丹参酮生物合成相关SmERF108转录因子的鉴定及其靶基因分析＊

目的 鉴定与丹参酮合成相关转录因子AP2/ERF家族中SmERF108转录因子，并分析转录因子SmERF108的靶基因。方法 利用生物信息学在线分析平台如NCBI、PFAM等分析SmERF108的序列特征；MEGA-X软件用于构建SmERF108与不同功能转录因子的系统进化树；拟南芥原生质体转化法鉴定SmERF108蛋白的亚细胞定位；通过实时荧光定量PCR（Real-time qPCR）对SmERF108基因在丹参不同器官和组织差异表达进行检测；利用酵母体系对SmERF108的转录激活活性进行探究并用酵母单杂技术确定其靶基因。结果 SmERF108具有典型的AP2/ERF保守结构域，属于ERF-B3亚组，系统进化树和保守基序分析显示SmERF108与丹参中SmERF128、青蒿中AaERF2亲缘关系较近且保守基序分布一致；亚细胞定位显示SmERF108蛋白定位于细胞核；SmERF108基因在周皮中表达最高，且呈现周皮（R1）>韧皮部（R2）>木质部（R3）的规律；酵母自激活验证SmERF108具有转录激活活性，同时酵母单杂交确认其能与关键酶基因SmCPS1启动子结合。结论 鉴定到丹参中一个新转录因子SmERF108，生物信息学分析及差异表达分析预测与丹参酮合成相关，分子互作初步证实靶基因为SmCPS1二萜环化酶。     

薄层扫描法测定更年康冲剂中丹参酮ⅡA的含量

目的:测定更年康冲剂中丹参酮ⅡA的含量.方法:采用双波长薄层扫描法.结果:丹参酮ⅡA的点样量为0.50～2.50 μg,与吸收度积分值呈良好的线性关系,平均回收率98.50%,RSD＝1.71%.结论:该方法简便、灵敏、重现性好.     

丹参酮对离体肺的保护作用研究

目的观察丹参酮对离体肺的保护作用。方法24只新西兰免随机平均分为两组，对照组用LPD液行肺动脉灌注和保存，实验组用丹参酮加LPD液以同样方法灌注和保存。18h后观察形态学改变。结果光镜下两组肺泡、支气管及毛细血管结构完整，高倍视野下对照组较实验组肺泡上皮及毛细血管上皮细胞肿胀、肥大，少部分组织可见肺泡内有红细胞渗出、间隔增宽等。结论在LPD液中加入丹参酮，能够对离体肺起到更好的保护作用。     

丹参酮诱导HL—60细胞分化及凋亡的流式细胞术分析

应用体外细胞培养及流式细胞仪技术，分析了丹参酮作用前后HL－60细胞的细胞周期分布、细胞增殖指数、p53、c－myc、c－fos及bc1－2基因产物的表达变化，并以全反式维甲酸为对照。结果表明：0．5μg．ml－1的丹参酮作用后，HL－60细胞趋向粒细胞系统分化，有部分细胞发生凋亡（11．8％），丹参酮通过阻止HL－60细胞进入S期而抑制其DNA合成，其作用的分子机制与c－fos基因的表达增高、c－myc基因及bc1－2基因的表达降低有关，诱导分化与细胞凋亡的关系尚有待进一步探讨。     

甘西鼠尾草中丹参酮IIA的含量测定

目的测定甘西鼠尾草中丹参酮IIA的含量。方法采用HPLC法,色谱柱:ZORB-AX Eclipe XDB-C18(250×4.6mm,5μm)柱,流动相为:甲醇-水(75:25v/v),检测波长:270nm。结果丹参酮IIA在6.0~100.0μg.m l-1范围内,峰面积与进样浓度线性关系良好,回归方程Y=186.3 245.1C,r=0.9974,平均回收率为98.0%,RSD=1.67%;栽培品甘西鼠尾草中丹参酮IIA含量:1年生0.305%,2年生0.539%,3年生0.776%,野生品0.573%。结论所测样品中丹参酮IIA含量均高于《中国药典》2005年版丹参项下规定要求,且栽培3年生甘西鼠尾草其丹参酮IIA含量高于野生品。     

Tanshinone IIA protects rat primary hepatocytes against carbon tetrachloride toxicity via inhibiting mitochondria permeability transition

Tanshinone IIA (Tan IIA), one of the key components of Salvia milthorrhiza Bunge (Lamiaceae), is used to treat liver disease. The present study was carried out to investigate the possible mechanisms involved in the hepatoprotective effects of Tan IIA on carbon tetrachloride (CCl₄)-induced hepatocyte toxicity. In cultures treated with 1 or 2 μM CCl₄, Tan IIA (10–75 μM) significantly increased hepatocyte survival rates. However, only at a concentration of 75 μM could Tan IIA partially reverse the CCl₄ (3 μM)-induced decrease of survival rate (34?±?3% vs. 18?±?3%, n?=?8, p?<?0.01). In isolated mitochondria energized with succinate, Tan IIA could inhibit the large swelling effect induced by CCl₄ (1 and 2 μM). Base on these results, Tan IIA could protect rat primary cultured hepatocytes from CCl₄-induced toxicity partially by the inhibitory effect on the opening of mitochondrial permeability transition (MPT).     

