4℃低温保存对神经干细胞活性的影响

神经干细胞（neuralstemcells,NSCs）是一群来源于神经组织的细胞,具有连续增殖、定向分化、迁移并与宿主细胞形成功能联系的特性。NSCs在适当条件下可分化成神经元、少突胶质细胞和星型胶质细胞。NSCs的发现标志着神经科学领域的重大突破,在治疗神经系统损伤以及多种神经系统疾病方面具有广阔的临床应用前景。     

BMP4对胶质瘤干细胞恶性增殖的影响

目的探讨骨形态发生蛋白4(BMP4)对脑肿瘤干细胞(BTSC)体内外增殖能力的影响。方法神经球培养法分离胶质母细胞瘤(GBM)来源的BTSCs,给予外源BMP4刺激后,集落形成实验(CFU)观察BTSCs克隆形成能力、四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测BTSCs的增殖能力变化;并利用立体定向技术制备裸鼠脑内BTSCs移植瘤模型,检测BMP4对BTSCs在裸鼠颅内成瘤性影响。结果外源BMP4刺激可以明显抑制BTSCs的克隆形成能力,并明显减低BTSCs的体外增殖能力。裸鼠体内实验结果显示,BMP4的预刺激,可以使BTSCs在移植入裸鼠颅内4 w后,无明显肿瘤生长迹象,仅见沿针道走行的移植细胞。结论外源BMP4对BTSCs的体内、外增殖具有明显的抑制作用,这一特性可被用于GBM的生物靶向治疗。     

水下爆炸致水面泅渡战位比格犬脑和肺的损伤特点

目的 研究水下爆炸引起水面泅渡战位比格犬脑和肺的损伤情况.方法 20只健康比格犬随机分为4个实验组(距爆源5、8、11和15 m)和1个对照组(n=4).利用1 kg 2,4,6-三硝基甲苯(TNT)裸药在水下2 m实施爆炸对水中漂浮比格犬进行致伤,采用水下及颅内压力传感器和高速摄像机记录爆炸致伤的过程.爆炸后3 h内对存活的比格犬行头部和胸部CT检查及头部MRI检查.爆炸后24 h取脑和肺标本,观察颅脑和胸、肺大体损伤情况,并通过H-E染色和TUNEL染色观察脑和肺组织病理学变化及细胞凋亡情况.结果 压力传感器和高速摄像机观察到水下爆炸的致伤过程包括冲击波作用和气泡作用2个阶段.5 m、8 m、11 m和15 m组比格犬分别死亡4、3、1、0只.头部CT和MRI检查示实验组比格犬脑组织没有明显损伤,胸部CT检查示有肺内出血、气胸、血胸或胸腔积液等表现.H-E染色结果示实验组比格犬脑组织无明显变化,而肺组织肺泡破裂,肺泡腔内有大量红细胞,肺间质内有大量炎症细胞浸润.TUNEL染色仅见海马区少量细胞呈阳性表现,而肺组织肺泡上皮细胞和间质细胞呈现广泛的凋亡坏死趋势.结论 水下爆炸引起水面泅渡战位比格犬的损伤主要为肺爆震伤,脑组织损伤相对轻微.     

多舱室爆炸致比格犬血清皮质醇、生长激素、泌乳素的变化及其与伤情的关系

目的 探讨比格犬多舱室爆震伤后血清快速反应激素皮质醇和非快速反应激素[生长激素（GH）、泌乳素（PRL）]的变化，及其与颅脑损伤程度的关系。方法 建造与实际舰船等大小的相邻舱室，并取健康成年比格犬48只随机置于当舱和邻舱。海军用炮弹于当舱进行静爆，利用压力传感器记录舱室内压力变化情况并测定爆炸前及爆炸后0.5、3、18 h当舱与邻舱实验犬血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）、皮质醇、GH和PRL的含量。结果 当舱内压力在起爆后出现明显的单个波峰（压力>3 000 kPa），远高于邻舱最高峰（压力<170 kPa）。当舱实验犬总死亡率（70.83%）明显高于邻舱实验犬（12.50%；P<0.05）。当舱和邻舱实验犬血清NSE、GH、皮质醇在爆炸后均持续高于爆炸前（P<0.05)，而血清PRL未出现明显波动（P>0.05）。伤后18 h，当舱实验犬血清GH水平明显高于邻舱实验犬（P<0.05）。结论 当舱实验犬较邻舱实验犬遭受到更为严重的颅脑爆震伤，伤后超急性期血清GH的测定可能有助于伤情的判断。     

舰船多舱室爆炸致比格犬颅脑爆震伤模型建立及伤情分析

目的 模拟舰船内爆炸后生物体的损伤情况,探索典型多舱室内爆炸后比格犬在爆炸冲击波、准静态压力作用下的颅脑损伤伤情特点.方法 在等比例舰艇舱室模型中,使用0.65 kg TNT裸药模拟舰船内爆炸,其中炸药安放舱为当舱,相邻舱室为邻舱.采用压力传感器测定冲击波物理参数.将24只比格犬随机分为2组,每组12只,分别置于当舱和邻舱中接受爆炸损伤.观察爆炸后犬存活情况、基本生命体征变化、神经功能评分以及颅脑大体和形态学改变.结果 爆炸后舱室内会出现两次较大的反射冲击波,邻舱的冲击波压力峰值约为当舱的0.39倍.比格犬在爆炸后即刻死亡7只,24 h内死亡4只,死亡率为45.83％(11/24),其中当舱动物死亡率为66.67％(8/12),邻舱动物死亡率为25.0％(3/12).存活比格犬的基本生命体征和神经功能在爆后即刻有较大的改变,24 h后基本恢复.即刻死亡的比格犬脑组织有明显的挫裂伤,爆炸后24 h内死亡的比格犬脑组织可见脑出血和脑水肿;爆炸后存活比格犬的脑组织在光镜下也可见部分形态结构和神经元结构的异常,部分神经元出现核囤缩深染、核溶解或核仁消失,细胞界限模糊.结论 舰船多舱室爆炸后,当舱的冲击波压力明显高于邻舱,并且舱室内会出现二次反射冲击波,加重了对生物体的损伤;当舱比格犬的死亡率明显高于邻舱;比格犬在爆后即刻急性损伤最为严重,且脑组织有明显的病理变化.     

