铜绿假单胞菌烧伤患者分离株qacE△1-sull基因检测及临床意义

目的 了解分离自烧伤病房患者的铜绿假单胞菌中消毒剂-磺胺耐药qacE△1-sull基因的存在状况.方法 采用GNS-448药敏卡及K-B法测定抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)测定qacE△1-sull基因并进行序列分析.结果 32株铜绿假单胞菌对氨苄西林、头孢呋辛、头孢西丁、复方新诺明完全耐药,对阿米卡星的敏感率最高为68.0%,对庆大霉素的敏感率为46.9%,而对亚胺培南、美罗培南的耐药率分别达到68.8%、59.4%;16株(50.0%)qacE△1-sull基因阳性.结论 分离自烧伤患者的铜绿假单胞菌耐药严重,qacE△1-sull基因携带率较高.     

阴沟肠杆菌中发现β-内酰胺酶基因新亚型blaLAP－2

目的 了解解放军第98医院临床分离的HZB9055号阴沟肠杆菌中常见耐药相关基因存在状况.方法 于2004年5月从住院患者分离到HZB9055号菌株,采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析41种(群)耐药基因.结果 HZB9055号菌株共计检出3种基因,分别为blaLAP、blaMIP、qnrS,其余38种基因均阴性;blaLAP基因扩增序列全长含858个核苷酸,与窄谱β-内酰胺酶LAP-1(GenBank注册号:EF026092)相比,第193位氨基酸有不同,被命名为LAP-2(GenBank注册号;EU159120).结论 HZB9055号阴沟肠杆菌中至少存在3种耐药基因,其中blaLAP-2基因为一种新发现的β-内酰胺酶基因亚型.     

泛耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因研究

目的 了解1株对临床常用18种抗菌药物(包括亚胺培南、美罗培南)均耐药的肺炎克雷伯菌(KPN)所携带的耐药基因状况.方法 对该株KPN进行了9类耐药基因的PCR法检测,包括β-内酰胺酶基因blaTEM、blaSHV、blaLEN、blaOKP、blaCTX-M-1、2、9群、blaOXA-1、2、10群、blaCARB、blaPER、blaVEB、blaGES、金属β-内酰胺酶基因blaIMP、blaVIM、blaKPC,AmpC酶基因blaDHA、blaACT/MIR、blaCMY/MOX、blaCMY/LAT,氨基糖苷修饰酶基因aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ b、aac(6')-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ,喹诺酮类耐药基因qnrA、TMP耐药基因dfrA1、dfrA17,消毒剂磺胺耐药基因qacE△1-sul1,整合子遗传标记基因intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3,转座子遗传标记基因tnpA、merA,共计36种.结果 KPN共检出7种耐药基因,分别为β-内酰胺酶基因blaTEM,blaSHV,金属β-内酰胺酶基因blaKPC-2,氨基糖苷修饰酶基因aac(3)-Ⅱ,ant(3")-Ⅰ,消毒剂磺胺耐药基因qacE△1-sull,整合子遗传标记基因intⅠ1.结论 在该株泛耐药KPN中发现了少见的blaKPC-2金属β-内酰胺酶基因,该菌对18种抗菌药物的耐药可能与其同时携带有多种耐药基因有关,临床应对此类菌株引起重视.     

肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶表型及β-内酰胺酶基因型检测

目的 了解临床分离的肺炎克雷伯菌(KPN)产超广谱β-内酰胺酶(ESBIs)及β-内酰胺酶(BLA)基因型存在状况.方法 在2005年9月-2006年4月从住院患者中分离25株KPN,采用美国CLSI推荐的表型确证试验方法检测ESBLs,用PCR及序列分析的方法分析21种(群、簇)BLA基因bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(LEN)、bla_(OKP)、bla_(CTX-M-1)群、bla_(CTX-M-2)群、bla(CTX_M_9)群、bla_(OXA-1)群、bla_(OXA-2)群、bla_(CARB)、bla_(PER)、bla_(VEB)、bla_(GES)、bla_(LAP)、bla_(DHA)、bla_(ACT/MIR)、bla_(CMY/MOX)、bla_(FOX)、bla_(CMY/LAT)、bla_(ACC).结果 25株KPN中,ESBLs阳性14株(56.0%)、阴性5株(20.0%)、"不确定"6株(24.0%);bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(CTX-M-1)群、bla_(OXA-10)群、bla_(LAP)和bla_(DHA)基因阳性株数(%)分别为20株(80.0%)、1株(4.0%)、1株(4.0%)、20株(80.0%)、1株(4.0%)、8株(32.0%),而其余15种(群、簇)基因均阴性;21种(群、簇)BLA基因总阳性率为92.0%;其中HZ12593号菌株bla_(LAP-2)基因序列已登录GenBank,注册号为EU529981.结论 临床分离的KPN产ESBIs比例较高,至少存在6种BLA基因,BLA基因型以bla_(TEM)和bla_(OXA-10)群为主,KPN携带bla_(DHA)基因可以影响ESBLs表型确证试验结果.     

