氯霉素乙酰基转移酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的 建立氯霉素乙酰基转移酶（chloramphenicol acetyltransferase,CAT)双抗体夹心ELISA的实验室检测方法。方法 从质粒pBLCAT6经PCR扩增CAT基因序列，插入到原核表达质粒pGEX-2T中，在大肠埃希菌DH5α中诱导表达；以纯化的融合蛋白GST-CAT为抗原免疫实验用兔，得到的CAT抗血清进行生物素标记，并在此基础上利用生物素链和亲和素放大系统建立双抗体夹心ELISA法，构建不同YY1结合位点突变的HPV16LCRCAT报道质粒，体外瞬时转染真核细胞，提取胞质蛋白，以建立的方法进行CAT表达检测。结果 SDS-PAGE显示表达的GST-CAT融合蛋白相对分子质量约为54000；制备的CAT抗血清可有效地识别原核及哺乳动物细胞表达的CAT蛋白；在不同启动子及调节序列的控制下，利用建立的CAT检测技术证明在瞬时转染的细胞中可诱导2-8倍的CAT表达增强。结论 建立的双抗体夹心ELISA方法可敏感地反映上游序列的启动子活性，以及启动子调节序列变化对启动子活性的影响，使CAT作为报道基因的研究更为简单化。     

超声处理对羊瘙痒病脑组织中PrPSc聚集状态的影响

目的 研究超声处理对感染羊瘙痒症仓鼠脑组织中PrP^Sc聚集状态的影响，寻找产生PrP^Sc低聚体的条件。方法 裂解液制备脑组织提取物，用各种超声条件处理不同阶段的脑组织提取物；以蛋白酶消化后的Western blot方法和图象分析系统观测PrP^Sc蛋白的分布和聚集状态。结果 适当的超声处理(15s共30次)可增加脑组织匀浆上清中PrP^Sc含量1．29～1．58倍；同样条件下超声处理可明显增加羊瘙痒因子263K感染仓鼠脑组织匀浆上清中PrP蛋白总量，而对正常对照仓鼠脑组织匀浆上清中PrP蛋白总量影响不大；对经常规高速离心获得的PrP^Sc的超声处理显示约90％的PrP^Sc存在于离心上清液中。结论 对感染动物脑组织进行超声处理可增加PrP^Sc的提取量，利于实验室检测。适当的超声处理可破碎大的相对分子质量的PrP^Sc聚集物，产生小的相对分子质量的PrP^Sc产物。     

脑梗死患者血浆内皮素-1和降钙素基因相关肽含量改变及其意义

内皮素１（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ１,ＥＴ１）是目前已知最强的内源性血管收缩物质［１］,降钙素基因相关肽（ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎｇｅｎｅｒｅｌａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅ,ＣＧＲＰ）是具有强大扩张血管作用的肽类物质［２］,二者均在脑循环的调节中起重要作用...     

注射用奥美拉唑钠稳定性及有关物质比较

奥美拉唑 (omeprazole)是苯并咪唑类质子泵抑制剂 ,治疗消化性溃疡具有疗效高、疗程短、耐受性好和复发率低的特点。为比较市售注射用奥美拉唑钠 (静脉推注型 )产品的质量 ,我们抽取市售的两种品牌产品 ,测定其含量和有关物质 ,并通过加速实验了解其稳定性。1　试药与仪器奥美拉唑对照品 (U .S .PHARMACOPIA公司 ,批号4 785 0 ) ,奥美拉唑有关物质A ,B ,C ,E对照品 (北京大学药学院 ) ,有关物质D(EUROPEANPHARMACOPOEIA公司 ,批号 90 7-F6 70 2 9) ,奥克注射剂 (国内某公司生产 ,含奥美拉唑 4 0mg ,批号为 :2 0 0 10 70 1,2…     

非那雄胺片的人体生物等效性研究

目的:研究国产与进口非那雄胺片的人体生物等效性。方法:采用高效液相色谱法测定18名健康男性志愿者随机交叉单剂量口服非那雄胺片10mg后血清中的药物浓度,计算药动学参数和相对生物利用度,并进行生物等效性评价。结果:国产及进口非那雄胺片的AUC0～t 分别为(990 .80±302. 80)、(1007 .46±333. 65) (μg·h)/L ,Cmax 分别为(119. 22±18. 48)、(114. 08±22 .97) μg/L ,tmax 分别为(2. 89±1. 02)h、(2. 64±0. 54)h ,国产制剂相对于进口制剂的人体生物利用度为(103. 35±29 .75) %。结论:国产与进口非那雄胺片具有生物等效性。     

2004年我院127例药品不良反应报告分析

目的：了解药品不良反应（ADR）在我院（北京天坛医院）的发生情况及相关因素。方法：对404例ADR病例报告进行分类统计和分析评价。结果：涉及ADR的药物共有62个品种，其中抗感染药的发生率居首位，其次为中药制剂、神经系统药物。合并用药占22．5％；给药途径以静脉用药为主。主要的ADR类型为皮肤损害，其次是心血管及消化系统损害。结论：应继续加强对ADR的监测。     

