异种角膜脱细胞基质为供体进行角膜前板层移植的初步研究

目的探讨以异种猪角膜脱细胞基质为供体植片,分析兔角膜进行前板层移植后的生物相容性：设计实验研究。研究对象新西兰白兔。方法应用1％TritonX-100及冷冻干燥处理制备猪角膜脱细胞基质载体,切取1／3厚度前板层作为供体角膜植片,对兔眼角膜前板层切除后进行移植,同时以新鲜猪角膜板层为供体对兔进行前板层移植作对照。通过术后角膜透明度、组织结构观察,评价猪角膜脱细胞基质的生物相容性及植片转归的情况。主要指标角膜透明度和组织学HE染色。结果制备的猪角膜脱细胞基质植片作前板层移植到兔眼后,未见明显的新生血管、炎症反应、角膜坏死等排斥现象,观察期内植片较透明;脱细胞基质表面上皮化良好,植片基质板层与植床逐渐融合,植片内有宿主细胞迁入生长,板层结构与正常角膜相似。结论猪角膜脱细胞基质具有良好的生物相容性、安全性和低抗原性,有望成为角膜板层移植的供体材料。     

人骨髓内皮祖细胞的分离、培养和鉴定

目的探讨人骨髓内皮祖细胞的特性及其替代角膜内皮细胞成为种子细胞的可行性。设计实验研究。研究对象人骨髓内皮祖细胞。方法利用密度梯度离心法从人骨髓中分离出单核细胞,接种到纤维蛋白铺层和明胶铺层的培养皿中,EGM-2培养液培养,比较这两种不同铺层对细胞生长增殖的影响。检测人骨髓内皮祖细胞摄取乙酰化低密度脂蛋白,结合荆豆凝集素能力,免疫荧光检测CD133和CD34,RT-PCR检测Ⅷ型胶原表达情况。主要指标人骨髓内皮祖细胞形态特点,免疫荧光、RT-PCR结果。结果人骨髓内皮祖细胞呈短梭形或多边形,纤维蛋白铺层较合适。人骨髓内皮祖细胞能摄取ACLDL,结合UEA-1,表达CD133和CD34,表达角膜内皮细胞较特异的Ⅷ型胶原。结论人骨髓内皮祖细胞有望成为较理想的代替角膜内皮细胞的种子细胞。     

猫骨髓内皮祖细胞的分离、培养和鉴定

目的 探讨分离和培养猫骨髓内皮祖细胞(EPC)的方法,为研究干细胞治疗人角膜内皮失代偿提供理论依据.方法 采用密度梯度离心法从猫骨髓中分离出单核细胞,接种到纤维蛋白(Fn)铺层的培养皿中.检测不同质量浓度的Fn铺层及不同培养液DMEM和EGM-2对细胞生长的影响.EPC与乙酰化低密度脂蛋白(AcLDL)和荆豆凝集素(UEA-1)孵育,免疫荧光检测CD133和CD34.结果 EPC呈铺路石样生长.提高Fn质量浓度并不提高细胞贴壁数.细胞呈长梭形.50%以上的EPC能摄取DiI-ac-LDL,并结合UEA-1.第10d EPC的CD133和CD34表达率为90%,第14d时分别下降到80%和70%.结论 从猫骨髓中成功分离和培养出内皮祖细胞,形态上与猫角膜内皮细胞相似,有望作为种子细胞用于治疗角膜内皮失代偿.