丹参酮ⅡA对大鼠脑动脉瘤形成的作用

目的观察丹参酮(Tan)ⅡA对大鼠脑动脉瘤(CA)形成的作用。方法大鼠随机分为模型组(CA组)和治疗组(CA+TanⅡA组)。CA组采用手术和高盐饮食诱导CA模型;CA+TanⅡA组采用手术和高盐饮食诱导CA后,腹腔注射0.9%NaCl溶液1 ml的TanⅡA(25 mg/kg)。检测TanⅡA对血压的影响;观察CA大小和形态改变及巨噬细胞浸润;q-PCR检测单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和核因子(NF)-κB mRNA的表达;Western印迹检测NF-κB蛋白的表达。结果TanⅡA对大鼠术后血压没有明显影响;形态学观察表明,TanⅡA治疗对大鼠CA的生长有抑制作用。CA+TanⅡA组动脉瘤大小明显低于CA组(P<0.05);与CA组相比,TanⅡA处理使血管壁增厚(P<0.05);CA+TanⅡA组巨噬细胞浸润明显少于CA组(P<0.05)。CA+TanⅡA组MCP-1,MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平明显低于CA组(P<0.05)。CA+TanⅡA组NF-κB mRNA和蛋白表达水平明显低于CA组(P<0.05)。结论TanⅡA在CA形成过程中,通过抑制NF-κB信号和巨噬细胞浸润减少炎症反应,抑制CA形成。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对胰腺癌BX-PC-3细胞系增殖与细胞周期调控因子表达的影响

 目的：观察丹参酮ⅡA磺酸钠对胰腺癌细胞系BX-PC-3细胞增殖和细胞周期调控因子cyclin A、cyclin D2蛋白表达的影响。方法：分别用不同剂量的丹参酮ⅡA磺酸钠作用于胰腺癌细胞系BX-PC-3,应用MTT比色法检测培养48 h的细胞存活率, 应用流式细胞术测定培养48 h细胞周期的变化,Western blotting检测周期蛋白cyclin A和cyclin D2 的表达情况。结果：丹参酮ⅡA磺酸钠能明显抑制BX-PC-3细胞增殖,且具有明显的剂量依赖性;流式细胞术显示一定浓度药物作用细胞,可将细胞周期阻滞于G0/G1期;Western blotting检测发现药物能显著下调周期蛋白cyclin A和cyclin D2的表达水平。结论：丹参酮ⅡA磺酸钠能显著抑制人胰腺癌BX-PC-3细胞增殖,下调周期相关因子cyclin A和cyclin D2蛋白表达水平,这可能是丹参酮ⅡA磺酸钠抑制胰腺癌细胞生长增殖的作用机制。     

丹参酮ⅡA逆转高糖诱导一氧化氮生成减少及机制研究

目的：观察丹参酮ⅡA对高糖引起内皮细胞中一氧化氮生成量减少的影响,并探讨相关的作用机制。方法：将内皮细胞随机分为空白对照组,等渗对照组,高糖处理组,溶剂对照组,丹参酮ⅡA组。一氧化氮特异性探针检测法检测内皮细胞一氧化氮含量。分别采用酶联免疫吸附(ELISA)和Griess法检测环磷酸鸟苷(cGMP)和总硝基化合物的含量。免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)分别检测内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白和mRNA水平的变化。结果：丹参酮ⅡA可抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞中一氧化氮生成量(P<0.05), cGMP含量以及总硝基化合物生成的减少(P<0.05),并能逆转eNOS蛋白表达的降低(P<0.05)。结论：丹参酮ⅡA通过上调eNOS蛋白表达抑制一氧化氮生成的减少。     

Tanshinone IIA attenuates interleukin-17A-induced systemic sclerosis patient-derived dermal vascular smooth muscle cell activation via inhibition of the extracellular signal-regulated kinase signaling pathway

OBJECTIVE:Salvia miltiorrhiza has long been used to treat systemic sclerosis. Tanshinone IIA, one of the phytochemicals derived from the roots of Salvia miltiorrhiza, exhibits multiple biological activities. The present study aimed to investigate whether tanshinone IIA has an effect on the interleukin-17A-induced functional activation of systemic sclerosis patient-derived dermal vascular smooth muscle cells.METHODS:Systemic sclerosis patient-derived dermal vascular smooth muscle cells were incubated with various dosages of tanshinone IIA in the presence of interleukin-17A or the serum of systemic sclerosis patients. Cell proliferation was assessed using Cell Counting Kit-8. The expression of collagen 1 and 3 in cells was evaluated by immunofluorescence. Cell migration was measured using a transwell assay. The expression of phospho-extracellular signal-regulated kinase was detected by Western blotting.RESULTS:Our data demonstrate that tanshinone IIA exerts an inhibitory effect on interleukin-17A-induced systemic sclerosis patient-derived dermal vascular smooth muscle cell proliferation, collagen synthesis and migration.CONCLUSION:These findings suggest that tanshinone IIA might serve as a promising therapeutic agent for the treatment of systemic sclerosis.