聚酰胺层析法分离纯化银杏叶总黄酮的研究

目的:对聚酰胺层析法分离纯化银杏叶总黄酮进行研究。方法通过静态吸附确定聚酰胺的最大吸附量为,动态吸附后考察不同浓度乙醇的洗脱曲线及纯度,定量采用HPLC定量测定。结果每克聚酰胺粉(已处理过)平均吸附量为:115mg;70%乙醇洗脱较合适,纯度可达到15.60%。     

短尾蝮蛇毒中磷脂结合抗凝蛋白的分离纯化及鉴定

目的从短尾蝮蛇毒中分离纯化一种抗凝蛋白,并对其生化性质进行研究。方法利用阳、阴离子交换、凝胶过滤的方法分离纯化这种抗凝蛋白,用活化部分凝血活酶时间(APTT)测定其抗凝活性,用SDS-PAGE测定其蛋白相对分子量,用等电聚焦法测定蛋白的等电点.用薄层析方法确定抗凝蛋白与磷脂酰胆碱结合。结果从短尾蝮蛇中分离纯化出的抗凝蛋白是二聚体,相对分子量为24.0×103(非还原)和14.6×103(还原)。等电点为pH 5.2。该蛋白具有精氨酸酯酶活性,能明显地延长活化的部分凝血活酶时间(APTT),其抗凝活性与磷脂结合有关。结论此方法成功地从短尾蝮蛇毒中纯化出一种抗凝蛋白。因其能够与磷脂结合,又具有明显的抗凝活性,因此把该蛋白称为磷脂结合抗凝蛋白(phospholip id-b ind ing anticoagu lation prote in,PBAP)。     

Culture and purification of human fetal olfactory ensheathing cells using different attachment rates combined with intermittent NT3 nutrition

Objective：To explore a simple and pragmatic method to obtain sufficient olfactory ensheathing cells from human fetus by selective attachment of harvested cells combined with intermittent NT3 nutrition. Methods：DMEM/F12 culture solution including 10% fetal bovine serum or NT3 was used to culture olfactory ensheathing cells intermittently every 48 h. The cell state and growth rates of OECs were observed, and P75 staining was used to estimate the purity of the cells. Results：Human fetal OECs were positive with P75 immunocytochemical staining. OECs in dipolar or tripolar shape formed networks by their processes in vitro. The purity of OECs in ＂good state＂ was about 95% at 9 d and 83% on 12 d, respectively. Conclusion：The method of using different attachment rates combined with intermittent NT3 addition is a simple and effective way to culture and purify OECs.     

危重病早期连续性血液净化的疗效分析

目的　探讨危重病早期连续性血液净化 (CBP)在救治中的作用和效果。方法　将 12例早期行CBP治疗的危重病患者设为治疗组 ,14例未行CBP治疗的危重病患者设为对照组 ,动态检测和分析两组患者血浆皮质醇、肿瘤坏死因子 α(TNF α)、白介素 1β(IL 1β)、白介素 2 (IL 2 )、白介素 6 (IL 6 )水平 ,观察患者的临床变化和预后。结果　 12h内两组血浆皮质醇、TNF α、IL 1β、IL 2、IL 6水平均升高 ,但对照组皮质醇、TNF α、IL 1β、IL 2、IL 6呈进行性升高 ,皮质醇于 4 8h前后达到高峰 ,72h仍明显高于正常。与对照组相比 ,治疗组皮质醇达高峰时间提前 ,峰值降低 ,于第 2 4、4 8、72小时血浆水平均显著降低 (P均 <0 .0 0 1) ,72h恢复正常 ;TNF α、IL 1β升高幅度亦偏低 (P均 >0 .0 5 ) ;而IL 2、IL 6于 12h后随即大幅降低(P均 <0 .0 5 ) ,并维持一个较低水平 ;治疗组症状迅速改善 ,并发功能障碍的器官数和病死率降低(P均 <0 .0 5 )。结论　危重病早期CBP治疗可降低应激反应和全身炎症反应 ,防治并发多脏器功能障碍综合症 (MODS) ,降低病死率。     

改良型TAT-VP3融合蛋白的原核表达纯化及多克隆抗体的制备

目的 表达、纯化改良型TAT-VP3融合蛋白,并制备其多克隆抗体.方法 利用原核表达载体PGEX-6P-1/改良型TAT-VP3在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达,经GST标签纯化树脂纯化蛋白,并用PreScission Protease酶切除标签,以纯化的蛋白免疫新西兰大白兔,获得改良型TAT-VP3融合蛋白的多克隆抗体.用ELISA进行效价检测,Western blotting鉴定其特异性.结果 诱导表达并纯化了改良型TAT-VP3融合蛋白,纯度大于90%,蛋白浓度为1.2 mg/ml.制备了该蛋白的多克隆抗体,ELISA表明多克隆抗体效价为1∶32 000,Western blotting证明多克隆抗体的特异性良好.结论 成功纯化出改良型TAT-VP3融合蛋白,并制备出高效价、高特异性的多克隆抗体,为进一步研究该蛋白的体内外抗肿瘤活性及作用机制奠定了基础.     

