自身免疫性溶血性贫血红细胞相关抗体检测及临床分析

目的：分析自身免疫性溶血性贫血（AIHA）患者血液中红细胞相关抗体（EAIg）免疫分型的临床意义。方法；采用流式细胞仪和抗人单克隆抗体检测24例AIHA患者的EAIg，并分析其亚型及其与临床的关系。结果：24例AIHA患者直接抗人球蛋白试验（Coombs）仅8例阳性，阴性16例，而FCM检测出其中13例EAIg阳性，类型分布以IgG＋C3型多见，且贫血、溶血程度重，余依次为C3型、IgG型。结论：AIHA免疫分型可判定疾病的严重程度以及为临床治疗提供依据。     

阿糖胞苷、阿柔比星联合粒细胞集落刺激因子治疗骨髓增生异常综合征的临床研究

目的 探讨阿糖胞苷(Ara-C)、阿柔比星(Acla)联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的临床疗效及安全性.方法 选择2011年1月至2013年1月,深圳市第四人民医院收治的初治MDS患者56例为研究对象.按照随机数字表法将其分为研究组(n=28)与对照组(n=28).研究组予以Ara-C、Acla联合G-CSF治疗,对照组按照标准化方案治疗.对两组的临床疗效、外周血常规结果及骨髓细胞原始比例、不良反应发生情况、巩固及维持治疗及生存情况进行统计学分析.本研究征得受试对象的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书.两组患者的年龄、性别构成比、病程、疾病类型构成比及危险分型构成比与治疗前白细胞计数、血小板计数、血红蛋白(Hb)水平、中性粒细胞(Neut)计数及骨髓原始细胞比例等一般临床资料比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结果 ①研究组完全缓解(CR)率、治疗总有效率分别为50.0％(14/28)与82.1％(23/28),均显著高于对照组的32.1％(9/28)与53.6％(15/28),差异均有统计学意义(P＜0.05).②治疗后,研究组患者白细胞计数、血小板计数、Hb水平及Neut计数均显著高于对照组,骨髓原始细胞比例显著低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗后,研究组组内白细胞计数、血小板计数、Hb水平及Neut计数较治疗前,均显著提高,骨髓原始细胞比例则显著下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗后,对照组组内白细胞计数与治疗前比较,差异无统计学意义(P＞0.05),而血小板计数、Hb水平及Neut计数则均较治疗前显著提高,骨髓原始细胞比例显著下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).③研究组Ⅲ～Ⅳ级骨髓抑制、肺部感染、口腔溃疡及胃肠道等不良反应发生率均显著低于对照组,差异均有统计学意义(x2=12.847,17.044,7.212,14.684;P＜0.05).④研究组急性髓细胞白血病(AML)转化率(14.3％,4/28)显著低于对照组(25.0％,7/28),且差异有统计学意义(P＜0.05);研究组患者中位总体生存时间(22.0个月)较对照组(18.2个月)显著延长,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 应用Ara-C、Acla联合G-CSF治疗MDS,治疗疗效显著,不良反应较少.因本研究纳入样本量较小,该方案是否为安全、可靠的治疗方案而值得临床推广应用,尚需多中心、大样本的前瞻性随机对照试验进一步研究证实.     

MicroRNA-122调控的TK基因有效降低TK/GCV治疗系统的肝毒性

目的：探讨利用肝脏特异性microRNA-122(miR-122)调控外源基因在肝细胞的表达,减轻单纯疱疹病毒1型胸苷激酶和更昔洛韦（herpes simplex virus type 1-thymidine kinase/gancyclovir,TK/GCV）治疗系统的肝毒性。方法：通过在相应基因的3′非翻译区（３′ＵＴＲ）插入miR-122靶序列,构建miR-122调控的pEGFP-122T、pLuc-122T和pTK-122T表达载体,分别转染miR-122阳性的Huh7肝癌细胞和miR-122阴性的HeLa宫颈癌细胞,观察细胞中报告基因的表达及TK/GCV的细胞毒杀伤作用。水动力法分别注射上述质粒至小鼠体内,冰冻切片和活体成像观察肝脏EGFP和Luc的表达,通过小鼠血清ALT、体质量变化、存活率和肝脏病理变化评价TK/GCV系统的肝毒性。结果：在Huh7细胞,miR-122靶序列的插入抑制了EGFP的表达和Luc的活性,减轻TK/GCV的毒性杀伤;而在HeLa细胞,miR-122靶序列的插入对报告基因表达和TK/GCV的杀伤无影响。体内实验结果显示,pEGFP-122T处理组的肝细胞不表达EGFP,而pEGFP处理组的肝细胞有30%高表达EGFP;与pLuc处理组相比,pLuc-122T处理组的Luc活性下调了33.70%。pTK处理组小鼠血清ALT显著升高、体质量进行性下降、肝脏出现明显病理损伤,进而引起小鼠死亡;而pTK-122T处理组小鼠血清ALT正常、无体质量下降、肝脏切片未见病理改变。结论：miR-122靶序列的插入可抑制外源基因在肝脏的表达,并可有效地降低TK/GCV系统的肝毒性。     

