军团菌在巨噬细胞与中性粒细胞内的生长效应研究

目的探索比较军团菌毒性株在巨噬细胞与中性粒细胞内的生长效应.方法诱导分化人的单核细胞系U937细胞使其成为类巨噬细胞,并分离诱导人的外周血单核巨噬细胞以及中性粒细胞;用不同生长时期的军团菌毒力株AA100,感染诱导分化成功的单核巨噬细胞和中性粒细胞,并比较其在巨噬细胞和中性粒细胞中的生长复制状况.结果过对数生长期的军团菌毒力株能够在巨噬细胞内大量复制,扩增状况呈生长阶段的依赖性;而各生长时期的军团菌毒力株均不能在中性粒细胞内大量扩增.结论军团菌逃逸机体的杀伤作用和免疫监视作用与其能够在巨噬细胞内大量复制密切相关.     

人BNIP3真核表达载体和shRNA表达载体的构建及其对肝癌细胞自噬的影响

目的利用人BNIP3的真核表达载体和靶向BNIP3的shRNA表达载体,研究BNIP3过表达和封闭时对肝癌细胞自噬的影响。方法从人肝癌细胞系中,通过RT-PCR扩增人BNIP3基因编码区序列,酶切后插入pcDNA3.1-His-C载体,以此构建重组pcDNA3.1-BNIP3真核表达载体。同时构建靶向人BNIP3基因的shRNA表达载体pSilencer-BNIP3。分别经测序、酶切、RT-PCR和Western blot等方法对重组载体是否构建成功进行验证。并通过采用Western blot检测自噬标志物LC3蛋白的剪切,研究BNIP3过表达和抑制时对肝癌细胞自噬的影响。结果pcDNA3.1-BNIP3和pSilencer-BNIP3分别过表达BNIP3和抑制BNIP3的表达。BNIP3过表达能够显著增加肝癌细胞的自噬;BNIP3表达受到抑制时,肝癌细胞的自噬明显减少。结论成功构建了人BNIP3的真核表达载体pcDNA3.1-BNIP3和shRNA表达载体pSilencer-BNIP3,并在人肝癌细胞系中证实BNIP3对肝癌细胞自噬的促进作用。     

紧急避孕的临床研究与进展

紧急避孕（emergency contraception，EC）是预防因无防护性生活导致意外妊娠的避孕方法，是一种简便、安全、而且有效的避孕失败后的补救措施。据推测全世界每天有90万人受孕，其中1／2是非计划的，约1／4是完全非意愿的，所以每天有15万名妇女需接受人工流产。因此，避免意外妊娠、降低人工流产率及保护妇女身心健康已是一个世界性问题。紧急避孕的临床研究已有30多年的历史，但我们对这种避孕方法的使用和安全性仍在探索中，寻找更有效、副反应更小的紧急避孕药物和方法，已成为当今计划生育和生殖领域的研究热点。     

重组人可溶性DR5 蛋白的表达、制备及其生物活性检测

目的：纯化毕赤酵母GS115菌株表达的重组人可溶性死亡受体5(DR5)蛋白，并研究其对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)所诱导细胞凋亡的阻断效应。方法：大量扩增可溶性DR5酵母表达载体转化阳性的毕赤酵母GS115菌株，收集上清，利用ProBond^TM亲和层析柱纯化获得重组可溶性DR5蛋白，用SDS-PAGE、Western Blot检验纯化产物的特异性和纯度。用MTT法检测纯化的可溶性DR5蛋白对TRAIL诱导人宫颈癌细胞系Hela细胞凋亡作用的阻断效应。结果：转化阳性的毕赤酵母GSll5菌株可成功表达分子量为26kD的可溶性DR5蛋白，经ProBond^TM亲和层析柱纯化。SDS-PAGE、Western Blot鉴定，结果显示获得了高纯度的重组人可溶性DR5蛋白，蛋白产量达20斗g／ml；体外活性检测结果显示，纯化的可溶性DR5蛋白可部分阻断TRAIL诱导的Hela细胞的凋亡，阻断率最高达53．6％。结论：经纯化后的重组人可溶性DR5蛋白可有效阻断TRAIL诱导的细胞凋亡反应。     

婚检——通往美满幸福的桥梁

婚姻关系是组成家庭的基础,又是孕育“小生命”的前提。在我们的现实生活中,许许多多的家庭夫妻恩爱、生话和谐、美满幸福;有的家庭却苦酒一杯,婚后由于一方出现生理或病理方面的问题,而影响夫妻正常的性生活,甚至导致婚烟破裂;有的家庭因子女痴呆、残疾而痛苦万分。以上种种结局除     

米非司酮抗早孕作用机理的研究进展

<正> 米非司酮(RU486)通过与孕激素竞争受体而对抗孕激素的药理作用达到终止妊娠的效果。大量临床试验证实米非司酮配伍前列腺素是安全、高效的终止早孕方法。“七五”期间,在我国北京(湖北同济医科大学与北京制药三厂合作)、上海(上海计划生育科研所与上海华联制药公司合作)和浙江(南京药学大学与浙江仙居制药厂合作)均研制成功国产米非司酮。“八五”期间已通过卫生部新药审批,并已完成Ⅲ期临床试验和大规模的临床引入性试验,取得了较好的临床效果。本文对米非司酮终止早孕妊娠机理的有关文献作一综述。     

