重组小鼠Fas配体在大肠杆菌中的表达和纯化

获得纯化的由大肠杆菌表达的小鼠Ｆａｓ配体。方法：以质粒ｐＥＴ－１５ｂ为载体,在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）表达小鼠的ＦａｓＬ,用多心螯合亲和层析法纯化。结果：转化菌中,重组质粒是稳定的,异丙基－β－Ｄ硫代半乳糖苷可诱导小鼠ＦａｓＬ的表达,金属螯合亲和层析法可以初步纯化此蛋白。     

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子双体融合分子的三级结构模建

目的：验证重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ，ＧＭＣＳＦ） 双体融合分子（Ｇ２）较ＧＭＣＳＦ单体分子具有高活性的结构机制。方法：利用ＩｎｓｉｇｈｔＩＩ软件，采用同源性模建结合手工拼接的方法模建出Ｇ２ 融合分子的空间三级结构，并将其与ＧＭＣＳＦ单体的结构相比较。结果：模建出的Ｇ２ 融合分子前后两个结构单元在空间位置上相对独立，二者各自的三级构象及二级结构组成均与ＧＭＣＳＦ非常相似。另外，从受体结合位点的分析结果来看，Ｇ２ 分子在结构上有能力同时结合两分子的ＧＭＣＳＦ 受体。结论：Ｇ２ 融合分子中的两个ＧＭＣＳＦ结构单元在结构上基本保持了ＧＭＣＳＦ 单体分子的三级结构，其空间结构允许两分子的ＧＭＣＳＦ受体同时结合，引发受体间的交联，从而产生高活性。     

可溶性TRAIL分子的同源性模建

目的:为进一步研究其结构与功能的关系.方法:利用MSI公司的Insight Ⅱ分子模拟软件,参照TNF-α的三级结构信息文件,对TRAIL分子胞外区的R117到G281共165个氨基酸残基进行了同源性模建;并利用Profile-3D程序中的Inverse Fold-ing方法对模建结果进行可靠性分析.结果:模建出的TRAIL分子共含10个β-片层结构,且这些β-片层均对应于TNF-α中相应的β-片层区.这与同一家族的分子在结构保守区,特别是形成二级结构的保守区中序列组成变化不大的理论相吻合.而且验证模建结果的结果可靠性积分值为55.80.结论:模建结果基本正确,为TRALL的结构与功能研究提供了基础.     

重组小鼠Fas配体在大肠杆菌中的表达和纯化

目的:获得纯化的由大肠杆菌表达的小鼠Fas配体(Fas ligand, FasL ).方法:以质粒pET-15b为载体,在大肠杆菌BL21( DE3)中表达小鼠的FasL,用金属螯合亲和层析法纯化.结果:转化菌中,重组质粒是稳定的,异丙基-β-D硫代半乳糖苷可诱导小鼠FasL的表达,金属螯合亲和层析法可以初步纯化此蛋白.结论:在大肠杆菌中表达出小鼠的FasL,并得到初步纯化.     

重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子双体融合分子的三级结？…

目的：验证重组人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｌｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＧＭ－ＣＳＦ）双体融合分子（Ｇ２）较ＧＭ－ＣＳＦ单体分子具有高活性的结构机制。方法：利用ＩｎｓｉｇｈｔⅡ软件，采用同源性模建结合手册拼接的方法模建出Ｇ２融合分子的空间三级结构，并将其与ＧＭ－ＣＳＦ单体的钉比较，结果：模建出的Ｇ２融合分子前后两个结构单元在空间     

抗HBsAg人VH基因中异常序列对抗体活性影响的研究

目的:我们曾从噬菌体抗体库中克隆到一株VH第3骨架区中含有异常序列的抗HBsAg人Fab基因,本工作拟探讨该VH基因中异常序列对抗体活性的影响.方法:采用重叠PCR方法去除这段异常序列,构建表达载体,转化大肠杆菌表达出抗HBsAg噬菌体抗体和可溶性Fab,测定了它们与抗原的结合活性.结果:与原抗体比较,改造后的抗体与抗原的结合活性明显下降,分子模建提示这段异常序列对VH CDR_1和CDR_2的部分氨基酸残基的位置有一些影响,测定改造前Fab的亲和力约为0.55×10~9M~(-1),改造后Fab因抗原结合活性过低,无法检测其亲和力.结论:提示这段异常序列在体内就可能存在于该VH之中.