美罗华联合CHOP方案治疗胃恶性淋巴瘤

恶性淋巴瘤包括霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤(NHL),两者均分为淋巴结来源和淋巴结外来源,而淋巴结外来源占NHL25%-50%,其中胃是最好发的部位。与胃癌相比,原发性胃淋巴瘤发病率低,在胃恶性肿瘤中占2%-8%,但有逐年升高的趋势,其发病率和病死率已居恶性肿瘤第五位。胃淋巴瘤的发病年龄大多超过50岁,但也有报道年轻患者的发病率有所上升。近年来,随着单克隆抗体研制成功,NHL的治疗取得了可喜的进步,美罗华即抗CD20单克隆抗体,是第一个被美国FDA批准进入临床治疗应用的单抗制剂。我院2003年6月开始开展美罗华联合CHOP方案治疗1例胃NHL,取得满意疗效,现报道如下。1资料与方法患者,女,31岁。因反复腹痛伴解黑便半个月余,拟"上     

特发性血小板减少性紫癜的临床分析

目的：总结成人特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP）患者的临床特点。方法：对66例ITP患者的临床资料进行回顾性分析。结果：66例成人ITP患者,男女比例为1：3.6,84.5%为慢性型,仅15.5%发病前有诱因,成人ITP,治疗前骨髓巨核细胞数增多者的疗效明显优于巨核细胞数正常或减少者（p〈0.05）,ITP组PDW增高（16.95±1.08）fl,与对照组比较有显著意义（P〈0.05）;ITP组的MPV增高（9.88±1.36）fl,与对照组比较有非常显著的意义（P〈0.001）;并且随着病情的进展,MPV逐渐增高,PDW减低。结论：成人ITP起病隐袭,多呈慢性经过,发病的免疫机制比较复杂。ITP患者治疗前骨髓巨核细胞数增高者比正常或减少者疗效好,检查骨髓巨核细胞数有助于临床判断疗效,同时动态观察血小板参数对其诊断和疗效观察有非常重要的意义。     

慢性粒细胞白血病血管内皮生长因子表达及其临床意义

目的:探讨慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者血清血管内皮生长因子(vascular en-dothelial growth factor,VEGF)表达水平与病情进展和近期疗效的关系。方法:采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)定量检测了9例CML患者初诊时、治疗前后以及其中4例患者从慢性期向急变期转变过程中的血清VEGF水平。结果:在9例初诊的CML患者中,慢性期组、加速/急变期组VEGF水平明显高于正常人对照组,而加速/急变期组又高于慢性期组;对其中4患者动态观察发现,随着病情从慢性期向加速期、急变期进展,其VEGF水平也逐渐升高;CML患者经治疗并取得近期疗效后,其VEGF水平明显下降,而无效组却无变化。结论:CML患者血清VEGF水平与病情进展、近期疗效密切相关,可作为判断预后和疗效的参考指标。     

免疫性血小板减少症患者P-糖蛋白与淋巴细胞亚群的相关性研究

目的探讨免疫性血小板减少症患者P-糖蛋白(P-gp)与淋巴细胞亚群(CD4~+、CD8~+)的相关性研究。方法选取2015年8月至2016年9月该院确诊的免疫性血小板减少症患者20例,依据血小板计数分为轻度组和重度组,同期该院体检中心健康体检者20例纳入对照组,所有研究对象均采用流式细胞技术检测血浆淋巴细胞亚群(CD4~+、CD8~+)和P-gp水平,采用Pearson相关分析法分析血浆P-gp与血浆CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+的关系,统计分析所有研究对象血浆血小板计数、淋巴细胞亚群和P-gp水平。结果重度组患者血浆CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+和P-gp水平明显高于轻度组,差异有统计学意义(t=3.587、2.957、2.315、2.646,P0.05),轻度组患者血浆CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+和P-gp水平明显高于对照组,差异有统计学意义(t=5.479、2.921、4.536、7.750,P0.05)。血浆P-gp水平与血浆CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+水平呈正相关(r=0.683、0.617、0.548,P0.05)。结论血浆CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+和P-gp水平与免疫性血小板减少症患者病情有关,血浆P-gp水平与患者免疫功能异常亢进存在密切联系,提示检测其水平变化有助于医师评估患者药物治疗疗效。     

