登革热病毒RNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

目的 建立TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法,测定登革热病毒(DV)及DV病毒的RNA拷贝数.方法 利用TaqMan探针,建立实时荧光定量RT-PCR方法,通过对登革热病毒RNA定量外标准品的定量分析,优化反应体系.检测TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法的灵敏度、特异性和重复性.结果 该方法检测灵敏度可达1×103 copies/mL,特异性及重复性良好,对同一样品进行5次重复检测,其循环阈值的平均标准偏差为O.792.结论 TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定登革热病毒及DV RNA载量.     

实时荧光PCR方法检测结核分枝杆菌mRNA的研究

目的建立检测结核分枝杆菌mRNA表达水平的实时荧光PCR反应体系,快速鉴定结核分枝杆菌。方法设计合成结核分枝杆菌mRNA相应引物和探针,探针标记以JOE为报告基团,BHQ1为猝灭基团。优化反应条件,建立结核分枝杆菌mRNA的实时荧光PCR检测方法。通过检测22份肺结核患者痰液、10份健康无症状人群痰液、结核分枝杆菌标准菌株和偶然分枝杆菌菌株培养菌落,检验方法的特异性、重复性和灵敏度。结果肺结核患者痰液检测均出现典型扩增曲线,CT均值31.35,标准差4.31。健康无症状人群痰液及偶然分枝杆菌未出现扩展曲线。对痰液标本及稀释RNA重复检测的变异系数在2.54%以下,检测CT值与痰涂片抗酸染色分枝杆菌的数量呈良好相关性。结论建立了一种快速实时检测结核分枝杆菌mRNA基因的荧光PCR方法,具有良好的敏感性和特异性。     

戊型肝炎多重诊断模式的研究

目的探索一种基于ELISA和核酸定性检测技术的戊型肝炎多重诊断模式。方法对261份血清标本采用ELISA技术检测血清戊型肝炎病毒IgM抗体,采用巢式PCR技术对血清中戊型肝炎病毒核酸定性检测。结果 2份血清标本IgM抗体检测呈弱阳性和核酸检测均呈阳性,阳性率为1.0%。结论戊型肝炎病毒IgM抗体和核酸检测相结合的方法有助于戊型肝炎早期诊断和传染风险性评估。     

2009年深圳口岸甲型H1N1流感疫情早期监测结果分析

目的 分析2009年深圳口岸甲型H1N1流感疫情暴发早期监测的结果,阐明甲型H1N1病毒的传人特征.方法对深圳罗湖、福田地铁、深圳湾、皇岗、蛇口、文锦渡、大铲湾、机场、沙头角9个国境口岸出入境人员实行流感监测,对监测到的流感样病例采集咽拭子标本,并进行流行病学调查.运用WHO推荐的甲型H1N1实时荧光RT-PCR技术检...     

戊型肝炎多重诊断模式的研究

目的探索一种基于ELISA和核酸定性检测技术的戊型肝炎多重诊断模式。方法对261份血清标本采用ELISA技术检测血清戊型肝炎病毒IgM抗体,采用巢式PCR技术对血清中戊型肝炎病毒核酸定性检测。结果 2份血清标本IgM抗体检测呈弱阳性和核酸检测均呈阳性,阳性率为1.0%。结论戊型肝炎病毒IgM抗体和核酸检测相结合的方法有助于戊型肝炎早期诊断和传染风险性评估。     

两年来的反向疫苗学研究

上世纪从减毒活菌的免疫接种到更安全的亚单位疫苗的制备，都是采用传统的疫苗研制方法。该法要求在体外培养病原体并用生物化学、免疫学、微生物学方法对它进行分析。尽管这种方法在几种疫苗研制中已取得成功，但耗时长且对许多人类病原体无法研制相应的疫苗。目前，基因组法能够从在基因芯片上预测所有抗原开始设计疫苗，而不依赖其丰度，也不需在体外培养微生物。在过去几年里已被成功运用的新策略反向疫苗学已根本改变了疫苗的研究方法。本文论述了第一个反向疫苗学的例子——B群脑膜炎球菌的研究以及该法对于研制抗其他人类病原体的新型疫苗的应用。     

2006年北京市外来人口中HIV-1感染者流行毒株gag基因序列测定和亚型分析

目的了解北京市外来人口中HIV-1亚型的特点和流行规律。方法随机采集北京市2006年外来人口中新确证HIV-1感染者的抗凝全血标本80份，分离血浆，提取病毒RNA，用套式聚合酶链反应扩增病毒gag基因，并进行序列测定和亚型分析。结果系统进化分析确定北京市外来人口HIV-1毒株属于8个亚型，分别为B亚型4份，泰国B亚型15份，C亚型1份，CRF01-AE亚型5份，CRF02-AG亚型1份，CRF07-BC亚型29份，CRF08-BC亚型3份，CRFl5—01B亚型1份。结论北京市外来人口中己存在8种HIV-1亚型和流行重组型，应该加强对HIV-1亚型变异的监测。     

广东口岸HIV流行毒株基因亚型分析

目的通过对广东口岸国际旅行人员中人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者的亚型分析,监测出入境口岸HIV毒株的流行状况及其变化。方法从36例HIV-1抗体阳性样品中提取病毒RNA,逆转录后套式聚合酶链反应(Nested-PCR)扩增HIVgag基因核心蛋白p17/p24片断,对PCR产物直接进行核苷酸序列测定,所获序列与各亚型国际参考序列比对,确定基因型并进行系统进化树分析。结果36例样品gag区序列分析共发现8种HIV-1亚型和重组型,其中CRF BC重组型14例(38.9%)(CRF07 BC重组型13例,CRF08 BC重组型1例),CRF01AE重组型12例(33.3%),CRF02 AG重组型3例(8.3%),B亚型2例(5.6%),Al、C、G及J亚型各1例(2.8%),1例样品分型不明确。这些不同亚型的感染者来自包括中国在内的11个不同国家和地区。结论广东口岸国际旅行人员中HIV-1亚型和重组型种类复杂多样,通过监测国际旅行人员中HIV感染者基因型分布及其变异,发现和鉴定新型毒株,对于艾滋病的预防和控制十分重要。     

广州市2004-2005年HIV-1感染者亚型分析

目的 了解广州市艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)流行株的亚型及分布情况.方法 从2004-2005年采集的92份HIV-1抗体阳性者抗凝全血中,提取前病毒DNA,经套式聚合酶链反应(Nested-PCR)扩增gag和env区基因并测定序列,与国际标准参考序列比较确定亚型.结果 经系统进化树分析,92份样本中34份为CRF01AE,40份为CRF07BC,7份为CRF08BC,3份为欧美B,6份为泰国B(B'),2份为C.结论 广州市HIV-1流行株以CRF01AE和CRF07BC为主,也存在CRF08BC、B、B'及C亚型.