短发卡RNA表达质粒的构建及对△Np63基因的抑制作用

目的构建△Np63特异性短发卡RNA(shRNA)表达质粒,检测△Np63-shRNA对膀胱移行细胞癌(TCCB)细胞株5637中△Np63信使RNA(mRNA)表达的抑制作用。方法设计合成△Np63 shRNA短链寡核苷酸,克隆到Pgenesil-1质粒载体中,构建△Np63特异shRNA表达质粒,在转染试剂介导下转染5637细胞,6孔板每孔加入0.4μg质粒。半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测△Np63 mRNA表达水平。结果经PstI SalI双酶切及测序鉴定△Np63-shR- NA表达质粒构建成功。在受转染的5637细胞内△Np63-shRNA干预组△Np63 mRNA水平明显低于control组与PBS组(p<0.05),与control组和PBS组比较抑制率分别为57.3%和63.0%。结论△Np63特异性shRNA在5637细胞中对△Np63 mRNA表达显示出很好的抑制作用。     

我院1354例门诊病例统计分析

目的分析1354例疾病病例的病因、年龄分布以及季节分布特点。方法疾病分类按照国际疾病分类ICD-10分类原则分类，随机抽取我院2006年12月至2007年12月的1354例门诊病例进行统计分析。结果发病最高的前五位疾病依次为高血压（15．14％）、上呼吸道感染（10．19％）、糖尿病（9．38％）、尿路感染（9．01％）以及扁桃体炎（8．27％）。在1354例病例中，以40～59岁年龄段病例最多见，占总病例数的36．57％。高血压与糖尿病多发于40—59岁年龄段。结论高血压、糖尿病等年龄相关性疾病逐年呈现低龄化趋势，提示人们在工作之余必须要注意调节生活节奏，改善饮食结构和生活习惯。呼吸系统疾病的发生与季节有明显的相关性，易发于气候多变、温差较大的季节，对于特定的人群，在这些特定的季节尤应注意身体的调适。     

短发卡RNA表达质粒的构建及对ΔNp63基因的抑制作用

目的构建ΔNp63特异性短发卡RNA（shRNA）表达质粒，检测ΔNp63-shRNA对膀胱移行细胞癌（TCCB）细胞株5637中ΔNp63信使RNA（mRNA）表达的抑制作用。方法设计合成ΔNp63 shRNA短链寡核苷酸，克隆到Pgenesil-1质粒载体中，构建ΔNp63特异shRNA表达质粒，在转染试剂介导下转染5637细胞，6孔板每孔加入0．4μg质粒。半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测ΔNp63 mRNA表达水平。结果经PstI＋Sail双酶切及测序鉴定ANp63，shR．NA表达质粒构建成功。在受转染的5637细胞内ΔNp63-shRNA干预组ΔNp63 mRNA水平明显低于control组与PBs组（P〈0．05），与control组和PBS组比较抑制率分别为57．3％和63．0％。结论ΔNp63特异性shRNA在5637细胞中对ΔNp63 mRNA表达显示出很好的抑制作用。     

榄香烯对人肺腺癌细胞A549作用机理的初步研究

目的：研究榄香烯对体外培养的人肺腺癌细胞株A549的作用及其机制。方法：采用MTTI地检测药物对细胞的抑制作用。流式细胞术检测细胞周期变化以及电镜观察细胞的形态变化，结果：榄香烯能明显抑制肺腺癌细胞A549的生长，其半数生长抑制剂量为124．61μg/ml，流式细胞术证实榄香烯能阻滞肺腺癌细胞从S期进入G2／M期；透射电镜超微结构可见细胞浆内脂滴增多和坏死细胞明显增多的形态变化。结论：榄香烯能抑制肺腺癌细胞的生长，并阻滞肺腺癌细胞从S期进入G2／M期。     

CK20单克隆抗体研制及鉴定

目的：研制CK20单克隆抗体。方法：采用CK20抗原免疫小鼠，用免疫的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞通过PEC4000融合，以HT培养基选择培养，间接ELISA法筛选阳性孔和有限稀释法克隆细胞后，接种小鼠腹腔制备腹水抗体，抗体纯化采用以SPA—Sepharose CL-4B为固定相的亲和层析法，最后用双向琼脂扩散法、Western blot和间接ELISA法鉴定抗体的特异性、Ig亚型和效价。结果：获得一株稳定分泌抗CK20单克隆抗体的杂交瘤细胞，染色体众数为101（99～103），其腹水抗体和纯化的抗体效价均为1：10^6，属IgGl亚型。结论：成功获得了CK20单克隆抗体，命名为120031030，其特异性强，效价高。     

