bFGF与骨髓间充质干细胞联合应用对大鼠脊髓损伤的修复作用

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)与成纤维细胞生长因子(bFGF)联合移植对大鼠脊髓损伤的修复作用,并探讨其机制。方法:利用血清培养技术获得SD大鼠BMSCs。80只健康雄性6周龄SD大鼠(重约240 g)随机分为4组,每组20只。假手术组行单纯椎板切除,不损伤脊髓,与其余3组同条件饲养。其余3组均采用左侧T9脊髓半切,建立脊髓损伤模型。制模9 d后进行损伤局部移植治疗,对照组损伤处植入吸附有生理盐水的明胶海绵;BMSCs移植组损伤处植入吸附有BMSCs的明胶海绵;bFGF+BMSCs移植组损伤处植入吸附有bFGF+BMSCs的明胶海绵。术后4、8周后Western blotting分析受损脊髓组织中NF-200、GFAP表达水平,Basso Beattie Bresnahan (BBB)运动功能评分量表评价大鼠的后肢功能恢复情况。结果:术后4、8周后BMSCs移植组和bFGF+BMSCs移植组的(BBB)评分较对照组改善(P0.05),且bFGF+BMSCs移植组与BMSCs移植组比较差异有统计学意义(P0.05);术后4、8周后NF200在对照组表达极少,在BMSCs移植组只有少量表达,而bFGF+BMSCs移植组呈高表达(P0.05)。GFAP在对照组表达高,BMSCs移植组少量表达,bFGF+BMSCs移植组呈现低表达(P0.05)。bFGF+BMSCs移植组与BMSCs移植组、对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:BMSCs与bFGF联合移植对大鼠脊髓损伤有修复作用,机制可能与其降低GFAP表达及升高NF-200表达有关。     

bFGF与骨髓间充质干细胞联合移植对脑损伤后神经再生的影响

探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和骨髓间充质干细胞(BMSCs)联合移植对脑损伤后神经再生的影响。利用血清培养技术获得小鼠BMSCs,行Hoechst33342标记。40只小鼠随机分为4组:正常组、损伤组、BMSCs移植组、bFGF+BMSCs移植组,每组各10只。采用自由落体撞击脑损伤模型,然后经尾静脉注射移植液,2d后行caspase-3免疫荧光染色检测BMSCs的凋亡情况;2w后行HE染色结合形态学图像分析软件计算脑切片的缺损面积、免疫组织化学检测星形胶质细胞及神经元数目变化、Y迷宫测试检测小鼠学习记忆能力。结果显示:bFGF+BMSCs移植组骨髓间充质干细胞的caspase-3表达量是BMSCs移植组的0.5倍;BMSCs移植组和bFGF+BMSCs移植组的学习记忆能力及缺损面积较损伤组有改善(P<0.05),且bFGF+BMSCs移植组与BMSCs移植组比较有显著性差异(P<0.05);GFAP和MAP-2在损伤组表达极少,在BMSCs移植组只有少量表达,而bFGF+BMSCs移植组呈高表达,MAP-2表达水平增高更显著。以上结果提示bFGF+BMSCs移植较BMSCs移植可更好地促进脑损伤后的神经再生。     

MPTP诱导的小鼠PD模型中相关脑区小胶质细胞反应性差异研究

为了探讨Parkinson病(PD)小鼠相关脑区的小胶质细胞反应性是否存在差异,本研究采用MPTP诱导的小鼠PD模型,用GSA I-B4-HRP组织化学染色方法对黑质致密部(SNc)、尾壳核(CPu)、腹侧被盖区(VTA)和额叶联合皮层(FrA)四个部位中小胶质细胞的形态和数量进行了观察;同时用免疫荧光染色检测了SNc和VTA中TH阳性神经元的数量,用Western blot方法检测CPu和FrA内TH蛋白含量的变化情况。结果显示:SNc中TH阳性神经元的数量和CPu中TH蛋白的含量在MPTP腹腔注射后1 d即大幅度降低(降幅约为68%);在MPTP腹腔注射后3 d起SNc中TH阳性神经元的数量和CPu中TH蛋白的含量逐步增加;小胶质细胞在MPTP腹腔注射后1～3 d的反应明显,然后逐渐减弱。VTA中TH阳性神经元的数量和FrA中TH蛋白的含量在MPTP腹腔注射后降幅不明显(降幅约在15%),小胶质细胞在MPTP腹腔注射后1 d的反应较为明显,其它时段的变化不显著。本研究结果提示:PD模型小鼠SNc和CPu中的小胶质细胞反应明显强于VTA和FrA区,反应性小胶质细胞在SNc中的多巴胺(DA)能神经元损伤过程中扮演了重要角色。     