Polo样激酶1(PLK1)的敲低及其对宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用

目的研究敲低Polo样激酶1(PLK1)后对宫颈癌HeLa细胞生长的作用。方法流式细胞术评测LAH4-L1载体对小干扰绿色荧光蛋白基因(siGFP)的递送效率;反转录PCR检测PLK1 mRNA水平,Western blot法检测PLK1蛋白水平;敲低PLK1水平后,采用CCK-8法检测HeLa细胞活性和生长抑制情况。结果 LAH4-L1-siPLK1纳米复合物可下调HeLa细胞PLK1约70%,并降低PLK1蛋白的表达,敲低PLK1后,可明显抑制HeLa细胞增殖。另外,LAH4-L1载体的基因递送效率能够稳定维持在较高水平。结论敲低HeLa细胞PLK1抑制癌细胞生长,LAH4-L1是一个较好的基因递送载体。     

人朊蛋白相关蛋白Shadoo的表达、纯化及抗体的制备

目的克隆、表达和纯化人朊蛋白相关Shadoo（SHO）蛋白并制备抗Shadoo的多克隆抗体。方法提取仓鼠各组织的mRNA，分析SHO基因在仓鼠各组织中转录水平的差异;提取人DNA，PCR方法获得人SHO基因，克隆至融合表达载体，在大肠埃希菌中表达人SHO蛋白并纯化;以纯化蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清，用Western blot方法分别检测与重组及内源性SHO蛋白的免疫反应性。结果SHO基因在仓鼠各组织中的转录水平差异很大，脑组织转录水平高。在大肠埃希菌中表达了分子质量单位为37 ku的人SHO融合蛋白，制备的SHO蛋白抗体可与重组的SHO蛋白反应，可识别内源性的SHO。结论成功表达纯化人SHO融合蛋白并制备了抗SHO抗体，为研究SHO和正常朊蛋白之间的关系打下初步基础。     

丹珍头痛胶囊治疗偏头痛疗效的Meta分析

目的 评价丹珍头痛胶囊治疗偏头痛的疗效及安全性。方法 检索中国生物医学文献数据库（CBM）、中国学术期刊全文数据库（CNKI）、维普中文科技期刊数据库（VIP）、万方数据库和Pubmed数据库有关丹珍头痛胶囊治疗偏头痛的随机对照试验（RCTs）,采用Modified Jadad评分量表对纳入文献进行质量评价,应用RevMan 5.3软件进行统计分析。结果 最终纳入9篇RCTs,共891例患者。Meta分析结果显示,丹珍头痛胶囊治疗偏头痛的总有效率高于西药组[RR=1.26,95%CI（1.19,1.35）],差异有统计学意义（P < 0.001）。亚组分析显示,单纯应用丹珍头痛胶囊比单纯使用常规西药总有效率更高[RR=1.28,95%CI（1.19,1.39）,P < 0.001],在常规西药基础上加用丹珍头痛胶囊可提高治疗的总有效率[RR=1.22,95%CI（1.10,1.36）,P=0.000 3],丹珍头痛胶囊治疗偏头痛总有效率高于盐酸氟桂利嗪[RR=1.26,95%CI（1.17,1.34）,P < 0.001]和加巴喷丁[RR=1.32,95%CI（1.10,1.57）,P=0.002],差异均有统计学意义（P < 0.05）。丹珍头痛胶囊组未见严重不良反应。结论 丹珍头痛胶囊治疗偏头痛的疗效可能优于常规西药,在常规西药基础上联合丹珍头痛胶囊可提高疗效。为提高结论的可靠性,尚需更多高质量、多中心、大样本的RCTs。     

基于单样本基因富集分析分型构建肺腺癌的风险预测模型

目的研究基于单样本基因富集分析（ssGSEA）分型构建肺腺癌的风险预测模型的价值。方法从癌症基因组图谱（TCGA）数据库及基因表达数据库（GEO）中分别获取515例及116例肺腺癌患者的数据。基于TCGA数据库进行ssGSEA分析及聚类分析,将样本分为高免疫评分组和低免疫评分组,并进行免疫相关分析、富集分析及差异分析,进一步获得免疫相关的差异表达基因。将TCGA数据集患者以7∶3随机分为训练集和内部验证集。基于TCGA训练集的免疫相关差异表达基因数据,通过单因素Cox风险回归、套索算法（Lasso）回归以及多元逐步Cox风险回归分析降维,构建肺腺癌患者预后的预测模型,获得相应的风险分数（Riskscore）,并用TCGA内部验证集及GEO外部验证集进行验证。将Riskscore与临床特征进行独立预后因素分析,建立列线图。ROC曲线与校正曲线分析分别用来评估模型的效能及拟合度。结果根据患者样本的ssGSEA免疫评分、聚类分析及差异分析的结果,患者被分为高免疫评分组和低免疫评分组以及获得1447个差异表达基因。再通过单因素Cox风险回归、Lasso回归以及多元逐步Cox风险回归分析降维,获得剩余8个预后相关免疫差异表达基因的最优集合和每例患者的Risks-core。该风险预测模型在训练集、内部验证集及外部验证集的AUC分别为0.703、0.713、0.750。根据独立预后分析结果,肺腺癌的分期及预测模型的Riskscore是肺腺癌患者的两个独立预后因子并联合绘制列线图。列线图1、3、5年总生存期的AUC分别为0.789、0.763、0.746。校正曲线分析也显示该模型的拟合度较好。结论基于ssGSEA分型构建并验证的肺腺癌患者预后风险预测模型,具有较高的预后风险预测效能,可为临床医师判断肺腺癌患者总生存期提供辅助工具。