基于FISH技术研究线粒体分裂蛋白Drp1 mRNA在小鼠杏仁复合体的分布

目的:最新研究表明,对线粒体的分裂进行精密调控的关键蛋白是Drp1(dynamin-related protein 1,Drp1)。杏仁复合体属于中枢神经系统边缘系统的一部分,功能重要但是非常复杂。本研究拟通过荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术对Drp1在杏仁复合体的分布特点进行描述。方法:本实验通过自行设计Drp1基因的引物、合成探针,同时采用(FISH)进行染色观察,得到Drp1 mRNA在小鼠杏仁核复合体的分布特点。结果:研究发现,Drp1 mRNA几乎分布于全部杏仁核,且在内侧杏仁核、皮质杏仁核和基底杏仁核的表达水平非常高。亚细胞水平研究进一步表明,Drp1 mRNA全部位于神经元胞体,特别是核周区域,而在突起处未见其表达。结论:以上结果提示,Drp1可能通过调节杏仁复合体处神经元的线粒体的分裂状态,参与动物的内脏活动、防御功能以及情绪变化。但是具体机制尚需进一步研究。     

脂质沉积性肌病1例

1临床资料
　　患者,女,53岁,农民,小学文化,以间断性肢体乏力15个月入院。入院前15个月患者无明显诱因出现双下肢乏力,行走500m左右即需休息3～5min方能继续行走,同时伴颈部酸困不适。乏力进行性加重,13个月前行走10m左右即需要休息,蹲下需扶膝方可站起。当地医院诊断为“多发性神经病？”,给予地塞米松治疗1周,颈部酸困消失,肢体乏力明显好转。6个月前再次出现肢体乏力、颈部酸困不适,行走200～300m即需要休息,同时抬头费力。2个月前蹲下起立、梳头、穿衣困难,行走10余米即需要休息。入院前10余天,起床需帮助,行走需搀扶,抬头不能。无肌肉疼痛、肉跳、皮疹,无发热、心悸、气短、腹痛、恶心及呕吐,无吞咽困难、饮水呛咳,无抽搐、大小便障碍,无家族史。体格检查：内科系统无明显异常。神经系统：胸锁乳突肌、斜方肌肌力Ⅱ级,其他颅神经无异常。全身肌容积正常。颈肌肌力Ⅱ级,双侧三角肌肌力Ⅴ级,肱二头肌Ⅳ级,对掌肌Ⅳ级,分指肌Ⅳ级,髂腰肌Ⅲ级,股四头肌Ⅳ级,四肢肌张力减低,Gowers征阳性,鸭步,无不自主运动,指鼻试验稳准,跟膝胫试验无力,不能完成,感觉无异常,腹壁反射正常。双侧肱二、三头肌腱反射、桡骨膜反射（+）,双侧膝腱反射、跟腱反射（-）。Hoffmann征、Babinski征阴性。脑膜刺激征阴性。辅助检查：肾功能、电解质、空腹血糖正常。肝功能：总胆红素11.80（5.10～28.00）μmol/L,直接胆红素2.50（0.00～10.00）μmol/L,谷丙转氨酶77.0（0～40）U/L,谷草转氨酶110.0（0～40）U/L,余正常。红细胞沉降率16mm/h,C反应蛋白正常。肌酶谱：乳酸脱氢酶1533.0（71.0～195.0）U/L,α-羟丁酸脱氢酶1065（0～182）U/L,肌酸激酶225（0～190）U/L,心肌型肌酸激酶同功酶14（0～24）U/L;晨起空腹活动前血乳酸3.79（0.50～1.80）mmol/L;血清叶酸2.10（7.20～15.40）μg/L,维生素B12含量正常;甲状腺功能、肿瘤系列、脑脊液正常;新斯的明试验（-）。神经电生理：股四头肌、胫前肌、肱二头肌针极肌电图未见异常;运动神经传导速度：腓总神经远端潜伏期延长（右5.1ms ,左5.2ms）,传导速度正常低限（40.8m/s）,左腓总神经动作电位波幅降低（3.1mV）;双侧正中神经、尺神经、胫神经运动传导速度正常,无传导阻滞;双侧正中神经、尺神经、腓肠神经感觉神经传导速度正常;双侧胫神经、正中神经及尺神经F波潜伏期及出现率均在正常范围;重复神经电刺激、低频刺激未见波幅递减,高频刺激未见波幅递增。视、听、体感诱发电位正常。四肢血管B超显示：双侧腋、桡、肘、股总、股深、股浅、腘、胫前及胫后动脉管腔内径正常,内膜光滑,血液回流畅通,未见明显异常血流信号,双侧股总、股浅、腘、胫前及胫后静脉管腔内未见明显异常回声。     

