登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核蛋白多克隆抗体的制备

目的制备登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核蛋白的小鼠多克隆抗体并进行鉴定。方法利用SDS-PAGE电泳的方法将纯化后的登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核表达蛋白浓缩,切割目的条带并研磨制成抗原,皮下多点分次注射BALB/c小鼠,采用Western-Blot、间接免疫荧光法对小鼠血清多克隆抗体进行鉴定。结果经SDS-PAGE电泳成功地将纯化后的登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核表达蛋白浓缩,并获取了抗登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核表达蛋白的多克隆抗体。结论本实验中所用到的登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核蛋白为可溶性抗原,通过切胶研磨制成颗粒性蛋白抗原能获得良好的免疫效果,该方法制备的抗原浓度及纯度高,由此获得了高效价高特异性的多克隆抗体。     

DEN-2分离株E基因部分序列原核蛋白表达

目的 通过构建登革2型病毒(DEN-2)临床分离株(B株)E基因区1-476bp的原核表达载体,进行原核表达,为DEN-2 E蛋白功能的研究提供基础依据.方法 将DEN-2 B株E基因区部分序列克隆入原核表达载体pET28a(+),命名为pET28a(+)-Eb;经酶切、PCR及测序鉴定后转化BL21(DE3)菌株,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白印迹(Western blot)鉴定表达蛋白;对表达蛋白进行纯化,并滴定对C6/36细胞的细胞半数致死量(TCID50).结果 成功构建了pET28a(+)-Eb原核表达重组质粒;SDS-PAGE分析表明,E基因区部分序列获得高效表达,其相对分子量约为23 kDa,表达量约占菌体总蛋白的29%;Western blot表明,该目的 蛋白可与DEN-2鼠单克隆抗体结合.用Ni柱亲和层析法纯化原核表达蛋白,纯度达90%.DEN-2 B株E基因部分序列原核表达蛋白对C6/36细胞的TCID50为10-5.31.结论 pET28a(+)-Eb可在BL21(DE3)菌株中高效表达;DEN-2 B株E基因部分序列原核表达蛋白对C6/36细胞有明显的细胞毒作用.     

白纹伊蚊贵州麻尾株垂直传播登革病毒实验研究

目的：研究白纹伊蚊贵州麻尾株对2型登革病毒(DEN—2)的经卵传递能力。方法：用DEN-2 NGC株感染白纹伊蚊贵州麻尾株，收集亲代及子1、2、3代蚊虫标本，提取亲代及子代蚊体内病毒总RNA，通过RT—PCR扩增蚊体内DEN—2病毒核酸，并用限制性核酸内切酶Hinf Ⅰ酶切鉴定。结果：感染白纹伊蚊贵州麻尾株后，子1～3代蚊体内均可检测出病毒核酸。结论：DEN-2能通过白纹伊蚊贵州麻尾株垂直传播，至少可以传3代。     

不同染色方法下柯斯曼螺旋体的形态差异及其诊断价值

柯斯曼螺旋体是一种黏液浓缩而成的小支气管管型,其形态为螺旋形,最常见于慢性阻塞性肺疾病。它的形成可能是小支气管分泌黏液过黏和纤毛活动较差,因而在小支气管腔内停留时间较长,使黏液浓缩的结果,柯斯曼螺旋体中心有一无色发亮的纤维,周围包绕一层柔细纤维。在工作中,无论是微生物学还是细胞学都可能遇到柯斯曼螺     

鸡卵黄抗幽门螺杆菌-IgY的特性研究

人群中幽门螺杆菌(Hp)感染率高，其与慢性胃炎、消化性溃疡和胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤有密切关系，是胃癌的Ⅰ类致癌原。目前常规治疗多采用抗生素三联疗法，但因Hp易耐药而导致治疗失败。鸡卵黄免疫球蛋白G抗体，又称IgY，是卵黄中惟一的免疫球蛋白，具有与血清IgG一样的抗体活性。特异性鸡卵黄抗体IgY对病原体感染的防御无动物种属的差异，这为IgY防治人类疾病的应用奠定了基础。抗Hp-IgY是治疗Hp的一个新研究方向，近年日益受到关注。因此，我们检测抗Hp-IgY的理化特性和生物学特性，为抗Hp-IgY的开发和应用奠定基础。     

登革2型病毒及其NGC株、M株E基因的原核蛋白对HUVEC通透性的影响

目的：研究登革2型病毒（DENV-2）、登革2型病毒国际参考株（NGC）E基因1-476序列原核蛋白、登革2型病毒贵州蚊虫分离株（M）E基因1476序列原核蛋白对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）通透性的影响.方法：将DENV-2 M株和NGC株E基因1-476序列原核表达产物及DENV-2接种于HUVEC单层细胞,用tran-swell法检测HUVEC的通透性,透射电镜观察细胞超微结构的改变.结果：DENV-2、NGC株E基因的原核蛋白、M株E基因的原核蛋白分别在30 min、3h、12 h时对HUVEC通透性的影响最为明显,透射电镜结果显示有细胞超微结构的改变.结论：DENV-2、DENV-2 NGC株E基因原核蛋白、M株E基因原核蛋白对HUVEC通透性、细胞超微结构有明显影响.     

从登革出血热病人血清分离到一株登革病毒

从登革出血热病人血清分离到一株登革病毒左丽１程明亮２刘乐和３郭辉玉３丁一生２凌天翼１１贵阳医学院免疫学教研室（５５０００４）２贵阳医学院传染病学教研室３广州中山医科大学微生物学教研室近年来，由登革病毒（ＤＶ）引发的登革出血热（ＤＨＦ）和登革休克...     

古尼拟青霉对小鼠体液免疫功能的影响

冬虫夏草在祖国医学中具有“保肺益肾”之功效,现代医学表明“肾”与免疫功能有密切关系。梁宗琦报导的我省黔南古尼虫草一无性型古尼拟青霉已证实能明显增强巨噬细胞的吞噬作用,为进一步探讨其对免疫功能的作用,本文研究了古尼拟青霉对小鼠特异性体液免疫的影响,现报导如下。     

女人子宫不能说的秘密

子宫是我们第一个温暖舒适的家，当我们长成一个女人后，它又帮我们诠释了女人的特殊——引起月经、孕育胎儿。对于它，应该特别优待。     

CCK-8法检测重组人白细胞介素-2的活性

目的:建立快速、简便、稳定的检测白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)活性的方法.方法:利用CCK-8(cell counting kit-8)试剂盒,检测3个生产厂家的IL-2对CTLL-2细胞株增殖的影响.结果:IL-2浓度在2～2 000 U/ml范围内,IL-2浓度与细胞增殖成正比,3个厂家的I...