小干扰RNA阻断周期蛋白依赖激酶4对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响

背景与目的：细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)是调控细胞周期进程的重要激酶之一,有实验报道其在子宫内膜癌中呈高表达,但是其在子宫内膜癌细胞中的生物学功能及其可能机制还不十分明确。本研究旨在通过小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默CDK4表达,并检测其对人子宫内膜癌HEC-1B细胞生物学行为的影响及其可能机制。方法：将化学合成的CDK4-siRNA转染至HEC-1B细胞;实时荧光定量PCR法检测转染前后细胞中CDK4的mRNA表达量变化;Western blot检测转染前后细胞CDK4、视母细胞瘤基因(retinoblastoma gene,Rb)及其下游p-Rb的蛋白表达量的变化;分别采用CCK-8法、流式细胞仪、Transwell肿瘤细胞侵袭实验检测细胞增殖、周期、凋亡以及侵袭能力的变化。结果：转染后HEC-1B细胞中CDK4 mRNA及蛋白表达均明显下降(P<0.01);抑制CDK4表达后,抑制HEC-1B细胞的增殖及侵袭,转染si-CDK4组细胞发生侵袭数为(117±21)个,而转染si-control组及未处理组分别为(269±39)个和(262±35)个,差异具有统计学意义(P<0.01);细胞转染后早期凋亡率为(21.7±3.5)%,较未处理组［(12.4±2.1)%］和si-control组［(11.8±1.9)%］明显增加(P<0.01);细胞周期分布发生变化,G₁期比例增加(P<0.01),S期细胞比例降低(P<0.01);进一步的Western blot结果显示,抑制CDK4表达后,细胞内p-Rb表达下降,但是总Rb表达无明显变化。结论：针对CDK4基因的特异性小RNA干扰片段能够下调CDK4基因在子宫内膜癌细胞中的表达,抑制肿瘤生物学进程。     

成都市妊娠期糖尿病相关危险因素分析

目的探讨成都市妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus,GDM）可能相关的危险因素,为加强临床早期干预和管理提供依据。方法采用病例-对照研究方法 ,选择2008年9月～2009年6月在我院经75gOGTT诊断为GDM的患者125例及110例正常妊娠妇女,进行GDM危险因素分析。结果单因素分析发现,在孕妇体重指数、有糖尿病家族史、不良孕产史（畸形儿、巨大胎儿分娩、不明原因死胎、死产、新生儿死亡、自然流产史）、高血红蛋白血症（血红蛋白Hb〉130g/L）、高脂血症[三酰甘油（TG）〉1.70mmol/L]与对照组比较差异有统计学意义（P均〈0.05）;根据单因素分析结果 ,选择有显著意义的因素进行多因素Logistic回归分析。多因素分析发现,与成都市GDM有关的因素是孕前体重指数（BMI）、不良孕产史、家族史及高Hb血症（OR值分别为1.173,2.882,3.541,1.050）。结论成都市妊娠期糖尿病的发病可能与肥胖、糖尿病家族史、不良孕产史及高Hb血症有关。     

