靶向CD123的重组白细胞介素-3-力达霉素融合蛋白对白血病MO7e细胞的杀伤机制

 目的　研究白细胞介素-3-力达霉素（IL-3-LDM）融合蛋白靶向杀伤CD+123 肿瘤细胞的作用机制。方法　用CCK-8检测IL-3-LDM融合蛋白靶向杀伤人类原巨核细胞白血病MO7e细胞的作用,用IC20浓度的IL-3-LDM及LDM分别与MO7e靶细胞培养后,利用AnnexinV-FITC及碘化丙啶（PI）染色经流式细胞分选术检测分析细胞凋亡率和周期分布变化。结果　LDM、IL-3-LDM对MO7e细胞的IC50分别为116、50 pmol／L。经IC20浓度的IL-3-LDM（12 pmol／L）融合蛋白与LDM（30 pmol／L）分别处理MO7e细胞后,在24、48、72 h分别检测到细胞凋亡率呈逐渐上升趋势（IL-3-LDM组分别为26.1 %、59.3 %和62.1 %,LDM组分别为34.4 %、43.3 %和55.2 %）,且细胞在处理48和72 h后出现明显的G2／M期阻滞现象,与没有靶向的LDM药物作用机制一致。结论　IL-3-LDM融合蛋白作用机制与LDM一致,通过引起细胞G2／M期阻滞导致细胞凋亡进而死亡,证明IL-3靶向作用及其携带的高效药物LDM杀伤作用的有效性。     

CD20特异性启动子调控腺病毒分泌stTRAIL对淋巴瘤细胞的抑制作用

目的:研究腺病毒携带CD20启动子调控的TRAIL基因特异性杀伤B-NHL细胞的作用。方法:人工合成含有CD20启动子片段-分泌信号-异亮氨酸拉链-s TRAIL(aa114~aa281)-真核poly(A)序列的融合基因,装入腺病毒载体Ad Easy系统,包装出携带P20-st TRAIL序列的腺病毒感染细胞,采用荧光素酶报告基因法研究CD20启动子在CD20+细胞系中的特异性转录,Western blotting验证TRAIL蛋白在细胞内的特异性表达,体外MTT法检测TRAIL特异性抑制CD20+细胞生长的作用。结果:成功构建携带P20-st TRAIL序列的腺病毒载体并分别感染CD20阳性和阴性淋巴瘤细胞系后发现,CD20启动子仅在CD20+的BJAB淋巴瘤细胞中具有转录活性、启动s TRAIL表达并在体外形成具有生物学功能的同源三聚体结构;在细胞中和培养上清中均检测到st TRAIL在mRNA和蛋白水平的表达,但在CD20-细胞系中则无明显表达。体外功能实验显示,BJAB细胞在被Ad P20-st TRAIL感染后自身生长受到明显抑制,而Ad P20-st TRAIL感染的CD20阴性细胞以及空白载体感染的细胞未见生长抑制现象。结论:CD20启动子可以特异性调控腺病毒携带的治疗基因st TRAIL的表达,实现TRAIL对CD20+B-NHL细胞的靶向杀伤。     

二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体稳定性研究

目的:研究二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体(Diabody)在体外和体内的稳定性.方法:将抗CD3/抗Pgp Diabody置于37℃含0.2%人血清白蛋白(human serum albumin,HSB)的PBS中,孵育不同时间后,用流式细胞术(FACS)检测其结合活性.建立K562/A02裸鼠移植瘤模型,用Cy5荧光标记试剂盒标记抗CD3/抗Pgp Diabody,通过尾静脉注射给荷瘤裸鼠,在小动物活体成像系统上动态观察荧光信号.结果:二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp Diabody (Ds-diabdoy)体外孵育72小时后活性无明显下降,而改造前Diabody孵育1小时后活性即开始下降,24小时后活性完全丧失.Ds-diabdoy注射后72小时仍能在肿瘤部位检测到荧光信号,而改造前Diabody在注射后24小时肿瘤部位荧光信号消失. 结论:Ds-diabdoy较改造前Diabody稳定性大大提高.     

