抗CD20嵌合抗体片段Fab''突变体对B淋巴细胞凋亡及胞内Ca2+的影响

目的：研究抗CD20嵌合抗体片段Fab’突变体诱导B淋巴细胞凋亡的发生、凋亡相关基因表达以及细胞内钙离子的浓度变化。方法：以人B淋巴细胞（Raji细胞）为凋亡细胞模型，通过MTT法、Westernblot和流式细胞仪等方法观察bcl-2／bax基因表达、细胞色素c及胞内Ca^2＋的变化。结果：抗CD20嵌合抗体片段Fab’突变体对Raji细胞生长增殖具有明显的抑制作用，并呈剂量依赖性。细胞中bcl-2表达有微弱的下降，而bax表达明显升高，并出现细胞色素c的释放和胞内Ca^2＋浓度的升高。结论：抗CD20嵌合抗体片段Fab’突变体诱导Raji细胞凋亡，与bcl2／bax表达、细胞色素c的释放和胞内Ca^2＋浓度的升高有关。     

三步法制备级纯化抗CD20（Fab′）2

目的在小规模蛋白纯化系统AKTA prime上建立制备级纯化抗CD20(Fab′)2的方法。方法将通过高渗溶液提取的周质腔蛋白抗CD20(Fab′)2依次经过离子柱、疏水柱和亲和柱纯化,采用蛋白电泳和高效液相色谱法分析检测其分离效果及纯度,同时测定其与Raji细胞的结合活性。结果在该纯化条件下一次可获得8mg纯度为96.678%的抗CD20(Fab′)2,其与CD20 Raji细胞的结合活性与采用亲和柱联合分子筛柱得到的抗体活性基本一致。结论三步法制备级纯化抗CD20(Fab′)2操作简单,能获得制备级高纯度抗CD20(Fab′)2。     

补阳还五汤辅助针灸治疗中风对患者神经功能及运动功能的影响

目的探究补阳还五汤辅助针灸治疗中风对患者神经功能及运动功能影响。方法选取2018年4月至2019年12月本院收治的56例中风患者,根据治疗方式不同分为联合组和对照组,每组28例。对照组给予基础对症治疗及康复训练,联合组给予补阳还五汤辅助针灸治疗。比较两组患者神经功能、运动功能及日常生活能力。结果治疗后,联合组NIHSS评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),Fugl-Meyer评分高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),且联合组治疗后轻度功能缺陷患者占比高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),严重功能障碍缺陷患者占比低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论补阳还五汤辅助针灸可有效改善中风患者神经功能,恢复患者运动功能,提升患者日常生活能力,效果显著,值得临床推广应用。     

通窍活血汤剂联合氟桂利嗪对气虚血瘀型缺血性脑卒中患者症状的改善效果

目的探究通窍活血汤剂联合氟桂利嗪对气虚血瘀型缺血性脑卒中患者症状的改善效果。方法选取2018年8月至2019年10月本院收治的56例气虚血瘀型缺血性脑卒中患者,根据治疗方式不同分为联合组和单药组,每组28例。单药组给予氟桂利嗪治疗,联合组在对照组基础上加用通窍活血汤剂。比较两组患者中医症候积分、康复情况及生活质量改善情况。结果治疗后,联合组中医症候积分、NIHSS评分低于单药组(P<0.05),CSI评分、MBI评分高于单药组(P<0.05)。结论通窍活血汤剂联合氟桂利嗪可有效改善气虚血瘀型缺血性脑卒中患者的临床症状及神经功能,提高患者日常生活能力,促进康复,值得临床推广应用。     

阿糖胞苷增强K562细胞共刺激分子B7表达以及对T细胞的免疫应答

目的 探讨阿糖胞苷(Ara-c)对白血病细胞(K562)B7分子表达以及对T细胞免疫应答的影响.方法 用流式细胞术检测K562细胞经Ara-c处理后町分子的表达以及对T细胞表面标记的影响.MTT法检测不同效靶比的情况下,诱导后的K562细胞对外周血单个核细胞(PBMNC)的刺激作用,以及用RT-PCR法检测B7分子刺激PBMNC分泌细胞因子γ干扰素(IFN-γ)的测定.结果 Ara-c能刺激K562细胞B7分子的表达,呈时间依赖性.诱导后的K562细胞显著刺激PBMNC增殖并产生IFN-γ,并能检测到T细胞表面标记.结论 Ara-c通过刺激K562细胞B7分子表达,显著提高了白血病细胞的免疫原性.     

