血清透明质酸、Ⅲ型胶原N端肽、层粘蛋白检测在肝硬化诊断中的作用

目的 了解血清透明质酸（HA）、Ⅲ型胶原N端肽（PⅢNP）、层粘蛋白（LN）3项指标在肝硬化诊断中的作用。方法 采用放射免疫测定法,测定238例肝硬化,64例肝癌伴肝硬化,42例肝癌（不伴肝硬化）病人血清HA、PⅢNP和LN。结果 肝硬化病人随着病情进展。HA和PⅢNP水平明显升高并有显著差异。LN亦呈升高趋势,但在不同程度的肝硬化病人中相关不显著,结论 在肝病尤其是肝硬化的实验诊断中,以上3项细胞外间质（ECM）指标的应用价值不同,HA升高最明显、最可靠。PⅢNP与肝硬化间亦有较好的相关性。LN的血清不检测对肝硬化诊断的作用在本研究中未能得到证实,有待于进一步探讨。     

249例抗—HCV与HCV—RNA检测结果的比较和分析

逆转录-多聚酶链反应（RT－PCR）技术现已较多应用于HCV感染的分子生物学诊断。为了解其与ELISA法检测抗一HCVIN的关系，我们对249例患者同时做此两项检测，作回顾性比较和分析。一、材料和方法HCV－RNA、RT－PCR试剂由本院分子生物实验室制备。检测方法为用30VI血清抽提HCV－R     

F-PSA、T-PSA及其比值与前列腺疾病的关系

血清前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)检测被公认为诊断前列腺癌的最具临床价值的标志物,但其仅对前列腺组织特异而并非对前列腺癌特异[1],因此,前列腺良性疾病及其他因素也可导致血清PSA升高,检测PSA作为早期诊断指标缺乏足够的特异性和敏感性,采取同时检测血     

定量RT-PCR测定冠心病患者外周血中Toll样受体4的基因表达水平

目的建立检测人Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)mRNA含量的实时荧光定量RT-PCR的方法,并用来测定冠心病患者外周血单个核细胞(PBMCs)中TLR4的基因表达水平,探讨TLR4基因表达水平与冠状动脉粥样硬化发生发展的关系。方法基于TaqMan荧光探针技术,构建克隆载体pGEM-T-TLR4作为定量模板,建立实时荧光定量RT-PCR方法。在GeneAmp5700型检测仪上测定了50例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者和40名健康对照者外周血中TLR4mRNA的含量。结果TLR4mRNA在50例冠心病患者的表达范围为7·7×105~2·3×107拷贝/μgRNA;40名健康对照者的表达范围为9·8×104~5·5×106拷贝/μgRNA,冠心病组TLR4mRNA的平均拷贝数显著高于健康对照组[(5·3±3·8)×106vs(1·8±1·4)×106;P<0·01]。而冠心病血脂正常组和血脂异常组的TLR4 mRNA平均拷贝数无明显差别[(5·1±4·7)×106vs(5·4±3·0)×106;P>0·05]。结论成功建立了人TLR4基因表达含量的荧光定量检测方法;冠心病患者TLR4 mRNA的含量显著高于健康对照组,且其含量高低与血脂无关,TLR4及其介导的天然免疫应答与动脉粥样硬化的发生发展存在一定的相关性。     

他克莫司在临床检测中的方法学比较

目的通过方法学比较为临床推荐一种更精确可靠的检测方法并为临床用药提供科学客观的参考依据。方法以目前常用的酶联免疫法（ELISA）和微粒子酶免疫（MEIA）技术，检测58例肝移植和肾移植患者血清中他克莫司的浓度，比较两者间的相关性。结果统计分析显示两种方法之间有较好的相关性（r=0.972），但两组结果比较有显著性差异（P〈0.01），MEIA法检测值普遍比前者高。结论两种方法之间有较好的相关性，适合临床批量样本测试。但两种方法的检测结果没有可比性，不应互相比较。     

