人乳头状瘤病毒16型不同基因疫苗联合免疫的实验研究

目的 探索联合免疫策略在预防和治疗人乳头状瘤病毒16型（HPV16）相关肿瘤中的作用。方法 在C57BL／6动物模型中，观察了表达HPV16基因的融合蛋白L2E7疫苗和重组痘苗病毒mE67疫苗的不同联合免疫方式在预防和治疗HPV16相关肿瘤中的作用。用酶联免疫斑点（ELISPOT）和细胞毒T淋巴细胞（CTL）反应评价它们在诱发机体产生细胞免疫应答中的作用。结果 我们发现以HPV16 L2E7融合蛋白＋佐剂（CpG）初免，用重组痘苗病毒rVVmE67加强免疫的联合免疫方式在C57BL／6小鼠实验中可以有效预防和治疗HPV16相关肿瘤的攻击。ELISPOT可以检测到高水平的E749-57肽特异性，分泌IFN-γ的效应T细胞。CTL检测同样反应出这种联合免疫方式所诱发的CTL细胞可以有效识别并杀伤含HPV16E6／E7的靶细胞。结论 以HPV16L2E7融合蛋白＋CpG初免，用重组痘苗病毒rVVmE67加强的联合免疫策略可以有效防治HPV16相关肿瘤，为进一步研究提供了科学基础。     

三种淋巴因子在重组痘苗病毒中的表达及其对重组病毒…

研究了巨噬细胞游走抑制因子，白细胞介素及白细胞介素２等三种淋巴因子分别在含有甲型肝炎病毒基因的重组痘苗病毒中表达后，对病毒毒力及免疫效果的影响。使用Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠和家兔进行免疫的初步结果显示，表达ＩＬ－６的重组痘苗病毒免疫后特异性抗体反应明显增强，痘苗病毒抗体及甲型肝炎病毒抗体阳转小鼠数量分别由对照的３／１０和１／１０提高到８／１０和７／１０，痘苗病毒和甲型肝炎及病毒抗体滴度也明显升高。     

流感病毒RNA聚合酶蛋白PB1在小鼠中可诱导亚型间交叉免疫保护

目的探索流感病毒RNA聚合酶PB2和PB1亚基作为实验性流感疫苗候选抗原的可能性.方法以复制型质粒（pSCA）为载体分别构建表达甲1型和甲3型流感PB2和PB1的复制型DNA疫苗,免疫小鼠后分别用甲1型流感病毒（A/PR/8/34）进行鼻腔攻击,观察针对不同亚型流感病毒的复制型DNA疫苗的免疫保护效果.结果本实验所构建的复制型DNA疫苗在真核细胞中均可表达外源基因;本实验采用的复制型质粒载体（pSCA）与传统质粒载体（pcDNA3）在诱导小鼠产生抗体方面无差异,并且都诱导了偏向TH1类的免疫反应;表达甲1型和甲3型流感PB1基因的复制型DNA疫苗均可保护小鼠抵御甲1型流感病毒（A/PR/8/34）的攻击.结论表达甲型流感病毒PB1的复制型DNA疫苗能保护小鼠抵御同型和异型流感病毒的攻击,本实验为流感疫苗研究提供新的候选抗原.     

表达单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D的重组痘苗病毒活疫苗株的建立

我们以前曾报道，表达单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白Ｄ（ＨＳＶ－２ｇＤ）的重组痘苗病毒（实验疫苗株）能保护被免疫小鼠抵抗致死量ＨＳＶ－２病毒的攻击。在此工作基础上，严格按人用疫苗研究要求的实验条件，成功地建立了表达ＨＳＶ－２ｇＤ的重组痘苗病毒活疫苗株。首先将经聚合酶链反应（ＰＣＲ）修饰的ＨＳＶ－２ｇＤ基因插入痘苗表达质粒ｐＪＳＢ１１７５，置于痘苗病毒Ｐ７５Ｋ早／晚期启动子控制下。将此重组质粒用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法转染已受野型ＴＫ＋痘苗病毒天坛７６１株感染的人胚肺二倍体细胞。经同位素探针（３２Ｐ－ＨＳＶ－２ｇＤ）原位杂交法和３轮蚀斑纯化，筛选出基因组内整合有ＨＳＶ－２ｇＤ基因的重组痘苗病毒。斑点和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实，ＨＳＶ－２ｇＤ基因已插入痘苗病毒基因组内预期的ＴＫ区段，间接免疫荧光检测显示，重组病毒感染细胞后能有效地表达ＨＳＶ－２ｇＤ蛋白。     

人类乳头瘤病毒(H1PV)病毒样颗粒的研究进展

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一类具有严格宿主范围和组织特异性的DNA病毒,主要感染人的皮肤或粘膜上皮细胞,引起感染部位发生良性和恶性病变.根据DNA序列的同源性组织特异性等,HPV可分为许多型别.目前发现的人乳头瘤病毒已超过100型[1],其中感染人生殖道的人乳头瘤病毒有35个型别[1],根据其致瘤性不同分为低危型和高危型两大类.高危HPV的感染与宫颈癌的发生有十分密切的关系.约80%的宫颈癌与四个型别的HPV感染有关,分别是HPV16、18、31和45型,其中50%的宫颈癌与HPV16感染有关[1].因此,使用疫苗阻断病毒的感染能有效的减少宫颈癌的发病率.同时还能减少其它一些和HPV相关的肿瘤如:肛门、外阴及扁桃体的肿瘤等.     

