (P <0 0 0 1 )。结论 :TR在AD发生发展中可能起神经元保护作用     

少突胶质细胞与2型星形胶质细胞中S-100β表达差异性的研究

目的研究少突胶质细胞(oligodendrocytes,OL)与2型星形胶质细胞(type-2astrocyte,T2A)中S-100的表达。方法根据各种胶质细胞的生长时间的差异及细胞的黏附性不同,通过机械振荡法和差速贴壁法获得纯化的O-2A祖细胞;免疫细胞化学染色法观察S-100β在O-2A谱系细胞中的表达情况。结果O-2A祖细胞在含有PDGF、bFGF的培养液中培养3d,分化成T2A,培养5d分化成OL;OL中S-100β免疫反应呈现阳性,T2A中不表达S-100β。结论O-2A谱系细胞中的S-100β的表达与O-2A祖细胞向OL分化有关。     

Tet-off/Tet-on基因工程鼠中脑肿瘤干细胞的克隆与鉴定*

目的:从Tet-off/Tet-on 转基因脑肿瘤小鼠模型中分离鉴定脑肿瘤干细胞,为进一步研究其是否起源于神经干细胞奠定基础。方法:从出现临床症状的转基因小鼠天幕区肉眼可见的肿瘤组织中取材,一部分做冰冻切片;另一部分制成单细胞悬液,培养于含生长因子的无血清培养基和含血清培养基。在光镜下观察常规病理,用相差显微镜和电镜分别观察细胞形态及其超微结构,用流式细胞仪检测Hoechst33342 阴性的SP细胞,以及其染色体倍体和细胞周期,免疫荧光染色检测细胞球体及其分化细胞中的神经巢蛋白（Nestin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、glialfibrillaryacidicprotein（GFAP）表达情况。结果:肿瘤位置均位于小脑天幕上下约2～3mm的松果体区域内,常规病理诊断为髓母细胞瘤。肿瘤细胞在无血清培养条件下,呈悬浮的球状生长,在含血清培养条件下贴壁分化成瘤性胶质细胞、神经元。电镜见到了核质比高、细胞器不发达、具干细胞特征的细胞。流式细胞仪检测肿瘤细胞球中的SP（sidepopulation）细胞为17.27% ,异倍体细胞为26.77% 。免疫荧光染色发现细胞球中大部分细胞表达干细胞标志物Nestin,少数细胞表达分化标志物GFAP和NSE 。与之相反,贴壁细胞大部分表达分化标志物微管相关蛋白2（MAP2）或胶质纤维酸性蛋白（GFAP）,同时共表达干细胞标志物Nestin。结论:Tet-off/Tet-on 转基因小鼠脑肿瘤组织中存在具有自我更新和多向分化潜能的脑肿瘤干细胞。      

垂体上动脉显微外科解剖学研究

目的 了解垂体上动脉的起始、行程、分布和变异,为鞍区肿瘤手术时保护垂体上动脉以有变垂体上动脉瘤与床突旁其他类型动脉瘤区别提供依据。方法 ５０具成人尸体头颅垂体上动脉标本,在解剖显微镜下解剖和分析。结果 垂体上动脉为一组血管丛,分１～４支,起始于颈内动脉则,平均直径０．２２ｍｍ。起始部距眼动脉起始部小于５ｍｍ者占８２％,二种分支类型：粗大支型占４５％,呈烟台式供应垂体柄、视神经和视交叉,平均直径为０     

β-1,4-半乳糖苷键在星形胶质细胞瘤中的表达特征

目的研究β-1,4-半乳糖苷键在各型人脑星形胶质细胞瘤中的表达变化特征。方法分别提取人正常脑及星形胶质细胞瘤蛋白质,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）,考马斯亮蓝（CBB）染色。并利用特异识别β-1,4-半乳糖苷键的蓖麻凝集素-Ⅰ（RCA-Ⅰ）,经letin blot和组织化学方法分析β-1,4-半乳糖苷键在各型人脑星形胶质细胞瘤中的表达变化和表达定位。结果CBB染色结果显示,人正常脑及星形胶质细胞瘤的蛋白质组成相似。RCA-Ⅰ letin blot显示：星形胶质细胞瘤组织半乳糖基化较正常脑组织有升高趋势,并且有-61kD的蛋白在胶质瘤组织中被半乳糖基化。组织化学方法表明：β-1,4-半乳糖苷键散在表达于正常脑组织和各级胶质瘤组织中,随着肿瘤分级增高,表达β-1,4-半乳糖苷键的细胞增多：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ平均RCA-Ⅰ染色阳性率分别为15％、21％、28％和41％,而正常脑组织平均RCA-Ⅰ染色阳性率为8％。结论β-1,4-半乳糖苷键的表达与人脑星形胶质细胞瘤恶性程度密切相关,为分析β-1,4-半乳糖苷键及其相关糖基转移酶在恶性胶质瘤中的发病和诊治意义奠定基础。