抗HBs Fab-IFNα融合蛋白的制备与初步鉴定

目的构建抗HBsAg的pComb Fab-IFNα载体,原核表达具双重生物活性的抗HBs Fab-IFNα融合蛋白。方法以pBAD-Fab和pBADIFNα作为模板,分别扩增Fd、λ和IFNα基因,经相应的限制性内切酶酶切后分3次克隆入pComBHss质粒,转化XL-1 Blue大肠埃希菌。限制性酶切和测序鉴定重组质粒,免疫蛋白印迹(Western blotting)和斑点印迹(Dot blotting)鉴定融合蛋白的表达及抗原结合活性。结果重组载体的酶切、电泳及测序表明抗HBs Fab-IFNα基因克隆正确。表达产物经12%SDS-PAGE电泳、转印,Western blotting显示该融合蛋白分子量约为65kD,Dot blotting显示其与HBsAg具有结合能力。细胞病变抑制法测定IFNα生物学活性为7.8×104~5.1×105U/ml。结论该原核系统成功表达了抗HBs Fab-IFNα融合蛋白,表明其既具有抗HBsAg结合能力,又具备IFNα的生物活性,为进一步的系统表达和应用研究提供了条件。     

乳腺癌组织中ERα mRNA和PR mRNA检测方法的建立和应用

建立测定雌激素受体α(ERα)mRNA和孕激素受体(PR)mRNA的实时荧光定量RT-PCR,探讨两者在乳腺癌组织及良性乳腺肿瘤组织中的表达水平。分别以pMD18 ERα和pMD18-PR质粒为定量模板,用循环阈值(Ct)定量起始模板,在荧光TaqMan方法的基础上建立了测定ERαmRNA和PR mRNA的实时荧光定量RT-PCR,并分别测定48例乳腺癌组织及28例良性乳腺肿瘤组织中ERαmRNA和PR mRNA的表达水平。ERαmRNA和PR mRNA测定的线性范围为10~3～10~8copy/μg RNA;ERαmRNA和PR mRNA高值和低值的批内和批间变异系数(CV)在5.07%～11.28%之间。ER mRNA在乳腺癌组织中的表达量为6.76×10~5copy/μg RNA(4.17×10~5,9.34×10~5),良性乳腺肿瘤组织中的含量为1.54×10~5 copy/μg RNA(1.02×10~5,2.06×10~5),乳腺癌组织的表达量高于良性组织(P<0.05);PR mRNA在乳腺癌组织中的表达量为1.02×10~6copy/μg RNA(6.81×10~5,1.36×10~6),良性乳腺肿瘤组织中的含量为4.93×10~5 copy/μg RNA(3.21×10~5,6.65×10~5),两者表达无明显差异(P>0.05)。ERαmRNA和PR mRNA在乳腺癌和良性乳腺肿瘤组织中的表达存在相关性。我们建立的测定ERαmRNA和PR mRNA的实时荧光定量RT PCR灵敏、稳定、重复性好,可供临床检测和研究。ERαmRNA和PR mRNA基因表达水平可作为预测治疗效果及判断预后的重要指标。     

中国汉族人IgE重链恒定区CH2-CH4 cDNA的克隆

人血清中高水平的IgE是哮喘、过敏性鼻炎、慢性荨麻疹等过敏性疾病的标志,而IgE与效应细胞上的IgE高亲和力受体(FcεRⅠ)结合则是这些Ⅰ型变态反应的关键步骤[1].     

人源性抗核抗体Fab片段噬菌体抗体库的构建

目的 构建人源性抗核抗体(ANA)Fab片段噬菌体抗体库.方法 从4名ANA滴度大于1∶10 000的自身免疫病患者外周血淋巴细胞中抽提总RNA,用RT-PCR技术扩增免疫球蛋白分子轻链κ、λ基因及重链Fd基因.将轻链基因片段克隆入pComb3Hss载体以构建轻链文库,随后将重链基因载入κ/λ-pComb3Hss载体,形成κ/λ-Fd-pComb3Hss质粒,然后将重组质粒转化大肠杆菌XL1-Blue.用辅助噬菌体M13 KO7感染XL1-Blue,随机的重组抗体文库即表达于丝状噬菌体表面.结果 扩增了长度为660bp的轻链κ、λ基因及重链Fd基因,并成功构建了库容为2×104的轻链基因抗体库和库容为4×104的人Fab抗体库,获得了噬菌体滴度为2×109CFU/ml的富含人源性抗核抗体Fab片段的噬菌体抗体库.结论 成功构建了人源性抗核抗体Fab片段噬菌体抗体库,为人源性抗核抗体Fab片段的制备以及进一步评价其在肿瘤免疫靶向治疗中的作用奠定了基础.