miR-155在胶质瘤干细胞样细胞的表达及临床意义

目的研究miR-155在人胶质瘤干细胞样细胞(glioblastoma stem-like cells,GSCs)与正常神经干细胞(neural stem cells,NSCs),及不同病理级别脑胶质瘤组织的表达差异,其表达水平与胶质瘤恶性程度及预后的关系。方法采用神经球(neurosphere)培养法体外分离扩增人GSCs与NSCs,并进行免疫荧光及移植瘤实验鉴定。用q RT-PCR的方法检测miR-155在GSCs、NSCs及不同级别胶质瘤和正常脑组织的表达水平。结合患者的预后,进行Kaplan-Meier生存曲线分析。结果GSCs的miR-155表达水平明显高于NSCs(P 0. 05);随着胶质瘤级别的增高,miR-155的表达水平也明显增高,WHOⅢ级、Ⅳ级恶性胶质瘤的miR-155表达水平明显高于正常脑组织(均P 0. 05)。miR-155高表达与恶性胶质瘤的不良预后密切相关。结论 miR-155在GSCs及高级别胶质瘤组织中的表达水平增高,其表达水平可作为判定胶质瘤预后的标志物。     

亚甲蓝对胶质瘤干细胞增殖作用的影响

目的研究亚甲蓝(MB)对胶质瘤干细胞增殖作用的影响。方法从新鲜人脑胶质母细胞瘤标本中分离脑肿瘤细胞,接种于含生长因子的无血清改良Eagle培养基/F-12(DMEM/F-12)培养基中培养至细胞形成干细胞球,用免疫荧光法对其进行检测和鉴定。随机将细胞分为四组:正常对照组,低剂量组,中剂量组,高剂量组。采用生长曲线法,软琼脂克隆形成法检测亚甲蓝对胶质瘤干细胞增殖作用的影响,流式细胞仪检测亚甲蓝作用后的胶质瘤干细胞的凋亡情况。结果生长曲线、集落形成能力结果和凋亡检测结果均显示,与对照组及低剂量组相比,亚甲蓝中、高剂量组细胞的增殖能力明显下降,且亚甲蓝的最低有效浓度为1μM,最佳有效浓度为10μM。结论亚甲蓝可以降低胶质瘤干细胞的增殖能力。     

神经干细胞对脑肿瘤干细胞体内外趋向性研究

目的 探讨人神经干细胞(hNSCs)对脑肿瘤干细胞(BTSCs)的趋向性.方法 利用神经球培养方法培养胶质母细胞瘤(GBM)来源的BTSCs.采用Transwell细胞迁移实验检测hNSCs对BTSCs的体外趋向性;利用立体定向注射的方法,建立裸鼠颅内AAV-EGFP-BTSCs移植瘤模型,将标记有红色荧光蛋白(RFP)的人源性NSCs(hNSCs)接种到移植瘤对侧脑组织,荧光显微镜观察hNSCs向移植瘤的迁移情况及在移植瘤体内的分布.结果 GBM组织中可分离扩增到CD133+和Nestin+的BTSCs细胞,BTSCs在体外以神经球的形式生长,将这些细胞接种到裸鼠颅内可形成新的胶质瘤.细胞迁移实验显示体外培养的hNSCs可向BTSCs定向迁移,裸鼠颅内移植瘤实验显示hNSCs可在颅内沿切线向BTSCs移植瘤定向迁移,并能穿透肿瘤组织,到达瘤组织中心区.结论 外源hNSCs对BTSCs具有明确的体内外趋向性.这一特性可被用于干细胞为载体的基因治疗研究.     

25例恶性胶质瘤中肿瘤干细胞的分离与检测

目的 从不同病理级别胶质瘤组织标本中分离、培养并鉴定胶质瘤干细胞.方法 取25例(23例原发胶质瘤,2例复发胶质瘤)新鲜人脑胶质细胞瘤标本,分离脑肿瘤细胞,接种于含生长因子的无血清达尔伯克(氏)必需基本培养基/F-12(DMEM/F-12)培养基中培养至细胞形成干细胞球,免疫荧光法检测脑肿瘤干细胞CD133、Nestin的表达情况,干细胞球诱导分化后检测细胞表面分化标记物β微管蛋白Ⅲ(β-TubulinⅢ)、神经胶质酸性蛋白(GFAP)表达情况.结果 被检测的23例原发胶质瘤标本中,随着胶质瘤级别的增高,形成神经球的时间缩短,数量增多.2例复发胶质瘤组织分离得到的细胞形成的神经球较原发胶质瘤快而多.免疫荧光方法检测神经球CD133、巢蛋白(Nestin)表达阳性.神经球细胞经诱导分化后β-TubulinⅢ、GFAP表达阳性.结论 胶质瘤组织中存在肿瘤干细胞,不同级别胶质瘤中BTSC数量及增殖能力不同.