探讨消毒供应中心层流净化区空气质量的影响因素及对策

目的 探讨消毒供应中心层流净化区空气质量的影响因素及管理对策。方法 应用平板暴露沉降法,对消毒供应中心层流净化区空气质量进行采样监测,对比采取干预措施前后12个月空气质量监测结果。结果 采取干预措施前消毒供应中心检查包装灭菌区及无菌物品存放区空气质量超标分别为6次和4次,空气质量达标率分别为25.0%和16.7%;而采取措施后,上述两区域的空气质量全部达标,两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 消毒供应中心空气质量受工作人员、室内环境、净化设备、人流物流、包装材质和采样方式等多种因素影响。要使空气质量达标,保证无菌物品质量,需不断加强环境监控管理,提高消毒灭菌质量,降低医院感染率。     

医用纯水制作技术原理及要素分析

探讨和介绍了医用纯水的制作技术进展。传统的蒸馏方法因其高成本,低产水量、低效率已逐渐被一些新技术所取代。随着医院感染控制制度的完善和不断提高的标准要求,医院对超纯水使用的要求也不断提高,使得水纯化设备的技术更新成为必然趋势。本文介绍几种常用的水纯化技术原理及要素,供同行参考。     

裸花水竹草化学成分

目的:研究鸭跖草科裸花水竹草的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、重结晶等方法分离和纯化,并通过IR,EIMS及NMR等波谱学方法对分离得到的化学成分进行结构鉴定。结果:从裸花水竹草中共分离得到15个化合物,分别为正三十九烷(1),二十烷酸辛酯(2),胆甾-7-烯-3-酮(3),22,23-二氢菠菜甾酮(4),二十四烷酸(5),三十烷酸(6),谷甾醇(7),菜油甾醇(8),豆甾醇(9),麦角甾醇(10),豆甾-7-烯-3-醇(11),豆甾醇-3-O-葡萄糖苷(12),胡萝卜苷(13),二十七烷酸甘油酯(14),bracteanolide A(15)。结论:其中化合物1~15均为首次在该植物中分离得到。     

人外周血T淋巴细胞纯化方法的比较

目的 :探讨纯化外周血T淋巴细胞的 3种方法及其特点。方法 :分别应用尼龙毛法、补体细胞毒法和免疫磁珠法分离健康人外周血。结果 :尼龙毛法分离后T细胞纯度为 ( 70 7± 2 8) % ,明显高于分离前的 ( 5 5 6± 3 7) % (P <0 0 5 ) ;补体细胞毒法为 ( 82 8± 3 2 ) % ,显著高于尼龙毛法 (P <0 0 5 ) ;免疫磁珠法为 ( 96 0± 1 4) % ,最高纯度可达 98 1% ,显著高于尼龙毛法和补体细胞毒法 (P <0 0 5 )。免疫磁珠法分离后T细胞的回收率为 ( 91 6± 6 8) % ,显著高于其它两种方法。结论 :尼龙毛法和补体细胞毒法能够有效地初步分选T细胞。免疫磁珠法是高效纯化T细胞的新方法。     

人纤溶酶原Kringle 5区的基因克隆的表达及纯化

目的克隆人纤溶酶原Kringle5(K5)区基因,并进行重组蛋白的表达纯化及活性鉴定.方法用PCR方法从正常成人肝cDNA库扩增出人纤溶酶原K5区基因,构建K5的原核表达载体pET-22b(+)-K5-6×His,IPTG诱导蛋白表达后经Ni+-树脂亲和层析进行纯化,通过血管内皮细胞增殖抑制试验检测蛋白活性.结果经PCR成功扩增出了243 bp的K5区基因,测序正确后克隆进大肠杆菌分泌型表达载体pET-22b(+),重组质粒在BL21中成功表达出分子量为14 000的蛋白质,纯化后的蛋白纯度达95%,具有抑制血管内皮细胞增殖活性的功能,K5蛋白浓度为4 μg/mL时抑制率达50%.结论纤溶酶原K5的成功克隆、表达及纯化可能在肿瘤和动脉粥样硬化的抗血管生成治疗中具有一定作用.