RT-PCR法测定牵拉性撕脱伤血管上P-选择素量的变化

目的 探讨牵拉性撕脱伤血管上的P-选择素的变化。方法 设定60、70、80及90g的牵拉力，利用血管损伤模型造成不同的血管损伤，用RT-PCR法测定损伤血管上P-选择素量的变化。结果 撕脱伤血管上P-选择素mRNA表达随牵拉力增加而升高，静脉的表达要高于动脉。结论 结合以前的相关实验，提示P-选择素与血栓形成关系密切。     

大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核内前原强啡肽与钙结合蛋白共存

目的 观察大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核（Vc)内前原强啡肽（PPD）免疫组化染色性结构的分布特点及其与钙结合蛋白calbindin D28k(CB)、caleratin(CR)或pavalbumin(PV)的共存情况。方法 免疫荧光组织化学双重染色技术。结果 PPD阳性神经元在Vc各层均有分布，以Ⅰ层和Ⅱ层外侧部（Ⅱo)最为密集。CB、CR和PV阳性神经元分布于Vc各层，Ⅱ层最为密集，Ⅰ和Ⅲ层较少。部分PPD阳性神经元同时也呈CB、CR或PV阳性，CB／PPD、CR／PPD和PV／PPD共存神经元主要位于Ⅱ层。CB／PPD共存神经元占CB或PPD阳性神经元的比率分别为3．9％和5．1％；CR／PPD共存神经元占CR或PPD阳性神经元的比率分别为3．4％和3．9％；PV／PPD共存神经元占PV或PPD阳性神经元的比率分别为14．0％和3．6％。结论 CB／PPD、CR／PPD和PV／PPD共存神经主要位于Vc的Ⅱ层，PPD与钙结合蛋白共存神经元可能参与传递面口部伤害性信息。     

降钙素基因相关肽在运动病大鼠前庭传出性中枢神经系统和前庭核的表达变化

目的 通过观察运动病大鼠降钙素基因相关肽（CGRP）在前庭传出性中枢神经系统和前庭核的表达变化，探讨中枢CGRP在运动病发病过程中的作用。方法 30只SD大鼠随机分为3组，其中不给予旋转运动刺激的为对照组，其它两组实验动物通过电动转椅分别给予3次和1次运动性刺激，刺激后即刻取各组动物脑干切片，用ABC法观察传出性前庭神经系统和前庭核的CGRP免疫组化反应变化。结果 运动病大鼠前庭传出性神经系统和前庭核CGRP反应与对照组相比明显增强，且刺激3次组强于刺激1次组。结论 CGRP在大鼠运动病的发病过程中发挥了一定的作用。     

