2000-2006年北京地区婴幼儿乙型流感病毒感染的监测

目的 通过连续的监测,了解北京地区婴幼儿乙型流感的流行规律.方法 采集2000年11月-2006年6月间因急性呼吸道感染到门诊就诊和住院患儿的呼吸道标本10 770份,分别经传代狗肾细胞(MDCK细胞)进行病毒分离和(或)间接免疫荧光进行流感病毒的检测,分离阳性的病毒进一步用血凝抑制试验进行流感病毒株的型别鉴定.结果 从10 770份呼吸道标本中,检测到乙型流感病毒阳性标本384份(其中有376份分离出病毒),总阳性率为3.57%.2000年11月-2006年6月,每年有一个乙型流感病毒的流行峰,几乎都出现在流感流行季节的后期.除2003-2004年流行季节乙型流感病毒的最高阳性检出率为2.91%(2004年4月)外,其余各年份的最高阳性检出率都高于10.00%.2005-2006年流行季节乙型流感病毒的最高阳性检出率达到历年的最高峰(23.69%,2006年3月).每年的乙型流感病毒的流行高峰检出的病例都以门诊患儿为主.乙型流感病毒阳性的门诊患儿中,＞3岁的患儿占77.6%(264/340),乙型流感病毒阳性的住院患儿中,＜3岁的患儿占66.0%(29/44).乙型流感病毒与其他呼吸道病毒的合并感染少见.监测期间乙型流感病毒与甲3型流感病毒的阳性检出率相差不大,但2005年9月-2006年5月期间,乙型流感病毒的阳性检出率明显高于甲3型(23.9%对1.1%).2000-2002年流行季节北京地区婴幼儿中流行的乙型流感病毒为B/Yamagata/16/168系,2002-2003年流行季节B/Victoria/2/87系乙型病毒占优势,2003年以后的流行季节同时流行着以上两个系的乙型流感病毒,但以B/Yamagata/16/168系为主.2005-2006年流行季节B/victoria/2/87系乙型病毒占优势.结论 2000年11月-2006年6月每年2-5月份都有一次乙型流感病毒的流行(除2002-2003年流行季节为2002年12月),检测阳性的患儿以门诊患儿为主;目前北京地区B/Yamagata/16/168系和B/Victoria/2/87系乙型流感病毒同时流行.     

新生儿和小婴儿Ⅲ型副流感病毒肺炎55例

目的 探讨新生儿和小婴儿Ⅲ型副流感病毒(PIV3)肺炎的临床特点,提高对该病的诊治水平.方法 2005年8月-2007年7月依据肺炎临床诊断标准和实验室间接免疫荧光法诊断并住院治疗的新生儿和小婴儿PIV3肺炎55例,对该组患儿的临床特点进行回顾性分析,包括患儿的性别、年龄、症状、体征、肺部X线特点、实验室检查结果、治疗情况及预后等.结果 肺炎患儿55例中小婴儿占80%(44/55例),新生儿占20%(11/55例).季节分布以春夏最多.城郊病例占74.5%(41/55例),城区病例占25.5%(14/55例).均有咳嗽,刺激性咳嗽或痉挛性咳嗽34例(61.8%),咳嗽同时呛奶39例(70.9%);发热26例(47.3%),多为短期轻度发热;喘息14例(25.5%).肺部细湿啰音20例,其中伴喘鸣8例,有喘鸣音无湿啰音6例,肺部呼吸音粗伴痰鸣音21例.肺外表现主要有轻度吐奶、腹泻;胸片示右肺受累18例,左肺2例,双肺35例.病程1～2周16例,>2～3周28例,>3周11例,病程最长者32d.55例患儿中42例(76.4%)未使用抗生素,患儿均未接受抗病毒治疗.55例均临床痊愈出院,其中35例出院2周内随访,未见到肺部严重受损.结论 春夏是新生儿和小婴儿PIV3肺炎发病高峰,病程长,临床表现为刺激性咳嗽,右肺易受累,并发症少是其主要特征,临床特点和实验室检查相结合有利于准确诊断和治疗.     

常见重症病毒性疾病实验室诊断技术的现状和进展

从早有记载的狂犬病至近年备受关注的艾滋病，再到曾经引起全球恐慌的SARS以及人禽流感，病毒性疾病是威胁人类健康的一类重要疾病。病毒不仅可以引起人类许多严重传染病，而且某些人类肿瘤和慢性病也与病毒感染密切相关。面临21世纪，传染病将是国民健康的严重威胁，在过去的20年中，又发现了30多种新病原，其中一半以上是新病毒。     

2008至2009年北京地区分离的肠道病毒71型全基因组序列分析

目的 了解2008至2009年从北京地区手足口病(HFMD)患儿分离到的肠道病毒71型(EV71)全基因组序列特点(未包括多聚腺苷尾),以探讨基因序列的改变是否与病毒的致病性有关.方法 选取首都儿科研究所病毒研究室2008年分离到的5株EV71毒株和2009年分离到的4株EV71毒株,其中4株来源于重症HFMD患儿(伴...     

