肿瘤相关中性粒细胞研究进展

摘要： 近年来,中性粒细胞在肿瘤中的作用和意义逐渐为人们所认识。不同类型肿瘤患者肿瘤组织中浸润的中性粒细胞数量增加,与预后不良明显有关。但是对于中性粒细胞在肿瘤发生、发展中的作用机制尚不清楚。研究证实,中性粒细胞具有促肿瘤生长、转移、血管生成和抑制免疫的作用。本文主要综述了肿瘤相关中性粒细胞的研究进展。     

环状RNA在胃癌研究中的意义

环状RNA(circRNA)是一类无5'帽子结构或3'末端poly(A)尾巴的单链共价闭合的非编码RNA,其丰富多样,还具有保守性、稳定性和特异性.胃癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,发病率及病死率均较高.目前大量研究发现环状RNA通过作为微小RNA(microRNA,miRNA)的分子海绵,发挥与RNA结合蛋白(RBP)相互作用或翻译蛋白等功能,从而参与多种疾病的发生发展,其中就包括胃癌.环状RNA在胃癌中的特异表达展现了其成为新的生物标志物的潜力,对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移侵袭均有影响,这为胃癌的治疗提供了新思路.本文将从环状RNA的生物特性、功能及其与胃癌的关系,存在的临床意义等方面进行综述.     

LncSox4在非小细胞肺癌中的表达及生物学作用

目的检测LncSox4在人非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达水平变化,初步探讨其生物学作用及机制,为NSCLC诊断和治疗提供新的生物指标。方法采用qRT-PCR检测LncSox4在NSCLC患者肿瘤组织中的表达水平。通过克隆形成试验、生长曲线分析、Transwell迁移和侵袭试验检测敲除LncSox4对A549细胞生物学功能的影响;采用流式细胞术分析细胞周期情况;采用qRT-PCR和western blot检测上皮-间质转化(EMT)相关基因及蛋白质的表达水平。结果与癌旁对照相比,LncSox4在NSCLC癌组织中呈显著高表达(t=7.109,P0.01);LncSox4基因沉默后,A549细胞生长速度减缓,细胞克隆形成数量减少(P0.01),细胞迁移和侵袭能力降低(P0.01),诱导细胞发生G_1期阻滞(P0.01);LncSox4基因沉默抑制A549细胞中Cyclin D1、c-Myc、N-cadherin、Vimentin蛋白的表达,促进E-cadherin蛋白的表达;LncSox4基因沉默还显著降低EMT相关转录因子Snail、Slug和Twist的表达水平。结论 LncSox4在NSCLC中高表达,通过影响细胞增殖、迁移和侵袭促进NSCLC恶性进展,有望成为NSCLC诊疗新靶点。     

LINC00978在非小细胞肺癌中的临床价值和生物学作用

目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)LINC00978在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)中的表达变化及生物学功能,并初步探讨其作用机制。方法采用qRT-PCR检测NSCLC患者肿瘤组织与血清中LINC00978的表达水平。通过CCK-8、平板克隆、Transwell迁移和侵袭实验观察LINC00978敲减和过表达对A549细胞生物学功能的影响。采用流式细胞术、qRT-PCR和western blot探究LINC00978的作用机制。结果 LINC00978在NSCLC患者肿瘤组织(t=2.465,P0.05)和血清(t=8.781,P0.01)中呈高表达。LINC00978敲减抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭能力(P均0.01),诱导G_1期阻滞以及细胞凋亡(P均0.01)。LINC00978敲减下调Cyclin D1和Bcl-2的表达而上调Bax的表达(P均0.05)。此外,LINC00978敲减抑制N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug和Twist的表达而促进E-cadherin的表达(P均0.05)。LINC00978过表达则具有相反作用。结论 LINC00978在NSCLC中高表达,并促进NSCLC发生、发展,具有成为NSCLC诊断及治疗新靶点的潜能。     

人CD44基因真核表达载体构建及在乳腺癌细胞中的表达

目的:从人类乳腺癌耐多柔比星细胞株细胞(MCF-7/Adr)中克隆CD44基因并构建CD44基因真核表达载体pcDNA3.1-CD44;将pcNDA3.1-CD44稳定转染入人乳腺癌细胞株(MCF-7)细胞中.方法:从MCF-7/Adr细胞中提取总RNA进行RT-PCR,获得全长的cDNA模板;将含有CD44基因的cDNA模板使用限制性内切酶进行双酶切获得带有酶切位点的CD44基因,再将带有酶切位点的CD44基因经TA克隆后测序验证,然后亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,双酶切鉴定后再次测序验证.脂质体法将pcDNA3.1-CD44质粒转染到MCF-7细胞中,48小时后RT-PCR和流式细胞术检测转染前后CD44基因、蛋白在MCF-7细胞的表达变化.结果:成功从人MCF-7/Adr细胞中克隆获得CD44基因并构建真核表达载体,转染后在MCF-7中检测到CD44基因mRNA和蛋白水平表达上调;将上述表达CD44基因及蛋白的瞬时转染MCF-7细胞经G418筛选两周后获得阳性克隆.结论:成功克隆和建立人CD44基因真核表达质粒;pcDNA3.1-CD44能在MCF-7细胞中表达;在MCF-7/Adr中新发现一种CD44基因的变异体(基因库号FJ216964);这为进一步研究其基因功能打下了基础.     