神经生长因子及酪氨酸蛋白激酶受体AmRNA在创伤咬合犬牙周组织中的表达

目的研究咬合创伤时犬牙周组织中神经生长因子(nerve growthfactor,NGF)及其酪氨酸蛋白激酶受体A(tyrosine ki-nase A,trkA)mRNA表达水平的变化,探讨咬合创伤致口面痛的可能机制。方法高出咬合面1.5mm的镍铬合金嵌体黏固于18只杂种犬右侧上颌第一、二磨牙咬合面的I类洞形内,造成对牙合牙的创伤。黏固嵌体后3、7、14、30、60d时拔除双侧上下颌磨牙并立即刮取牙周膜组织。用逆转录(RT)-PCR检测牙周膜组织中NGF及trkAmRNAs表达水平并与无咬合创伤的对照组作比较。结果①咬合创伤3d起,创伤侧牙周组织内NGF mRNA急剧升高,14~30d时表达水平最高,30d时NGF mRNA是对照侧及对照组的3.0倍,60d时表达量下降。3~7d对照侧牙周组织NGF mRNA也上调(P<0.05)。②trkAmRNA表达水平的变化规律同NGF mRNA,trkA mRNA在30d时表达水平最高。③观测时间内,创伤侧NGF和trkA mRNAs的表达水平高于对侧(P<0.01),分别从咬合创伤3d和7d起高于对照组(P<0.05)。结论咬合创伤能导致牙周膜内NGF及trkAmRNA表达水平上调。单侧咬合创伤能导致双侧牙周组织NGF、trkA mRNA表达水平的改变。     

参与伤害性信息传递和调控的脊髓背角浅层神经元的突触联系

外周伤害性刺激通常引起令人不愉快的感觉,例如疼痛和痒。这种伤害性信息的整合最早发生于脊髓背角浅层,因此,脊髓背角浅层对于阐明伤害性信息传递与调控机制以及开发有效镇痛药物都具有重要意义。脊髓背角浅层内神经元及其突起相互联系形成多个环路,目前认为,正是这些神经环路为伤害性信息的整合提供平台,而这些环路在炎性或神经病理性痛条件下具有较大的可塑性改变。     

人体解剖学实验教学的几点体会

人体解剖学是研究正常人体形态结构及其发生发展的科学,是一门重要的医学基础课程,实验课教学是其必不可少的重要环节.实践证明,通过培养和激发学生学习人体解剖学的兴趣,合理运用PBL教学法,将多媒体教学法与传统教学模式相结合,并适当联系临床,可提高人体解剖学实验课教学质量.     

大鼠三叉神经节及尾侧亚核内PPTA mRNA在伤害性刺激条件下的时程变化

将福尔马林注入大鼠一侧口周皮下，用原位杂交法观察三叉神经节和三叉神经脊束核尾侧亚核内PPTAmRNA表达的时程变化。证明：PPTAmRNA在三叉神经节内的表达于刺激后4h有明显增加，24h达到高峰，48h后恢复至正常；在尾侧亚核中，PPTAmRNA的表达及变化主要限于Ⅰ、Ⅱ层，其时程变化与在三叉神经节中的变化相似。PPTAmRNA表达的增加仅出现于刺激侧的三叉神经节和尾侧亚核，而对侧和对照组则无明显变化。提示伤害性刺激可直接或跨突触增强尾侧亚核PPTAmRNA的表达，意味着PPTA在西口部伤害性信息的传递和调控中起重要作用。     

5-HT_1受体亚型mRNAs在坐骨神经分支选择损伤模型大鼠脊髓背角的表达变化

为探讨脊髓内5-HT1受体亚型在神经病理性痛信息传递和调控中的作用,本研究利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术观察了坐骨神经分支选择性损伤(SNI)模型大鼠脊髓背角内5-HT1A、5-HT1B、5-HT1D、5-HT1E和5-HT1F受体亚型mR-NAs表达变化。结果表明:损伤侧脊髓背角内5-HT1A受体亚型mRNA的表达水平在术后3d明显增高,7d达到高峰,随后开始下降,术后28d与正常对照相比仍有显著变化;5-HT1B受体亚型mRNA的表达水平也于术后3d开始显著增高,此后持续升高,至21d达到高峰,28d时有轻微下调,但高于对照水平;未观察到损伤侧脊髓背角内5-HT1D受体亚型mRNA表达水平的显著变化。5-HT1F受体亚型mRNA的表达水平于术后4d显著增高,此后一直维持该表达水平至28d。上述受体亚型在非损伤侧脊髓背角内的表达水平均无变化。在脊髓背角内未检测到5-HT1E受体亚型mRNA的表达。上述5-HT1受体亚型mRNA在SNI模型脊髓背角内具有不同的表达变化特点,提示不同的5-HT1各受体亚型在神经病理性痛信息的传递和调节中可能发挥着不同的作用。