红细胞生成素激活的星形胶质细胞条件培养液对神经干细胞促分化作用及对分化后细胞的保护作用

目的 观察红细胞生成素激活的星形胶质细胞条件培养液（EACM）对神经干细胞促分化作用及对分化后细胞的保护作用。 方法 原代培养神经干细胞和1型星形胶质细胞,收集红细胞生成素(EPO)刺激的星形胶质细胞上清液,用于神经干细胞分化实验的研究。对分化后的细胞进行免疫细胞化学染色,计算其分化为神经元的比率;同时利用FeSO₄和H₂O₂制造细胞损伤模型,用EACM继续培养48h,然后检测细胞活性和存活细胞数。 结果 EACM组神经干细胞分化明显,神经元比率较星形胶质细胞上清组和对照组均有明显增加。分化后的细胞中加入H₂O₂后,继续用EACM培养的实验组吸光度(A)值和细胞存活百分比均较对照组高。 结论 红细胞生成素激活的星形胶质细胞条件培养液对神经干细胞有促其向神经元分化的作用,并对分化后的细胞有保护作用。     

衰老1型星形胶质细胞的Aβ1-40及相关分子表达变化

目的:通过体外建立1型星形胶质细胞(T1A)衰老模型,研究衰老T1A中β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)及相关蛋白的表达变化。方法:采用振荡培养与差速贴壁法分离纯化新生SD(Sprague-Dawley)大鼠的T1A,免疫细胞化学标记检测体外培养21d(21DIV)及90d(90DIV)的T1A中β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)的表达;以WesternBlot检测微管相关蛋白1A/1B轻链3(LC3)、caspase-3及Bcl-2的表达水平。结果:体外长程培养的T1A中Aβ1-40蛋白表达增加,同时90DIV组细胞中LC3II及活化的caspase-3表达水平提高,Bcl-2表达水平降低。结论:研究结果提示衰老的T1A表达Aβ,细胞内自噬及凋亡活性增强,在年龄相关的神经变性过程中,T1A的衰老可促进神经元的损伤,衰老T1A表达的Aβ很可能是Alzheimer病老年斑的重要来源。     

白三烯受体拮抗剂对哮喘模型肺组织VEGF表达水平的影响

目的　探讨白三烯受体拮抗剂对哮喘模型肺组织血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响及其对哮喘模型气道重塑的预防和治疗作用 ,提供哮喘防治新途径的可靠实验依据。方法　 10 8只健康雄性豚鼠随机分为 3组 :哮喘发作组、治疗组、对照组 ,每组 36只。以卵蛋白 (OVA)致敏和激发建立豚鼠哮喘模型。肺组织病理切片以SP法免疫组化标记VEGF ,图像分析VEGF表达水平。结果　OVA激发后 4周 ,哮喘发作组肺组织VEGF表达水平显著高于治疗组及对照组 (P <0 0 5 ) ,白三烯受体拮抗剂治疗哮喘使肺组织VEGF的表达水平降低。结论　白三烯受体拮抗剂可以降低哮喘豚鼠肺组织VEGF表达水平 ,从而减少血管增生 ,延缓哮喘气道重塑的发生。     

巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1在O-2A谱系细胞中的表达

目的 观察O-2A（oligodentrocyte-type-2 astrocytes）谱系细胞是否是表达神经干细胞的标志物。方法 取新生大鼠脑皮质体外培养纯化的O-2A祖细胞、少突胶质细胞和2型星形胶质细胞,应用激光共聚焦双重免疫荧光标记技术检测巢蛋白（nestin）和阶段特异性胚胎抗原-1（SSEA-1）的表达。结果 nestin在O-2A祖细胞和2型星形胶质细胞中表达,在少突胶质细胞中不表达;SSEA-1仅在2型星形胶质细胞中表达。结论 nestin和SSEA-1在O-2A谱系细胞中的表达存在差异,可能具有神经干细胞的特征。     