过表达miR-125b对子宫内膜癌HEC-1B细胞周期、增殖和凋亡的影响及其可能的机制

探讨miR-125b过表达对子宫内膜癌（endometrial carcinoma, EC）HEC-1B细胞增殖及凋亡的影响及其可能的机制。方法：收集2012年11月至2013年11月间四川省妇幼保健医院收治的30例子宫内膜样腺癌患者肿瘤及其癌旁组织标本,Real-time PCR检测肿瘤组织及培养细胞中miR-125b的表达水平。脂质体转染法分别将miR-125b模拟片段（mimic）与无关序列（scramble mimic）转染入HEC-1B细胞作为miR-125b组和对照组,以野生型HEC-1B细胞为未处理组。流式细胞术和CCK-8法分别检测过表达miR-125b对HEC-1B细胞周期、凋亡和增殖的影响,Western blotting检测过表达miR-125b对HEC-1B细胞中PIK3CD、p-AKT以及总AKT表达的影响。结果：人EC组织中miR-125b表达量较癌旁组织显著下调（P<005）。HEC-1B细胞转染mimic片段后,其miR-125b的表达上调820倍以上。转染48 h后,miR-125b组细胞的增殖能力显著低于对照组和未处理组（0.53±0.06 vs 0.82±0.07、0.89±0.08,P<0.01）、细胞凋亡率显著升高[（21.5±3.2）% vs （142±2.3）%、（13.5±2.1）%,均P＜0.01],并且miR-125b组细胞周期阻滞于G1期;miR-125b组HEC-1B细胞中PIK3CD及其下游p-AKT蛋白表达较对照组和未处理组显著降低（均P<0.01）,而总AKT表达无明显变化（均P＞0.05）。结论：miR-125b在EC组织中普遍低表达,其在HEC-1B细胞中过表达能够明显抑制细胞增殖和周期进程,促进细胞早期凋亡,这可能与miR-125过表达抑制细胞内PI3K/AKT信号通路有关。     

异位妊娠危险因素的分析

目的:探讨异位妊娠发病的相关危险因素,揭示异位妊娠增加的原因.方法:采用回顾性病例-对照研究方法,选择2006～2007年在四川省妇幼保健院经手术病理确诊和临床诊断为异位妊娠的患者615例及600例正常早孕妇女,进行异位妊娠危险因素的logistic回归分析.结果:单因素分析发现,在流产史、分娩史、盆腔感染史、盆腔手术史、异位妊娠史、剖宫产史与对照组比较有显著性差异(P＜0.05);多因素分析发现,与异位妊娠有关的因素是流产史、盆腔感染史、盆腔手术史及异位妊娠史(OR值分别为12.846,11.842,5.170,9.196);方差分析发现病例组流产次数(包括人工流产和药物流产)和分娩次数与对照组比较有显著性差异(F值分别2.784、23.537,P值分别为0.025、0.000).结论:异位妊娠的发病可能与流产史、盆腔感染史、盆腔手术史、异位妊娠史有关.     

MiR-125b表达与子宫内膜癌细胞侵袭及迁移的研究

目的:探讨微小RNA分子miR-125b的表达与子宫内膜癌临床特性的关系及其对子宫内膜癌株HEC-1B细胞的侵袭及迁移能力的影响。方法:收集2012年11月至2013年11月期间四川省妇幼保健院30例子宫内膜癌患者组织标本,利用Taqman Quantitative Realtime-PCR技术检测miR-125b在不同临床分期及不同转移状态的子宫内膜癌患者肿瘤组织中的相对表达情况,分析其表达与子宫内膜癌临床分期及远处转移间的关系;恢复HEC-1B细胞内miR-125b的表达,分别运用Transwell体外侵袭及迁移实验检测其对HEC-1B细胞侵袭及迁移能力的影响。结果:Ⅳ期子宫内膜癌组织中miR-125b的表达较Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期肿瘤组织均明显下降,无远处转移患者组织中miR-125b表达较伴有转移患者表达明显下降,差异均有统计学意义(P0.05)。Transwell迁移实验结果表明,miR-125b组穿膜细胞数(184±35个)较未处理组(410±45个)和对照组(398±40个)明显减少,差异有统计学意义(P0.01);侵袭实验结果表明,过表达miR-125b组穿膜细胞细胞数(123±32个)同样明显少于未处理组(220±30个)和对照组(215±35个),差异有统计学意义(P0.01)。进一步的蛋白印迹结果显示,过表达miR-125b后细胞中基质金属蛋白酶13(MMP-13)表达下降。结论:miR-125b的低表达与子宫内膜癌有无远处转移及临床病理分期有关,恢复其在HEC-1B细胞中的表达能够明显抑制细胞体外侵袭及迁移,这可能与抑制细胞中MMP-13表达有关。