微小RNA-382-5p靶向作用核因子蛋白90对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察微小RNA-382-5p （miR-382-5p）对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 采用荧光实时定量聚合酶链反应（qPCR）的方法检测miR-382-5p在9例乳腺癌患者癌组织和乳腺癌细胞株中的表达,细胞计数试剂盒（CCK-8）法和平板克隆实验分别检测过表达miR-382-5p后乳腺癌细胞活力和增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。qPCR和Western blot法检测过表达miR-382-5p的乳腺癌细胞中核因子蛋白90（NF90）的表达。采用荧光素酶活性实验验证miR-382-5p对靶基因的靶向作用。结果 miR-382-5p在乳腺癌组织和细胞中低表达（P<0.05）,过表达miR-382-5p可抑制乳腺癌细胞的增殖能力,促进细胞的凋亡（P<0.01）。转染miR-382-5p模拟物组NF90基因的相对表达量较miR-NC组明显降低（P<0.01）。荧光素酶活性实验显示miR-382-5p与NF90基因3''非翻译区存在靶向关系（P<0.01）。结论 miR-382-5p对乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用,对细胞的凋亡具有促进作用,其机制与靶向抑制NF90基因表达有关。     

过表达miR-488-5p 通过靶向TEM8 降低宫颈癌C33A细胞的增殖和迁移能力

目的:探讨miR-488-5p 在宫颈癌组织中的表达及对宫颈癌C33A细胞增殖和迁移能力的影响。方法:收集2017 年3月至2017 年9 月郑州大学附属洛阳中心医院妇科全子宫切除术12 例宫颈癌组织及相应的癌旁组织,qRT-PCR 检测癌组织中miR-488-5p 的表达。利用Lipofectamine 3000 转染miR-488-5p 和miR-NC至宫颈癌C33A细胞,分为实验组和对照组。流式细胞术检测两组细胞周期分布,CCK-8 法检测两组细胞增殖能力,Transwell 检测两组细胞迁移能力。生物信息学软件预测miR-488-5p 可能的靶基因,荧光素酶活性实验验证miR-488-5p 与靶基因的结合作用。qRT-PCR和Western blotting 检测两组细胞中肿瘤内皮标志物8（tumor endothelial marker 8, TEM8）及下游EGFR信号通路相关蛋白的表达水平。结果: 宫颈癌组织中miR-488-5p 相对表达量明显低于癌旁组织（1.33±0.20 vs 3.68±0.45, P<0.01）,实验组细胞中miR-488-5p 相对表达量明显高于对照组（25.23±3.11 vs 1.02±0.10, P<0.01),实验组C33A细胞在G0/G1 期的细胞比例明显高于对照组(P<0.01);当C33A细胞生长至96 和120 h,实验组细胞增殖水平明显低于对照组(P<0.05)。同时实验组的细胞迁移细胞数明显低于对照组(P<0.01)。miR-488-5p 可直接结合TEM8 mRNA并抑制其表达(P<0.01)。实验组细胞中TEM8 mRNA相对表达量明显低于对照组（0.42±0.06 vs 1.00±0.06, P<0.01)。C33A细胞转染miR-488-5p 48 h 后,TEM8、p-EGFR、p-ERK、p-AKT蛋白表达明显低于对照组（P<0.01）。结论: 宫颈癌组织中miR-488-5p 的表达量下降,过表达miR-488-5p 能够抑制宫颈癌细胞周期的进展,降低宫颈癌细胞的增殖和迁移能力,其机制可能与靶向干扰TEM8 基因的表达有关。     

微小RNA-495-3p在卵巢癌组织的表达及对卵巢癌细胞凋亡和增殖的影响

目的 观察微小RNA-495-3p(miR-495-3p)在卵巢癌组织和细胞株的表达,并探讨 miR-495-3p对卵巢癌BGC823细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用荧光实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测10例卵巢癌组织和癌旁组织miR-495-3p表达,并检测miR-495-3p在4种卵巢癌细胞株(A2780、SKOV-3、HO-8910、OC3)及正常卵巢上皮细胞IOSE80的表达。选取miR-495-3p表达水平最低的卵巢癌细胞瞬时转染miR-495-3p或miR-NC。qPCR法检测miR-495-3p表达。流式细胞仪检测细胞凋亡率。细胞计数试剂盒(CCK-8)法和平板克隆实验分别检测细胞活力和增殖能力。生物信息学软件microrna.org预测miR-495-3p的靶基因。qPCR和Western blot法检测miR-495-3p靶基因表达。采用荧光素酶报告基因实验验证miR-495-3p对靶基因核因子蛋白(NF90)的靶向作用。结果 卵巢癌组织miR-495-3p相对表达水平较癌旁组织显著降低(P<0.01)。卵巢癌细胞株中miR-495-3p表达水平明显低于正常卵巢上皮细胞(P<0.05),SKOV-3细胞表达最低。与miR-NC组比较,转染 miR-495-3p能够明显诱导SKOV-3细胞凋亡(P<0.01),抑制SKOV-3细胞的活力和增殖能力(P<0.01),且NF90表达明显下调(P<0.01),miR-495-3p可与NF90-3′-非编码区(UTR)特异性结合,降低荧光值(P<0.01)。结论miR-495-3p在卵巢癌组织和细胞株呈低表达,上调miR-495-3p表达能够通过干扰NF90基因的表达诱导卵巢癌BGC-803细胞的凋亡和抑制细胞的增殖。     

咳露口服液联合酮替芬治疗咳嗽变异性哮喘的疗效观察

目的探讨咳露口服液联合酮替芬治疗咳嗽变异性哮喘的临床疗效和安全性。方法选取2016年11月—2017年11月于洛阳市中心医院就诊的咳嗽变异性哮喘患者120例,随机分成对照组和治疗组,每组各60例。对照组口服富马酸酮替芬片,1片/次,2次/d;治疗组患者在对照组的基础上口服咳露口服液,15 mL/次,3次/d。两组患者均连续治疗2个月。观察两组患者临床疗效,同时比较治疗前后两组患者哮喘控制测试(ACT)评分、日常生活活动(ADL)评分、咳嗽症状积分、嗜酸性粒细胞(EOS)绝对值、肺功能和不良反应。结果治疗后,对照组和治疗组临床有效率分别为81.67%和95.00%,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组患者ACT和ADL评分显著升高(P0.05),咳嗽症状积分显著降低(P0.05),且治疗组患者ACT、ADL及咳嗽症状积分水平明显好于对照组(P0.05)。治疗后,两组EOS绝对值显著降低(P0.05),肺功能指标用力肺活量(FVC)和第1秒钟用力呼吸容积(FEV1)显著升高(P0.05),且治疗组患者EOS绝对值及肺功能较对照组患者改善更明显(P0.05)。治疗期间,治疗组患者不良反应发生率为3.33%,显著低于对照组的15.00%,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论咳露口服液联合酮替芬治疗咳嗽变异性哮喘疗效显著,安全性好,具有一定的临床推广应用价值。