富集自体骨髓间质干细胞复合羟基磷灰石／磷酸三钙植骨材料在脊柱融合中的应用

目的:探索通过自体骨髓富集的间质干细胞复合羟基磷灰石/磷酸三钙作为植骨材料进行脊柱融合的新方法。方法:①观察对象:选择2005-01/2006-02建湖县人民医院骨科收治的胸腰椎骨折均采用后路椎弓根钉系统复位及固定患者48例。②实验分组:根据植骨融合材料不同随机分为2组,干细胞 复合材料组24例,男13例,女11例;年龄25～49岁。自体髂骨移植组24例,男15例,女9例;年龄26～50岁。③实验干预:采自体骨髓通过密度梯度离心得到富集的间质干细胞悬液与羟基磷灰石磷酸三钙复合2h后作为植骨材料。干细胞 复合材料组采用骨髓间质干细胞复合羟基磷灰石磷酸三钙移植;自体髂骨移植组采用自体髂骨移植。④实验评估:对所有患者脊柱融合情况、临床疗效、伤椎复位后高度丢失等进行比较分析,评定脊柱融合效果。结果:术后随访12个月,48例患者全部进入结果分析。①骨髓富集的有效性:富集前后骨髓间质细胞浓度达到8倍。②临床疗效:干细胞 复合材料组所有病例取髓处疼痛术后1周消失,均未发生感染。自体髂骨移植组术后3个月取骨处仍有疼痛。所有病例无感染和内固定松动断裂等并发症。两组术后12个月LBOS评分优良率干细胞 复合材料组71%(17/24),自体髂骨移植组79%(19/24)。③脊柱融合情况:术后随访6个月以上的患者X射线、检查均示有良好的脊柱融合,两组在术后3个CT月移植物密度降低并可见双侧薄层融合块,术后6个月双侧可见整块新生骨或单侧大块新生骨。按Lenke字母分级法融合分级,两组均无C、级融合。④Cobb角测量结果:伤椎复位后高度丢失干细胞 复合材料组平均为2.38°D,自体髂骨移植组平均为2.42°。结论:通过自体骨髓富集的间质干细胞复合羟基磷灰石磷酸三钙应用于胸腰椎骨折后外侧融合可取得与自体髂骨移植同等的临床疗效,是一种安全可靠,简便有效的植骨替代材料。     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂对大鼠脑缺血模型DNA损伤的实验研究

目的 研究caspase-3抑制剂Ac-DEVD—CMK及calpain抑制剂ALLN干预治疗对大鼠局灶性脑缺血／再灌注模型的神经保护作用。方法 经左侧侧脑室注射DEVD或／和ALLN溶剂二甲基亚田(DMS0)后，制作大鼠左侧MCA缺血再灌注模型；缺血2h再灌注24h进行TTC染色观察梗死灶的形成情况；并分别于缺血2h再灌注24h或48h检油鼠脑中单、双链DNA断裂情况。结果 溶剂DMS0预处理组的各项指标与MCAO模型组无明显差异；DEVD或ALLN治疗后缺血仍脑中Klenow及TUNEL阳性细胞数均明显减少，二合用作用最强。结论Caspase-3与calpain均在缺血性脑损伤中起重要作用，对此进行治疗干预具有潜在的临床应用价值。     

大鼠脊髓损伤模型中硫氧还蛋白还原酶的表达及其作用

目的：探讨大鼠脊髓损伤模型中硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase，TR）的动态表达及其作用。方法：成年Wister大鼠36只，随机分为6组，每组6只。建立大鼠脊髓压迫伤模型，以原位杂交法测定脊髓损伤后不同时间TR的动态变化。结果：脊髓压迫伤后2hTR mRNA表达开始增高，6—12h达到高峰，24h开始下降，48h降到正常水平。结论：脊髓损伤后TR合成增加，通过抗氧化、清除自由基及抑制细胞凋亡，对脊髓损伤有保护作用。