液膜法提取发酵液中的苯丙氨酸 Ⅱ.操作工艺条件

从芫花Ｄａｐｈｎｅ ｇｅｎｋｗａ条的乙酸乙酯可溶部分分到３个结果性化合物，借助于波谱分析手段推断出Ⅱ为西瑞香素，Ⅲ为ｄａｐｈｎｏｄｏｒｉｎ Ｂ。     

芫花根皮的生药学研究

描述了芫花根皮的药材性状、组织构造及粉末特征，为鉴别芫花根皮提供参考依据。     

芫花根总黄酮含药血清对小鼠细胞免疫功能的影响

目的建立小鼠血清中芫花根总黄酮(TFRD)各成分的HPLC测定方法,探讨TFRD含药血清对正常小鼠细胞免疫功能的影响。方法HPLC法测定小鼠单次ig给药后不同时间点血药浓度;M TT法检测多次ig给药后含药血清对正常小鼠脾淋巴细胞增殖、NK与LAK细胞杀伤活性和腹腔巨噬细胞的吞噬功能等细胞免疫功能的影响。结果单次ig TFRD后血药浓度在20~30 m in达到高峰;TFRD含药血清能促进脾淋巴细胞增殖,增加NK和LAK细胞杀伤活性,增强腹腔巨噬细胞的吞噬能力。结论TFRD含药血清能增强正常小鼠细胞免疫功能。     

芫花药材的HPLC指纹图谱及ESI-MS分析

目的:建立芫花药材的质量评价方法。方法:采用HPLC-DAD对21批芫花药材的指纹图谱进行比较研究,并用HPLC-ESI-MS技术对部分共有峰进行了初步归属。结果:建立了以16个共有峰为特征指纹信息的芫花药材的HPLC指纹图谱,并通过MS技术初步鉴定出其中10个共有峰所对应的可能化学成分,共有峰主要为黄酮苷及其苷元类成分。结论:该方法可为芫花药材指纹图谱和质量分析方法的建立提供参考。     

HPLC-MS测定芫花炮制前后5种成分含量变化

目的： 建立HPLC-MS同时测定芫花中木犀草素、芹菜素、羟基芫花素、芫花素以及芫花酯甲5种化学成分含量的方法,分析炮制前后含量的变化。方法： 采用液质联用法,质谱采用大气压电喷雾离子源,选择性负离子模式监测。色谱柱为Agilent Zorbax C₁₈（2.1 mm×50 mm,1.8 μm）,流动相为0.05%甲酸乙腈（A）-0.05%甲酸水（B）,流速0.6 mL·min^-1,柱温30℃,进样量2 μL。结果： 芫花炮制后5种毒效成分均发生了一定程度的变化。3种黄酮类有效成分木犀草素、羟基芫花素以及芫花素炮制后含量升高,二萜原酸酯甲代表成分芫花酯甲炮制后含量降低,黄酮类成分芹菜素经炮制后含量也发生了下降。结论： 该方法简单、灵敏、准确,为芫花及其炮制品的质量评价提供了有效的方法。     

