不同诱导因子对 MT-5细胞表达 HBsAg 的影响

对经 HBV-DNA 转染的 MT-5细胞的培养条件进行观察。发现重金属离子Zn 和 Cd 对 MT-5细胞表达 HBsAg 有诱导作用,而咖啡因、地塞米松、氢化可的松、丙酸睾丸酮、苯丙酸诺龙对 MT-5细胞的 HBsAg 均无诱导作用。     

基因工程乙肝疫苗的研制——Ⅲ.MT-5细胞的HBsAg纯化与鉴定

采用超过滤、PEG沉淀和超速离心综合步骤对MT-5细胞培养上清中的HBsAg进行纯化。所得纯化HBsAg经SDS-PAGE银染色结果显示两条多肽,分子量分别为23k和27k,与血源HBsAg的多肽成分相同,为重组HBsAg的两条特异性多肽,且在凝胶中无其它杂蛋白带存在,纯度高。经PAGE银染色结果证实纯HBsAg中的杂蛋白含量符合疫苗生产的要求。经此综合方法提纯的HBsAg回收率可达44.1％以上。     

SDS-PAGE不同银染色敏感性比较

十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是分析蛋白质等生物大分子的常用手段。作者对SDS-PAGE氨银染色和铬银染色两者的敏感性进行了比较,结果显示氨银染色敏感性为铬银染色的50倍。建议分析微量蛋白时使用氨银染色。     

基因工程乙肝疫苗的研制——II.MT-5细胞中重组DNA的分析

采用Biotin-11-dUTP标记乙型肝炎病毒的DNA。利用这种生物素探针对MT-5细胞中的重组DNA进行分析。DNA杂交结果不但确证重组的HBsAg基因转化进入细胞中,而且揭示重组DNA是以游离状态存在,似乎没有整合和重排现象;重组DNA的量在不同亚细胞株中有所不同,HBsAg的表达量与重组DNA拷贝数有正相关关系。     

Tautomycetin诱导乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR的凋亡及其机制

目的:研究tautomycetin对乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR增殖及凋亡的影响及其机制.方法:MTr法检测tautomycetin对MCF-7/ADR细胞增殖的影响,流式细胞术检测MCF-7/ADR细胞的凋亡,Western blotting法检测tautomycetin对MCF-7/ADR细胞caspase相关蛋白、Bcl-2、Cyto-C、P53蛋白表达和Akt磷酸化的影响.结果:Tautomycetin可剂量(0.01～100μmol/L)依赖性地抑制MCF-7/ADR细胞的增殖(P＜0.05),IC50值为(1.26±0.12)μmol/L;与对照组相比,tautomycetin (1 μmol/L)可诱导MCF-7/ADR细胞凋亡,早期凋亡比例由(0.67±0.18)％升高至(17.2±3.8)％,晚期凋亡比例由(0.96±0.23)％升高至(28.4±5.7)％(P＜0.05).Tautomycetin可活化MCF-7/ADR细胞中caspase-7和caspase-9,降低Bcl-2蛋白的表达,促进线粒体释放Cyto-C,降低p-Akt的水平,但对caspase-8和P53的表达没有影响.结论:Tautomycetin可阻断Akt活化,以P53非依赖的方式通过Cyto-C介导的通路诱导MCF-7/ADR细胞凋亡.     

基因工程乙肝疫苗的制备及动物免疫原性研究

乙型病毒性肝炎(简称乙肝)是目前严重威胁我国劳动人民身体健康的传染性疾病,由于缺乏对乙肝病毒特异的病原治疗,所以用疫苗预防的意义更加重要。尽管已经有血源乙肝疫苗,但血源疫苗费用昂贵、来源紧张,且有潜在的危险,因此迫切需要用基因工程手段制备乙肝疫苗。我们前一阶段工作已经建立了能够表达HBsAg的工程细胞株MT-5细胞,     

基因工程乙肝疫苗的研制——Ⅰ.MT-5细胞的HBsAg表达特性初探

作者对基因工程转化细胞株MT-5的HBsAg表达特性进行了观察分析。结果表明:细胞的连续传代对HBsAg的表达稳定性没有影响;MT-5的不同单细胞亚克隆株中的HBsAg表达量存在不均一性;HBsAg的表达不但受重金属离子的诱导,而且细胞可以耐受较高浓度ZnCl_2的处理;MT-5细胞表达的HBsAg具有糖基化多肽,是制备疫苗的理想材料;通过培养条件最优化,筛选高产亚克隆细胞株和采用最适重金属离子诱导浓度,HBsAg的产量达到2.5mg/1,即2.2×10~(-12)g/细胞。