儿童急性呼吸道感染中腺病毒环介导等温扩增技术检测方法的建立

目的 利用环介导等温扩增技术(LAMP),建立一种快速可靠的儿童急性呼吸道感染标本中腺病毒检测方法.方法 根据腺病毒六邻体基因序列设计特异性LAMP引物,使用实时浊度仪对所建立的LAMP方法进行特异性与灵敏度评估后,对3、7、14型腺病毒分离株共11株进行了检测,随后对经直接免疫荧光法(DFA)鉴定为腺病毒阳性的呼吸道标本36例、腺病毒阴性的呼吸道标本72例分别应用巢式多重PCR和LAMP两种方法进行检测.结果 所建立的LAMP方法最低检出腺病毒DNA浓度为1.9×102拷贝/ml;方法特异性好,与其他病毒间无交叉反应;11株腺病毒分离株应用LAMP方法检测全部为阳性;36例已经过DFA鉴定为腺病毒阳性的标本中,应用LAMP法共检出腺病毒DNA阳性34例;72例DFA鉴定为腺病毒阴性的标本应用LAMP方法检测5例阳性.本研究建立的LAMP方法与DFA的总符合率为93.5％;与巢式多重PCR的总符合率为98.1％.结论 本研究建立的LAMP方法耗时短、灵敏度好、特异性高、操作简便,适用于儿童呼吸道标本中腺病毒的实验室快速检测,具有较好的实际应用前景.     

流感病毒快速检测方法在儿童流感样病例病原诊断中的应用

目的 对一种流感病毒快速检测方法在儿童流感样病例病原诊断中的应用效果进行评估。方法 2010年12月至2011年4月采集流感样病例患儿咽拭子标本350例,使用甲型及乙型流感病毒抗原检测试剂盒（QuickNaviTM-Flu,胶乳免疫层析法）进行抗原检测,并与病毒分离法进行比较。对于抗原检测和病毒分离法结果不相符的标本采用RT-PCR验证。结果 QuickNaviTM-Flu抗原快速检测流感病毒的结果与病毒分离法的一致性好,其检测甲型流感病毒的敏感度为89.9%,特异度为94.4%。经RT-PCR验证,14例抗原检测与病毒分离法结果不相符样本中13例结果为阳性(与抗原检测一致),使得该抗原检测方法的敏感度和特异度升至91.0%和99.6%。抗原检测乙型流感病毒经RT-PCR验证前后的结果一致,敏感度和特异度分别为87.5%和100%。该方法检测出的阳性标本中包括了甲3型、乙型（Victoria和Yamagata系）流感病毒和新发的2009甲型H1N1,并与常见的呼吸道病毒之间无交叉反应。结论 QuickNaviTM-Flu作为流感病毒抗原检测的试剂盒,可一次同时检测出甲型和乙型流感病毒,耗时短,操作简便,具有良好的敏感度和特异度,适用于流感样病例病原的快速诊断。     

北京地区2007-2008年G9型轮状病毒VP4、VP6、NSP4和NSP5基因分析

本研究室在2007-2008年收集的临床标本中再次发现北京地区儿童中有G9型轮状病毒的感染,并已对其进行了VP7基因分析和VP4基因巢式PCR分型~([1,2]).为进一步了解北京G9型轮状病毒的重要蛋白基因的进化,本研究室对2例从社区感染患儿中发现的北京G9型VP4、VP6、NSP4和NSP5基因进行测序及进化分析,结果简报如下.     

我国部分地区呼吸道合胞病毒地方株磷蛋白基因序列分析

目的 了解我国呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）地方株的Ｐ（Ｐｈｏｓｐｈｏｒｐｒｏｔｅｉｎ,Ｐ）蛋白基因状况和变异特征。方法 选取不同地区具有不同流行特征的６株ＲＳＶ地方株,以提取的病毒ｍＲＮＡ为模板进行逆转录－聚合酶链扩增（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增、目的基因的克隆及序列测定分析。结果 地方株和同亚型原型株之间Ｐ蛋白核苷酸序列及推导出的氨基酸序列同源性均超过９５％;不同亚型间存在较大差异,核苷酸全序列同源性低于８５％,尤其在３′端非编码区及中间变异区。由氨基酸序列推导出的疏水性分析图显示,Ａ、Ｂ亚型中间变异区存在疏水性的不同,这为解释Ａ、Ｂ亚型间Ｐ蛋白电泳迁移率的不同提供了一种可能。结论 我国ＲＳＶ地方株与原型株之间的Ｐ蛋白无论在核苷酸水平还是在氨基酸水平均存在一定的变异。这些结果对于了解我国ＲＳＶ地方株的基因状况提供了有益的     

呼吸道合胞病毒检测方法比较

为使临床治疗更及时有效，以通过不同方法的比较得到更快速，敏感，特异的早期从临床标本中检测呼吸道合胞病毒的方法，对收集的80份疑为病毒性急性下呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本应用不同方法进行了RSV检测，包括病毒分离，间接免疫荧光，巢械PCR及核酸杂交，80份标本都进行了病毒分离及巢式PCR：80份标本沉淀分为两组，第1组32份（32/80份）进行间接免疫荧光；第2组48份（48/80份）进行杂交，结果显示，80份标本中除外9份在病毒分离过程中出现污染，RSV分离组阳性标本22份（22/71份，31.0%)；间接免疫荧光组阳性标本14份（14/32份，43.8%)；核酸杂交组阳性标本22例（22/48，45.8%)。其中A亚型13份，B亚型9份；巢式PCR检测方法中共有66份（66/80份，82.5%)有目的基因片段扩增，A亚型45份，B亚型21份。结果表明，从临床标本中检测RSV以巢式PCR灵敏度最高；杂交法与免疫荧光法阳性率大致相同；病毒分离特异性好。但由于其他原因导致了分离率低。巢式PCR及核酸杂交可以对临床标本直接分型。