抗KDR单链抗体的构建、表达及生物学活性鉴定

目的: 构建并表达抗人血管内皮生长因子受体KDR单链抗体(scFv)蛋白, 并测定其生物学活性。方法: 设计合成抗KDR单抗 (mAb)Ycom1D3VH、VL引物, 通过重叠延伸拼接 (splicingoverlapextensive, SOE)PCR, 在VH 和VL基因间引入柔性短肽(Gly4Ser)3, 构建抗KDRscFv基因并进行序列分析。将其克隆入pAYZH原核表达载体, 在大肠杆菌中诱导表达, 并以ELISA及免疫荧光结合实验测定重组蛋白的生物学活性。结果: 序列分析表明, 抗KDRscFv基因的全长为 729bp, 编码 243个氨基酸。将重组体表达产物进行SDS PAGE及Westernblot分析显示, 融合蛋白的相对分子质量(Mr)约为 30 000, 同预期的结果一致。表达产物主要以不溶性包涵体的形式存在, 表达量占菌体总蛋白的 20%。表达产物经变性、纯化及体外复性后, 纯度达 90%以上。ELISA和竞争性免疫荧光结合实验显示, 重组小分子scFv可与可溶性KDR抗原及表达KDR受体的人脐静脉内皮细胞特异性结合, 保留了亲本mAb的抗原结合活性。结论: 成功地构建了抗KDRscFv基因, 并在大肠杆菌中功能性表达, 为靶向诊断、治疗及进一步基因工程改造奠定了基础。     

去除Etag标记的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体原核表达载体的构建及表达

目的:构建和表达不带Etag标记的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体(Diabody[CD3×Pgp]),并测定其生物学活性。方法:利用PCR方法构建不带Etag的Diabody[CD3×Pgp]原核表达载体,进行原核表达,制备抗抗CD3scFv亲和层析柱进行纯化,SDS-PAGE鉴定。通过间接免疫荧光法和竞争性免疫荧光结合流式细胞术(FCM)检测生物学活性。结果:无Etag的Diabody[CD3×Pgp]表达载体经测序证实其序列正确。SDS-PAGE电泳显示2条带,相对分子质量(Mr)分别为25000和26000,与预期Mr相符。去除Etag的Dia-body[CD3×Pgp]与K562/A02和Jurkat细胞结合阳性率分别为89.87%和83.95%。竞争结合实验中,与K562/A02和Jurkat细胞竞争后结合率分别为50.25%和43.78%。结论:成功构建了不带Etag的Diabody[CD3×Pgp]表达载体、进行原核表达及纯化。不带Etag的Diabody[CD3×Pgp]能特异性结合CD3和Pgp靶抗原,Etag标记去除后其生物学活性没有降低。     

男性2型糖尿病高三酰甘油-腰围表型与内脏脂肪面积相关性研究

目的 探讨男性2型糖尿病高三酰甘油血症-腰围表型(hypertriglyceridemic-waist phenotype,HTWC)与内脏脂肪面积(viceral fat area,VFA)的关系.方法 选取男性2型糖尿病患者154例,以三酰甘油≥1.7 mmol/L、腰围≥90 cm为切点,分为三酰甘油及腰围均正常组(A组)、单纯腰围高组(B组)、三酰甘油及腰围均高组(C组).收集腰围、身高、体重及VFA,检测三酰甘油、胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、尿酸水平.结果 总体HTWC检出率47%,A、B、C三组VFA超标检出率分别为18%、21%、57%.C组平均VFA明显高于A组、B组(P<0.05),C组平均高密度脂蛋白胆固醇明显低于A组、B组(P<0.05).年龄≥45岁组平均VFA、腰围、尿酸、胆固醇水平均明显高于年龄<45岁组(P<0.05).Logistic 回归分析显示,除胆固醇外,HTWC表型也是男性2型糖尿病患者伴VFA增多的危险因素(OR=3.381,95%CI:1.084~10.550).结论 男性VFA水平与年龄密切相关.HTWC是男性2型糖尿病患者合并VFA增多的危险因素,在VFA测定成本较高,不能普及的大环境下,可作为初筛VFA是否升高的简单指标.     

高校女教职工妇科疾病普查情况分析

目的：了解高校在职女教工的健康状况,发现女教职工妇科疾病的患病情况,提高她们的健康水平.方法：对参加普查的女教职工进行妇科内诊、宫颈脱落细胞涂片检查（巴氏法）辅以B超检查.对发现疾病的女教职工给予及时治疗及疗效追踪.结果：宫颈炎的患病率均居首位,2次普查结果显示,发现宫颈炎、阴道炎、附件及盆腔炎等妇科疾病的总体患病率呈下降趋势,但是子宫肌瘤、卵巢囊肿的患病率呈上升趋势.结论：加强妇女病的普查.定期体检,做到早期诊断、早治疗,加强生殖道感染的干预预防,缓解心理压力,保持心情舒畅,提高女教职工的健康水平.