Ames波动试验和GADD45a-GFP GreenScreen两种快速筛选方法评价大黄素和芫花素的遗传毒性

目的 使用Ames波动试验和GADD45a-GFP GreenScreen两种快速筛选方法,对有毒中药芫花和了哥王的主要单体成分大黄素和芫花素的遗传毒性进行评价。方法 （1）Ames波动试验：在非代谢活化（-S9）和代谢活化（+S9）条件下使用鼠伤寒沙门菌TA100开展基于96孔液态培养法的细菌回复性突变试验,大黄素和芫花素（终质量浓度范围均为0.1~10 μg/mL）与菌液充分混合后在37℃下培养72 h。（2）GADD45a GreenScreen高通量筛选试验：在非代谢活化（-S9）和代谢活化条件下（+S9）将表达GADD45a基因的TK细胞（GenM-T01和GenM-C01）与大黄素（0.13~32.0 μg/mL）和芫花素（0.07~16.0 μg/mL）分别作用48 h（-S9）和3 h（+S9）,之后通过酶标仪和流式细胞仪检测绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）的荧光强度。结果 有无代谢活化条件下,10 μg/mL大黄素均可诱导TA100的回复性突变率显著性升高（P<0.05、P<0.001）;代谢活化条件下,10 μg/mL芫花素可诱导TA100的回复性突变率显著性升高（P<0.001）,16.0 μg/mL芫花素诱导TK6细胞表达的GADD45a-EGFP荧光强度也超过了遗传毒性阈值（1.3倍）。结论 当前研究提示大黄素和芫花素为可疑遗传毒性,需要开展深入研究明确其遗传毒性及机制。Ames波动试验和GADD45a GreenScreen是良好的高通量筛选备选试验,可极大优化浩繁的药物的毒性筛选工作,尤其适宜诸如中药等成分和配伍复杂的药物。     

炮制对芫花中芫花酯甲含量的影响

生牛膝(Ⅰ)、酒牛膝(Ⅱ)、盐牛膝(Ⅲ)醚提物对EB病毒激活的最低浓度分别为0.8,20,0.16μg/ml;5μl醚提物(相当于250mg生药)对鼠耳皮肤有致炎作用;I的醚提物在0.04～125mg/ml对CHL细胞对染色体畸变率无明显影响;小鼠灌胃15g/kgx3d,孕鼠灌胃10g/kgx10d,Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ对小鼠骨髓微核率及早孕率无明显影响。     

芫花中抗肿瘤活性成分瑞香烷型二萜的含量测定研究

目的:建立HPLC法同时测定不同产地芫花药材中7个具有抗肿瘤活性的瑞香烷型二萜[yuanhuadine(1),yuanhuafine(2),genkwadaphnine(3),yuanhuacine(2),yuanhuahine(5),yuanhualine(6),isoyuanhuadine(7)]的含量。方法:芫花以75%乙醇水溶液提取;色谱柱为Zorbax Eelipse SB-C18(250 mm×4. 6 mm,5μm),流动相:乙睛-0. 1%冰醋酸水,检测波长:230 nm,柱温:40℃,流速:0. 8 m L/min,进样量:10μL,洗脱梯度:采用二元梯度洗脱系统,溶剂A(乙睛),B(水、0. 1%冰醋酸)。结果:上述7个瑞香烷型二萜的线性关系良好(r≥0. 9941),平均加样回收率为98. 1%～104. 5%。不同生长环境的芫花中的7个成分各自含量有所差别。结论:该方法可用于中药芫花中瑞香烷型二萜的含量测定研究。     

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中芫花素的浓度及药物动力学研究

目的 建立LC-MS/MS方法测定芫花素在大鼠体内的血药浓度,并研究其药物动力学。方法 大鼠灌胃芫花提取物,眼眶采血,离心,以蛋白沉淀法处理血浆样品,芒柄花素为内标,电喷雾离子化,多反应检测方式进行负离子检测,检测离子质荷比(m/z)分别为283.2/267.9,267.0/251.9。使用Phenomenex Gemini 110 C18色谱柱(50 mm×2.0 mm,5 μL);以甲醇- 0.1 %甲酸水(85∶15)为流动相,等度洗脱;柱温:40 ℃;流速:0.3 mL·min-1。结果 大鼠灌胃芫花提取物后的药-时曲线符合二房室模型,芫花素血药浓度在5～1000 ng·mL-1范围内线性关系良好(r2=0.998),最低检测限(LOQ)为0.5 ng·mL-1,日内及日间精密度(RSD)为2.42 %～10.71 %,日内及日间准确度为95.67 %～112.15 %,血浆中无内源性基质干扰,稳定性良好。结论 本研究所建立的方法简便、灵敏、重复性好、分析速度快,可用于血浆样品中芫花素的血药浓度测定和大鼠体内药物动力学研究。