ΔNp63 shRNA表达质粒的构建及在膀胱癌中的作用

目的构建ΔNp63特异性短发夹RNA(shRNA)的表达载体,探讨其在膀胱移行细胞癌(TCCB)细胞中的作用。方法设计、合成ΔNp63特异性的短链寡核苷酸,克隆到Pgenesil-1质粒载体中,构建ΔNp63特异shRNA表达载体,转染TCCB细胞；免疫组化S-P法检测ΔNp63蛋白表达水平,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ΔNp63 mRNA的表达水平,流式细胞术(FCM)检测细胞周期,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性。结果经PstⅠ和SalⅠ双酶切和测序鉴定,成功构建ΔNp63-shRNA质粒表达载体,并能够成功转染TCCB细胞。转染后可显著抑制细胞中ΔNp63蛋白和mRNA的表达,其中ΔNp63 mRNA的表达抑制率为63．0%；G_0/G_1期细胞显著增加,为(66．38±3．08)%,S期细胞显著减少,为(33．68±2．06)%；细胞增殖活性明显降低。结论运用Pgenesil-1质粒载体构建的ΔNp63-shRNA表达载体可成功转染TCCB细胞,有效抑制ΔNp63蛋白和mRNA表达,并可调控TCCB细胞的细胞周期,抑制其增殖。     

胶乳凝集法测定尿中微量血红蛋白试剂盒的初步研制

血红蛋白(Hb)是红细胞的主要成分,具有类似过氧化物酶活性,而尿微量Hb测定目前常用的化学法及试带法(尿分析仪上用干化学法)都是利用了Hb有类似过氧化物酶作用的原理,故特异性、准确性较差,为此我们进行了免疫法检出尿微量Hb的研究,现将结果报告如下:     

磷脂酶C-ε信号转导及调控机制的研究进展

1998年Kataoka等在秀丽隐杆线虫中发现一种能与Ras蛋白相结合的新的磷脂酶C(PLC),证明是Ras的效应子,其相对分子质量为210 kD,命名为PLC210[1].PLC210的保守结构(X,Y和C2结构域)与其他PLC家族成员具有高度同源性,但还含有另外两个功能结构域,分别为RA结构域和CDC-25结构域,推测其为一种新的PLC同工酶.随后在哺乳动物中克隆出与PLC210同源序列的PLC,命名为PLC-ε.人PLC-ε存在两种剪接体,分别含有1 994个氨基酸残基和2 303个氨基酸残基,这两种剪接体仅仅N-端不同[2].     

hepaCAM基因对膀胱癌细胞体外生物学的影响

目的 研究野生型hepaCAM基因对人类膀胱癌T24细胞体外生物学影响.方法 脂质体法转染pEGFP-N2-hepaCAM质粒入T24细胞,激光共聚焦显微镜检测其蛋白定位;筛选稳定表达细胞株,Western blot检测蛋白表达.细胞黏附、基质胶侵袭实验及MTT实验研究该基因对细胞黏附力、活动力及增殖力的影响.结果 hepaCAM在单个细胞中分布在细胞核周边区域,相互连接细胞中主要分布于细胞间相互接触区域.获得稳定表达hepaCAM基因的T24细胞.体外黏附实验、基质胶侵袭实验证明实验组细胞黏附力及活动力明显高于空白组及阴性对照组(P＜0.01).MTT法检测转染hepaCAM基因细胞增殖力明显低于空白组及阴性对照组(P＜0.01).结论 hepaCAM基因可显著抑制人类膀胱癌T24细胞恶性行为,可能是通过增强细胞-基质间黏附及抑制细胞增殖力,从而对抗肿瘤细胞的浸润和转移.     

PLCε siRNA转染对膀胱癌细胞株T24侵袭能力的影响

目的:研究磷脂酶C-ε(Phospholipase C epsilon,PLCε)siRNA表达质粒的转染对人膀胱癌细胞系T24侵袭转移能力的影响.方法:分别将携有PLCε siRNA基因的真核表达质粒两对p11-PLCε和p12-PLCε载体体外转染T24细胞,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测PLCε mRNA的表达情况,应用Transwell小室侵袭试验、明胶酶谱分析分别研究转染前、后膀胱癌细胞侵袭转移能力的变化,并以空载质粒HK-A转染和未转染细胞为对照.结果:RT-PCR检测显示p11-PLCε,p12-PLCε转染成功后T24细胞PLCεmRNA表达明显比空质粒HK-A转染和未转染细胞减弱;p12-PLCε siRNA转染细胞穿透侵袭小室滤膜的数目(26.8±5.8)和p11-PLCεsiRNA转染细胞穿透侵袭小室滤膜的数目(25.8±6.2)明显少于未转染细胞(34.8±6.9)和HK-A转染细胞(33.8±5.7)(P＜0.01);明胶酶谱分析显示转染P11-PLCε、p12-PLCε均使细胞分泌MMP-2、MMP-9明显低于未转染细胞和HK-A转染细胞.结论:推测转染外源性PLCεsiRNA基因能下调PLCε基因的表达并能抑制膀胱癌细胞侵袭转移.