病毒样颗粒技术在人用疫苗中的应用

病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是由病毒的一种或多种结构蛋白组成的、不含病毒基因组的空心颗粒.许多病毒的结构蛋白在真核或原核表达系统中能够自我组装成VLPs.VLPs具有与天然病毒相似的免疫原性而无感染性,因此是一种较为理想的候选疫苗抗原.     

CpG-ODN可增强痘苗病毒修饰的癌溶物的抗肿瘤效果

研究CpG联合非复制重组痘苗病毒在肿瘤免疫治疗中的效果。方法 :构建非复制重组痘苗病毒v△ 11β75 ,联合应用免疫刺激寡核苷酸和重组痘苗病毒v△ 11β75进行肿瘤免疫治疗。 结果 :重组痘苗病毒v△ 11β75在人源 143细胞中的不能正常繁殖 ,Southern blot证实痘苗病毒天坛株HindⅢC ,K片段间基因的缺失。在Wistar大鼠的Walker′s肿瘤模型中 ,联合应用CpG ODN和非复制痘苗病毒修饰的WRC2 5 6细胞裂解物进行免疫治疗 ,可以延长荷瘤鼠的生存期 ,肿瘤生长速度降低。结论 :CpG ODN可以增强非复制痘苗病毒修饰的肿瘤细胞裂解物的抗肿瘤治疗效果 ,为肿瘤免疫治疗提供了一种新的途径。     

细菌性疫苗研究的新策略

目前人用细菌性疫苗主要包括灭活疫苗、减毒活疫苗、多糖疫苗、多糖蛋白结合疫苗、基因工程蛋白疫苗和类毒素等.蛋白保护性抗原在细菌的不同血清型/群间具有较好的保守性,更适合用作广谱细菌性疫苗的候选抗原.研制细菌性蛋白疫苗的一个重要前提是筛选获得具有应用前景的细菌蛋白保护性抗原.     

乙型肝炎DNA疫苗在黑猩猩中的免疫原性以及与其他疫苗的比较

以前的研究证实,编码HBsAg的DNA疫苗在小鼠中有良好的免疫效果.本文作者评价了乙型肝炎DNA疫苗在黑猩猩中的免疫原性.作者构建了编码乙型肝炎病毒ayw亚型(前S2+S)抗原的真核表达载体pCMV-S2.S,在0、8、16和27周分别以400μg和2mg的剂量肌肉注射两只黑猩猩(编号分别为CH1545和CH1547),并在52周用重组S蛋白(adw亚型)加强1次;随访72周,每周采血用ELISA检测总抗体、组及亚型特异性抗体.实验结果如下:(1)CH1547初免后抗-HBs水平>100mIU/ml,加强免疫后有持续的高水平抗体(约为1万mIU/ml);CH1545初免后没有检出抗体,加强免疫后抗体水平     

CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂对流感病毒裂解疫苗免疫效果的影响

目的 研究CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂对流感病毒裂解疫苗体液免疫和细胞免疫效果的影响,为今后研制新佐剂流感疫苗和解决流感疫苗产能不足的问题提供依据.方法 以不同剂量的2009 H1N1流感病毒裂解疫苗为抗原,分别以CpG-ODN、氢氧化铝以及CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂为疫苗佐剂免疫BALB/c小鼠,通过ELISA、血凝抑制试验和假病毒中和试验等方法评价体液免疫效果,通过ELISPOT、胞内细胞因子染色和体内CTL杀伤等方法评价细胞免疫效果.结果 与无佐剂对照组相比,CpG-ODN或氢氧化铝单独使用能够在一定程度上增强体液免疫,2针免疫后不同抗原剂量组中抗原特异性IgG抗体滴度、血凝抑制抗体滴度和中和抗体滴度分别提高3～6倍、2～4倍和4～8倍.CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂具有更强的佐剂效应,2针免疫后不同抗原剂量组中抗原特异性IgG抗体滴度、血凝抑制抗体滴度和中和抗体滴度分别提高23～ 57倍、9～20倍和16～64倍.根据体液免疫结果,复合佐剂能够使流感病毒裂解疫苗的抗原用量降低至少16倍.此外,复合佐剂能够显著增强流感病毒裂解疫苗的细胞免疫应答,不但能够促进抗原特异性CD4+T细胞的IFN-γ分泌,而且能够促进抗原特异性CD8+T细胞的CTL杀伤活性.结论 CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂能够增强流感病毒裂解疫苗的体液免疫和细胞免疫应答并显著降低抗原用量.     

两种CpG基序能高度活化人免疫细胞

目的：筛选活化人免疫细胞的CpG基序（CpG motif）,设计对人免疫细胞有强免疫刺激活性的CpG寡脱氧核苷酸（CpG-ODN）。方法：设计合成含有5’－CG－3’二核苷酸、长度为12个碱基的硫代修饰CpG-ODN,并利用体外培养的人外周血单个核细胞（PBMC）,以培养上清中的IgM水平为指标,筛选能够活化人免疫细胞的CpG基序。根据筛选获得的活性CpG基序,设计一组含有2－6拷贝CpG基序、长度为15－30个碱基的CpG-ODN,从中筛选对人免疫细胞有强免疫刺激活性的序列。结果：发现了多个活性CpG基序,其中5’－GACGTT－3’,5’－GACGTC－3’,5’－GGCGTT－3’和5’－GGCGTC－3’等4个基序对人B细胞有中度免疫刺激活性,和已发表的小鼠CpG基序完全一致;5’－GTCGTT－3’和5’－GTCGTC－3’2个基序对人B细胞有高度免疫刺激活性,第二位碱基均为“T”,而在小鼠CpG基序中该位碱基为“G”或“A”。根据后2个CpG基序,设计了多个对人免疫细胞有高度免疫刺激活性的CpG-ODN。结论：人免疫细胞中存在有高度免疫刺激活性的CpG基序和CpG-ODN。     

三种类型CpG-ODN作为蛋白亚单位疫苗佐剂的比较研究

目的 比较A、B和C3种类型CpG-ODN在动物模型中的疫苗佐剂活性,为设计高活性的新型人用疫苗佐剂提供理论基础.方法 用不同CpG-ODN刺激体外培养的小鼠脾细胞,检测上清中的IFN-γ和IgM,从而确定3种类型的CpG-ODN.以基因工程乙肝表面抗原(HBsAg)为模型抗原、不同类型CpG-ODN为佐剂免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA法检测被免动物血清中抗原特异性ISG、IgG1和IgG2a抗体.结果 小鼠免疫结果表明,与Al(OH),对照组相比,3种类型CpG-ODN均具有良好的疫苗佐剂活性,但B和C型CpG-ODN诱生的抗原特异性IgG和IgG2a抗体水平远高于A型CpG-ODN.虽然A型CpG-ODN也能够显著增强总抗体水平,但并不改变IgG1和IgG2a抗体亚型的比值.这与B和C型CpG-ODN能够极大地促进TH1类免疫应答并降低IgG1/IgG2a比值明显不同,提示不同类型CpG-ODN可能通过不同机制起到疫苗佐剂作用.结论 不同类型CpG-ODN具有不同疫苗佐剂活性,B和c型CpG.ODN在小鼠体内的体液免疫佐剂效果优于A型CpG.ODN.