重组8型腺相关病毒介导双荧光素酶基因在小鼠体内的表达

目的 利用共表达的分泌型荧光素酶Gluc(gaussia princeps luciferase)和非分泌型荧光素酶Fluc(firefly luciferase)研究重组8型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus type 8,rAAV8)介导的转基因在小鼠体内的表达特点.方法 制备携带双荧光素酶基因的重组8型腺相关病毒rAAV8-Gluc/Fluc,体外感染HEK293细胞并检测上清和胞内Gluc和Fluc活性;将不同剂量的rAAV8-Gluc/Fluc尾静脉注射或肌内注射至BALB/c小鼠,通过尾静脉采血检测Gluc活性,通过活体成像和裂解组织检测Fluc活性.结果 成功制备了rAAV8-Gluc/Fluc,可以有效感染HEK293细胞,同时分泌表达Gluc和胞内表达Fluc;尾静脉注射或肌内注射rAAV8-Gluc/Fluc至小鼠后,外周血Gluc活性均在注射后10 ～20 d达到高峰并稳定持续120 d以上,Gluc活性随注射剂量增加而增高;静脉注射rAAV8-Gluc/Fluc时Fluc主要在肝脏表达,在骨骼肌和心肌有少量表达,而肌内注射时Fluc既在肌内注射局部表达同时也在肝脏中表达.结论 本研究成功制备了携带双荧光素酶基因rAAV8-Gluc/Fluc,研究了其介导的转基因在小鼠体内的表达特点,为rAAV8的临床前应用打下基础.     

弥漫性血管内凝血的临床分析

目的 了解DIC的临床特点,提高DIC的早期诊断,早期合理治疗。方法 对38例DIC的临床资料进行分析。结果 38例DIC患者,21例治疗有效,有效率为55．3％。其中22例DIC患者使用低分子肝素和／或使用肝素,13例有效,有效率为59.1％。结论 早期诊断,及时除去病因,积极治疗者预后较好。     

重组人瘦素对慢性特发性血小板减少性紫癜患者骨髓巨核细胞的影响

目的：探讨瘦素对 CITP 骨髓巨核细胞的影响。方法以急性巨核细胞白血病细胞株 M07e 和 CITP 骨髓 CD34＋细胞经诱导分化的巨核细胞为研究对象。运用 RT-PCR 检测 M07e 细胞瘦素受体 mRNA 表达,运用 Brdu-ELISA 法检测瘦素对 M07e 细胞的增殖作用,运用 Annexin V/ PI 双标流式检测瘦素对 M07e 细胞的凋亡作用。经TPO、SCF 诱导磁珠分选后获得的 CITP 骨髓 CD34＋细胞分化为巨核细胞,运用流式测定瘦素对其分化过程中CD41a ＋、CD61＋的表达以及 CD41a ＋细胞的凋亡是否有影响。结果瘦素受体长型 Ob-RL 和短型 Ob-RS 在 M07e细胞均有 mRNA 表达。瘦素对 M07e 细胞的增殖有促进作用,并呈现一定的剂量依赖性,浓度为5 ng/ ml 即显示出促增殖效应（P =0.037）,但浓度在5、10、25 ng/ ml 之间无明显统计学差异,浓度为100 ng/ ml 时其增殖效应最大。在时间依赖效应上,瘦素作用48 h,其细胞增殖明显高于24 h,而作用72 h 其细胞增殖介于两者之间（P =0.000）。瘦素对 M07e 细胞具有抑制凋亡作用（P =0.001）,而且在作用72小时后凋亡率最高。瘦素对骨髓 CD34＋细胞分化为巨核细胞过程中 CD41a ＋、CD61＋表达的影响,与不加瘦素组相比无明显统计学差异（P ＞0.05）。对 CD41a ＋细胞凋亡的影响与不加瘦素组相比亦无明显统计学差异（P ＞0.05）。结论瘦素通过促进 M07e 细胞的增殖,抑制其凋亡来参与巨核细胞白血病的发生、发展。瘦素在 TPO ＋ SCF 诱导 CITP 骨髓巨核细胞分化中无明显协同作用,对分化产生 CD41a ＋巨核细胞的凋亡亦无明显作用。