长效避孕皮下埋植剂对生育妇女骨质的影响

为探讨长期缓释单孕激素对妇女骨代谢的影响,测定使用国产Ⅰ、Ⅱ型长效避孕皮下埋植剂和Norplant 3年以上妇女的骨密度及骨代谢指标。采用回顾、设对照组的研究方法,测定123例妇女骨密度(BMD)及其骨代谢指标血钙(Ca)、磷(P)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)、血清雌激素(E_2),尿钙(Ca)、尿肌肝(Cr)和尿羟脯氨酸(HYP)等。结果表明国产Ⅰ、Ⅱ型和Norplant组妇女骨峰值形成期(30～40岁)使用皮埋剂的三组妇女平均E_2水平有不同程度降低,但均在正常低限水平内,与对照组间无差别。除对照组外三组妇女平均E_2水平与BMD之间不呈线性关系;Norplant组妇女BMD和Ca/Cr、HTP/Cr的变化说明骨吸收过程增强。使用国产Ⅰ、Ⅱ型皮埋剂和Norplant妇女3年后平均E_2水平在正常低水平上波动,未造成BMD的变化及其它骨代谢指标的明显变化;三组皮埋剂妇女骨峰值形成期(30～40岁),骨密度处于正常水平范围。长效LNG缓释皮埋剂对育龄妇女在骨代谢方面是安全的。     

TRAIL受体在肿瘤细胞系上的表达及意义

目的 检测TNF相关凋亡诱导配体（TRAIL）的受体，在来源于血液系统、肝脏、肺脏和大肠的8个肿瘤细胞系中的表达，并探讨其意义。方法 采用半定量RT－PCR，对TRAIL受体的表达进行半定量检测。结果 TRAIL凋亡通路中，能够诱导凋亡反应的死亡受体DR4和DR5，在所检测的肿瘤细胞系中都有表达，其中DR5在所有肿瘤细胞系中的表达水平均显著高于DR4（P＜0．05）。而能够竞争性与TRAIL诱导的凋亡反应的诱骗受体DcR1和DcR2，在所有的肿瘤细胞中都呈低水平表达或不表达。结论 DR5可能在TRAIL诱导凋亡的通路中发挥最重要的作用。TRAIL死亡受体和诱骗受体在肿瘤细胞系中的表达具有差异性，这种差异性可在一定程度上解释不同细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感度。     

HBV preS2起始区反义核酸对人肝癌细胞在裸鼠体内生长的抑制作用

PCR合成互补于HBVpre－S2起始区的反义寡核苷酸（as-preS2），以HBVDNA转染的HepG2．2．15细胞接种裸鼠制备人肝癌模型，通过连续用药、一次性用药、混合用药等三种途径研究其对人肝癌裸鼠模型的抑瘤生长及体内抗HBV作用。流式细胞要（FCM）分析asON诱导瘤细胞凋亡作用，ELLSA法检测反核酸作用鼠血清中HBV抗原含量的变化。结果显示，一次性与混合用药组裸鼠均表现为成瘤潜伏期瞎工，成瘤率明显低于瘤细胞对照未用药组（P＜0．05），瘤体生长缓慢。裸鼠瘤内连续用药，在48hFCM测凋亡峰值为39．57％，S期细胞降低显著，生理盐水与无关序列对照分别为7．92％110．89％，提示as-preS2可能诱导S期细胞凋亡。as-preS2荷瘤鼠HBeAg和HBsAg的抑制率分别为45％和65％。提示，as-preS2可有效抑制体内HBV抗原表达，对人肝癌裸鼠在体内的生长有明显的抑制作用。     

3.0倍乙型肝炎病毒全基因真核表达载体的构建及表达

目的:构建3.0倍乙型肝炎病毒(HBV)全基因的真核表达载体,稳定转染HepG2细胞,建立HBV感染的细胞模型.方法:从pUC19-3HBV载体上将约9.6kb的3.0倍HBV全基因克隆至pcDNA3的EcoRⅠ和HindⅢ位点,将构建的pcDNA3-3HBV以脂质体转染HepG2肝癌细胞,经G418稳定筛选.ELISA检测转染细胞培养上清中HBsAg、HBeAg的表达.RT-PCR检测转染细胞中HBpreS2、HBX的表达.结果:成功构建了3.0倍HBV全基因真核表达载体,稳定转染HepG2后,建立了新的肝癌细胞系HepG2.3Z,其培养上清中可检测到HBsAg、HBeAg的稳定表达,并可检测到HBpreS2、HBX RNA在转染细胞中表达.结论:构建的3.0倍HBV全基因真核表达载体可介导病毒复制,其稳定转染的细胞可作为一种新型的HBV体外感染模型.