微型双功能抗体抗CD3／抗CD20的构建和表达

目的：构建和表达抗CD3／抗CD20微型双功能抗体,并测定微型双功能抗体的生物学活性。方法：采用PCR和overlap PCR方法构建抗CD3／抗CD20微型双功能抗体,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用Western blot和分了排阻层析鉴定纯化产物;采用FACS法和玫瑰花环试验鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。结果：DNA序列测定结果表明：抗CD3／抗CD20微型双功能抗体已构建成功,表达可溶性产物的产量达1mg/ml以上,纯化产物中二聚体的比例达90％,具有与Jurkat(CD3^ 0和Daudi细胞（CD20^ ）结合的活性,且能同时与Jurkat和Daudi细胞结合形成玫瑰花环。结论：利用Diabody形式,首次成功地构建了抗CD3／抗CD20微型双功能抗体,并获得较高表达,表达产物具有与相应2个靶抗原结合的活性。     

针灸治疗中风临床应用和机理研究的回顾

本文仅就近十年来针灸治疗中风的临床应用和机理研究进行了系统的回顾.从而为针灸临床工作者全面了解针灸治疗中风的发展概况提供便利.……     

2型糖尿病足截肢危险因素及血脂综合指数对下肢动脉钙化的预测效能

目的探讨2型糖尿病足患者截肢的危险因素及血脂综合指数(LCI)对2型糖尿病足患者并发下肢动脉钙化(LEAC)的预测效能。方法收集2018年3月至2021年4月于秦皇岛市第一医院诊治的80例2型糖尿病足患者的临床资料,所有患者入院后均行彩色多普勒超声检查,根据是否发生LEAC将患者分为钙化组(n=31)和非钙化组(n=49)。比较钙化组与非钙化组患者的血脂相关指标[甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)],并计算LCI。采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血脂相关指标对2型糖尿病足患者并发LEAC的预测效能。采用多因素Logistic回归模型分析2型糖尿病足患者截肢的危险因素。结果钙化组患者的TG水平、TC水平、LDL-C水平、LCI均明显高于非钙化组患者,而HDL-C水平明显低于非钙化组患者,差异均有统计学意义(P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,LCI对2型糖尿病足患者并发LEAC的预测效能最高。LCI预测2型糖尿病足患者并发LEAC的曲线下面积(AUC)为0.899,高于TG、TC、LDL-C、HDL-C单独预测的AUC(P<0.05)。单因素分析结果显示,截肢患者的年龄、TG水平、TC水平、LDL-C水平、LCI、多重耐药菌感染率、Wagner分级≥3级的患者比例均高于未截肢患者,溃疡面积大于未截肢患者,而HDL-C水平低于未截肢患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。截肢患者与未截肢患者的性别比较,差异无统计学意义(P>0.05)。多因素回归分析结果显示,年龄较高、LCI过高、Wagner分级≥3级均是2型糖尿病足患者发生截肢的危险因素(P<0.05)。结论LCI能够有效评估2型糖尿病足患者的LEAC情况,年龄较高、LCI过高、Wagner分级≥3级的2型糖尿病足患者存在较高的截肢风险。     

基于用户需求的农村地区药品供应链管理信息系统功能优化调查研究

目的调查了解农村地区药品供应链信息系统应用状况并提出优化完善的对策建议。方法通过自行研制的调查问卷,对上海市浦东新区农村地区药品供应链信息系统用户进行调查,共计调查304家村卫生室,351名系统用户。结果 67%的系统用户年龄超过40岁,63%为医生;应用频率最高的功能模块为药品采购管理和配送管理,用户对系统速度、界面友好程度和操作简便性、响应及时性的评价较高,而对系统满足需求程度的评价较差,对系统数据安全性的评价较差;用户最希望解决的前三位问题是:打通内部供应链、药品支付结算管理、实时进销存管理。结论系统初步满足了农村地区药品采购的信息化、规范化要求,建议基于用户需求,完善系统的人性化操作;结合功能需求,完善系统功能模块设计等。