铜绿假单胞菌“泛耐株”耐药相关基因研究

目的 研究"泛耐"铜绿假单胞菌中多种耐药基因的存在情况及耐药机制.方法 采用聚合酶链反应(PCR)法检测22株"泛耐"铜绿假单胞菌的β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因、喹诺酮类耐药基因、耐消毒剂基因(qacE△l-sull)和整合酶基因.结果 PCR扩增结果显示22株菌中oprD2、blaCAEB、gyrA、aac(6')-Ⅰb、ant(2")-Ⅰ和qacE △ J-sull基因均阳性;blaSHV、blaSPM、blaGIM、blaDHA、blaOXA-10、blaGES、blaPER、aac(3')-Ⅰ和aac(6')-Ⅱ基因均阴性;blaIMP、blaTEM、blaVEB、aac(3')-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ、int Ⅰ1和blaVIM阳性率分别为95.5%、77.3%、13.6%、4.5%、4.5%、4.5%和4.5%.结论 oprD2基因阳性说明这些泛耐菌株中外膜蛋白并未缺失,多种耐药基因同时存在是本研究中铜绿假单胞菌"泛耐"的根本原因.     

国内2003～2007年铜绿假单胞菌耐药相关基因研究进展

铜绿假单胞菌(Pseudomon asaer-uginosa,PA)广泛分布于自然界及健康人的皮肤、肠道和呼吸道。PA菌是条件致病菌,已是医院感染病原菌最常见菌种之一。国内首篇PA菌抗菌药物耐药相     

鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药性及耐药基因型分析

目的:了解南京地区鲍曼不动杆菌耐药特点及分析碳青霉烯酶、金属β-内酰胺酶基因型。方法:K-B法测定临床分离的73株鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美洛培南的耐药性;PCR检测碳青霉烯酶(OXA)、金属β-内酰胺酶(IMP和VIM)耐药基因,并对OXA基因进行测序。结果:73株鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美洛培南耐药率均为10.9%;8株耐药菌中3株是IMP型,2株是VIM型,4株是OXA型,其中有1株菌含有OXA及IMP两种基因型。4例OXA型标本经测序,在Genbank中进行同源性比对,均为OXA-23亚型。结论:目前南京地区鲍曼不动杆菌的耐药性与其携带OXA-23、IMP和VIM基因相关。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌β内酰胺类药物耐药相关基因的研究

目的为了解临床分离的耐亚胺培南的铜绿假单胞菌（imipenem—resistante pseudomon asaeruginosa，IMPRPa）β内酰胺类药物耐药相关基因存在状况。方法将分离所得的18株全部耐亚胺培南的PA菌株进行产金属β内酰胺酶表型检测，聚合酶链反应（PCR）法对耐亚胺培南的铜绿假单胞菌进行β内酰胺类药物耐药相关基因在检测，并对部分耐药基因进行了DNA测序。结果10（55．6％）株产金属β内酰胺酶纸片协同法检测阳性，IMP、VIM、DHA、GES、CARB、TEM阳性率分别为22．2％（4／18）、33.3％（6／18）、11．1％（2／18）、33．3％（6／18）、16．7％（3／18）、22．2％（4／18），oprD2缺失率77．8％（14／18）。结论铜绿假单胞菌可存携带2种以上β内酰胺酶基因，能在同种和不同种细菌间横向传播，并产生多重耐药，严重影响临床的抗感染治疗。     

流感嗜血杆菌耐药基因及耐药机制分析

目的从分子水平了解南京地区儿童流感嗜血杆菌(Hi)对氨苄西林的耐药状况。方法对158株Hi临床分离株进行β-内酰胺酶检测,PCR扩增β-内酰胺酶的TEM及ROB编码基因,并克隆到T载体中作核酸序列测定与分析。结果本地区儿童感染Hi对氨苄西林的耐药率为41.77％。β-内酰胺酶阳性率为40．51％。TEM基因阳性89株,ROB阳性基因1株。63株耐氨苄西林且β-内酰胺酶阳性,耐药性主要是由于产生β-内酰胺酶和TEM基因。2株耐氨苄西林且β-内酰胺酶阴性。1株β-内酰胺酶阳性,但未检测到TEM或ROB基因。结论本地区儿童感染Hi对氨苄西林的耐药情况不容乐观,耐药机制主要是产生β-内酰胺酶,且以TEM型为主。     

聚合酶链式反应与新生儿感染性疾病

聚合酶链式反应（PCR）由Mullis于1985年发明。作为一种新颖的基因诊断技术已在遗传病及感染性疾病的诊断中广泛应用。PCR技术被誉为对医学、生物学技术的一场革命和建立了新的里程碑，为此Mullis荣获了1993年的诺贝尔奖。该技术基本原理同DNA的天然复制。实验时在耐热DNA聚合酶、底物（dNTPs）、引物（一对）和相应的缓冲体系中，将DNA变性（93C数分钟）、复性（55℃数分钟）、延伸（72℃数分钟）共热循环30周期。数小时内将靶基因扩增一百万倍以上，扩增产物经电泳染色可直接行肉眼观察判定。PCR技术具有高灵敏、高待异、操作简…