低分子右旋糖酐治疗透析过程发作性高血压

我们应用低分子右旋糖酐静滴治疗透析过程发作性高血压,意旨在其疗效进行观察与分析。1病例与方法1.1病例选择:选择在血液透析中反复发生高血压的慢性终末期肾衰18例,其中高血压3级9例,高血压2级6例,高血压1级3例,18例患者中男13例,女5例,年龄35～58岁,合并冠心病12例,高心病4例,按照NYHA心功能分级标准:心功能Ⅳ级4例,Ⅲ级8例,Ⅱ级4例。从选择时段起始对上述18例患者所作的67透析例次按随机抽样分为两组:治疗组36例次,对照组31例次。两组透析前SBP、DBP值比较,差异无显著性意义(P>0.005)。1.2观察方法1.2.1血压测量:测量患者卧位非穿…     

前列腺素E1治疗慢性肺心病急性期临床疗效观察

目的 :观察前列腺素E1 治疗慢性肺心病的疗效。方法 :选择慢性肺心病急性期患者82例 ,随机分成2组。在常规吸氧、改善通气、抗感染、抗凝、化痰等治疗基础上 ,观察组加用前列腺素E1100μg/d静脉滴注 ,治疗5～7天观察疗效。结果 :观察组心、肺功能明显改善 ,PaO2、SpO2 上升 ,与对照组比较差异有显著性 (P<0 05)。结论 :前列腺素E1 治疗慢性肺心病疗效可靠 ,值得推广使用     

抗HCV中和抗体的研究进展

丙型肝炎病毒（HCV）为具包膜的单股正链RNA病毒，属于黄病毒家族。HCV是已知惟一能造成慢性感染的RNA病毒（除逆转录病毒外），据估计，目前全球约1．7亿HCV感染者中，60％-80％为慢性携带者，而持续性感染最终发展为肝硬化／肝癌的机率高达3．5％-20％。如此高比例的慢性感染率意味着在可能的病毒免疫逃逸机制下，机体往往无法激发或维持有效的抗病毒免疫反应。     

甲型H1N1流感病毒感染患者中人冠状病毒和人偏肺病毒感染情况的初步分析

目的 了解北京地区部分甲型H1N1流感病毒感染确诊急诊患者中人冠状病毒HCoV-OCA3、HCoV-229E、HCoV-NL63、HCoV-HKU1和人偏肺病毒(HMPV)的感染情况和临床表现特点.方法 从2009-10～11期间北京地区部分确诊感染甲型H1NI流感病毒病例中,选择采集32份鼻咽拭子标本,利用荧光定量RT-PCR法进行HCoV-OC43、HCoV-229E、HCoV-NL63、HCoV-HKU1和HMPV筛查;对阳性患者进行临床表现初步分析.结果 32份鼻咽拭子标本中荧光定量RT-PCR检出4例(12.5%)HCoV-229E阳性,1例(3.1%)HCoV-HKU1阳性,2例(6.3%)HMPV阳性,未检测到HCoV-OCA3和HCoV-NL63阳性;检出阳性标本的临床表现为急性呼吸道症状,病情较轻,病程多为1周左右.结论 2009-10～11北京地区部分确诊的感染甲型H1N1流感病毒病例中存在有人冠状病毒或人偏肺病毒共感染的情况.     

HCVE2-gAD融合DNA疫苗的构建及其细胞免疫效果评价

目的 将丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus,HCV）包膜糖蛋白E_2与脂联素球部结构域（gAD）进行基因融合后构建DNA疫苗,并通过免疫小鼠评价其所诱发的HCV E_2特异性细胞免疫应答.方法 根据E_2与gAD的基因序列设计引物,分别扩增出不含跨膜区的E_2基因和添加连接肽的gAD基因,再利用重叠PCR将二者融合,以pVRC为载体构建DNA疫苗质粒,经体外转染293T细胞并用Western Blot证实其表达后,采用皮内注射加卡钳电极电转的方式于0、3、6周免疫BALB/c小鼠,取脾细胞进行ELISPOT检测分析其所诱发的E_2特异性T细胞免疫应答水平.结果 成功构建了能有效表达E_2-gAD融合蛋白的新型DNA疫苗,经皮内电转方式免疫小鼠后可获得比单独E_2疫苗更强的HCV特异性T细胞免疫应答.结论 gAD基因的融入可在一定程度上增强疫苗的免疫原性,为新型HCV DNA疫苗的进一步发展和优化莫定基础.