骨髓间质干细胞突变的致瘤肿瘤干细胞分离及培养

目的建立合适的骨髓间质干细胞突变的肿瘤细胞系F6(肿瘤干细胞)分离及体外长期培养方法并探讨其生物学特性。方法采用抗CD133-PE抗体经流式细胞仪分选F6肿瘤干细胞(F6 CSCs),研究不同培养体系对F6 CSCs体外生长的影响,探讨最适体外培养条件。结果一次分选获得F6 CSCs纯度达到80%。分选的F6 CSCs对Balb/c小鼠有体内致瘤能力,在含2%胎牛血清的L-DMEM营养液中可以长期稳定的培养,其CD133表面标志的表达维持在68.87%。结论低浓度胎牛血清的培养液能维持F6 CSCs的生长并保留其相应的生物学特性,这为肿瘤干细胞体外培养及研究提供了新的思路和方法。     

血管内皮生长因子基因多态性与子宫内膜异位症的相关性

目的：探讨温州地区人群中血管内皮生长因子（VEGF）基因多态性与子宫内膜异位症（简称内异 症）遗传易感性的关系。方法：应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析技术（PCR-RFLP）对2014 年3月至2015年3月在温州医科大学附属第一医院妇科就诊的150例卵巢型内异症患者（内异症组）和150 例健康对照者（对照组）进行VEGF基因rs3025040C/T、rs10434G/A多态性位点进行分析,分析等位基因 及基因型的分布及其与内异症发病的风险关系。结果：内异症组患者VEGF-rs3025040C/T位点C、T等位 基因频率分别为76.67%和23.33%,对照组为58.00%、42.00%,差异有统计学意义（χ2=23.762, P ＜0.001, OR =1.800,95% CI =1.410～2.298）,提示在VEGF-rs3025040C/T位点上携带有C等位基因的妇女更易得内异症。 内异症组患者VEGF-rs10434G/A位点G、A等位基因频率分别为60.00%和40.00%,对照组为81.67%、18.33%, 差异有统计学意义（χ2=34.084, P ＜0.001, OR =1.344,95% CI =1.207～1.497）,提示在VEGF-rs10434G/A位 点上携带有A等位基因的妇女更易得内异症。结论：VEGF-rs3025040C/T、rs10434G/A位点多态性与内异 症发生的易感性有关。     

胃癌间质干细胞调节中性粒细胞极化的作用及分子机制北大核心CSCD

目的 :探讨胃癌间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)条件培养液对调节中性粒细胞极化的作用及可能的分子作用机制。方法:采用免疫组织化学和HE染色法检测胃癌组织中中性粒细胞和MSCs的浸润情况。采用趋化实验检测胃癌MSCs条件培养液对中性粒细胞的趋化作用;用胃癌MSCs条件培养液处理中性粒细胞18 h后,FCM法检测中性粒细胞的凋亡情况;实时荧光定量PCR法检测中性粒细胞中抗凋亡相关基因MCL-1以及极化相关基因自杀相关因子(factor associated suicide,FAS)、细胞间黏附分子-(1intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1,MCP1,又称为CCL2)和白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)m RNA的表达情况。将胃癌MSCs条件培养液处理的中性粒细胞作用于胃癌SGC-7901细胞,采用Transwell小室迁移实验检测对胃癌SGC-7901细胞迁移能力的影响。蛋白质印迹法检测胃癌MSCs条件培养液处理的中性粒细胞中细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路的活化情况。结果 :胃癌组织中存在中性粒细胞和MSCs的浸润。胃癌MSCs条件培养液能高效诱导中性粒细胞的趋化(P<0.01);胃癌MSCs条件培养液处理后的中性粒细胞,凋亡率明显下降(P<0.05),MCL-1 m RNA的表达水平则明显上调(P<0.05);极化相关基因FAS和ICAM-1 m RNA的表达水平明显下调(P<0.05和P<0.01),CCL2和IL-8 m RNA的表达水平均明显上调(P值均<0.01)。SGC-7901细胞与胃癌MSCs条件培养液预处理的中性粒细胞共培养后,其迁移能力明显增强(P<0.01)。胃癌MSCs条件培养液预处理中性粒细胞15 min后,中性粒细胞中磷酸化ERK(phospho-ERK,p-ERK)蛋白的表达水平显著升高(P<0.05)。结论 :胃癌MSCs条件培养液能够调节中性粒细胞趋化并抑制其自发性凋亡;诱导中性粒细胞N2型极化并促进胃癌细胞迁移;这可能与中性粒细胞内ERK信号通路被激活相关。