冠心病家族史青少年载脂蛋白E、B的基因多态性

目的 探讨青少年载脂蛋白E(apolipoprotein E，apoE)、apoB基因多态性对冠心病的遗传易感性。方法 应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性技术，对244名健康汉族大学生(冠心病家族史阳性者109人，阴性者135人)的apoE、apoB XbaI、apoB 3’可变数目串联重复序列(variable number of tandem repeat ，VNTR)基因型进行分析。结果 阳性组的e4、x^ 、VNTR—B(hypervariable element，HVE＞38)等位基因频率显著高于阴性组(P＜0．05)，且与血总胆固醇、低密度脂蛋白—胆固醇、aPoBl00水平升高有显著相关(P＜0．05)。结论 apoE的e4、apoB Xba I的x^ 、apoB3’VNTR的VNTR—B可能为冠心病的重要遗传标记。     

PCR-LIS-SSCP检测大肠癌PTEN基因的点突变

目的　探讨PTEN基因突变在大肠癌发病机理中的作用。方法　应用聚合酶链反应 -低离子强度 -单链构象多态性技术 ,对大肠癌及正常大肠石蜡包埋组织中PTEN的第 7、第 8个外显子进行点突变检测。结果　在 60例大肠癌组织中 ,第 7个外显子SSCP带型异常的有 2 8例 ,阳性率为 46.7% (χ2 =5 .0 81,P <0 .0 5 ) ,第 8个外显子未见阳性带。在 10例正常大肠组织中 ,2个外显子均未见异常SSCP带型。结论　大肠癌组织中PTEN的第 7个外显子点突变的发生率高 ,PTEN基因突变可能在大肠癌发病机理中有重要作用     

人内皮抑素在大肠杆菌中的高效表达及活性研究

目的:表达人内皮抑素蛋白,制备多克隆抗体,检测其生物学活性。方法:采用PCR法扩增人内皮抑素基因,构建pGEX-ES融合表达载体,IPTG(异丙基硫代-β-D半乳糖苷)诱导表达。初步纯化的内皮抑素包含体蛋白制备兔多克隆抗体,Western-blot检测其在小鼠肝、肾等的表达。亲和纯化的内皮抑素蛋白用内皮细胞抑制实验检测其生物学活性。结果:诱导表达的人内皮抑素蛋白经凝血酶酶切后,分子量约为 20kD,具有抑制内皮细胞生长的活性。制备的多克隆抗体检测出内皮抑素在小鼠肝、肾等组织的表达。结论:人内皮抑素的成功表达及抗体制备为抗血管生成治疗实体瘤的研究及检测奠定实验基础.     

青少年载脂蛋白E、载脂蛋白B基因多态性与冠心病的关系

目的　探讨青少年载脂蛋白 E、载脂蛋白 B基因多态性对冠心病的遗传易感性。方法　采用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 ( PCR- RFL P)技术 ,对 15 2名健康汉族大学生 (冠心病家族史阳性者 67人 ,阴性者 85人 )的 apo E、apo BXba I、apo B3 ' VNTR基因型进行分析。结果　阳性组的 e4、x+ 、VNTR- B( HVE>3 8)等位基因频率显著高于阴性组 ( P<0 .0 5 ) ,且与血 TC、L DL - C、apo B10 0水平升高有显著相关 ( P<0 .0 5 )。结论　 apo E的 e4、apo BXba I的 x+ 、apo B3 ' VNTR的 VNTR- B可能为冠心病的重要遗传标记     

对氧磷酯酶-1与老年人2型糖尿病关系的研究

目的 探讨血清对氧磷酯酶-1(PON-1)活性、基因Glu-Arg192位多态性与老年人2型糖尿病(DM)及并发症的关系。方法 用酚乙酸酯为底物测定血清PON-1活性;用多聚酶链限制片段多态件反应技术对老年2型DM各组及健康老年人的PON-1基因192位进行基因分型。结果 老年单纯2型DM组PON-1活性为(98.32±21.68)kU/L,比健康对照组显著降低〔(13.29±19.74)kU/L,P<0.01〕,老年2型DM合并大、微血管病变组PON-1活性分别为(73.18±13.00)和(74.02±15.13)kU/L,比老年单纯2型DM组显著降低对(P<0.01)。重庆市老年居民PON-1基因192位A、B等位基因频率在健康对照组为0.44、0.56,老年人单纯2型DM组及大、微血管病变组为0.43、0.57,0.33、0.67和0.38、0.62,老年人2型DM各组与健康对照组比较PON-1、AA、AB、BB基因到分布差异无显著性。结论 PON-1活性在老年2型DM及共发血管病变患者中均显著降低,提示PON-1活性的降低参与了DM血管并发症的发生。重庆市老年居民PON-1基因192位B等位基因与老年人2型DM及2型DM并发血管病变无明显关系。     

对氧磷酯酶1与2型糖尿病肾病的关系

目的　探讨血清对氧磷酯酶 1(PON1)活性与 2型糖尿病 (DM)并发肾病 (DN)的关系。方法　血清PON1活性用酚乙酸酯为底物测定 ,血浆氧化型低密度脂蛋白 (ox LDL)用ELISA法测定 ,尿 2 4小时微量白蛋白用放免法测定。结果　 91例 2型DM患者的PON1活性比 5 4例正常对照显著降低〔(138.2± 31.4 )kU/Lvs (184 .1± 2 9.5 )kU/L ,P <0 .0 0 1〕 ,且 2型DM的Ⅰ组 (UAER <30mg/ 2 4h)、Ⅱ组 (UAER 30～ 30 0mg/ 2 4h)和Ⅲ组 (UAER >30 0mg/ 2 4h)相比 ,PON1活性依次显著下降〔(15 1.8± 2 4 .5 )kU/L ,(12 4 .5± 32 .8)kU/L ,(10 1.1± 36 .6 )kU/L ,P <0 .0 1〕 ,而ox LDL的浓度却依次显著升高〔(6 16 .2± 135 .7) μg/L ,(75 3.9± 132 .5 ) μg/L ,(875 .1± 15 3.2 ) μg/L ,P <0 .0 1〕。PON1活性与ox LDL的浓度呈高度负相关 (r =- 0 .83,P <0 .0 0 1) ,也与UAER呈负相关 (r =- 0 .2 8,P<0 .0 5 ) ,多元回归分析表明PON1活性是 2型DM并发DN的高度危险因素 (P <0 .0 1)。结论　PON1活性在 2型DM显著下降 ,且在并发DN的 2型DM患者下降更显著。PON1活性与ox LDL呈负相关。PON1活性降低是 2型DM并发DN的高度危险因素     

血管发生抑制因子 restin的克隆表达及其抗血管活性的初步研究

目的：克隆人血管发生抑制因子restin(hRs)，在E.coli中融合表达，并测定其抗血管活性。方法：用RT-PCR法从中国人胎盘组织中扩增hRs基因，重组人pGEM-T载体中并测定鉴定，构建原核表达载体pGEX-hRS，表达融合蛋白GST-hRS。融合蛋白经亲和纯化及凝血酶切后，采用鸡胚绒毛膜尿囊膜试验检测其抗血管生成活性。结果：RT-PCR产物为564bp，测序结果与Genbank中胶原XV(COL15A1)的C端序列一致，但在21位（TCT→TCG）引起丝氨酸的同义突变，82位（ACA→TCA）引起丝氨酸突变为苏氨酸。诱导表达的人GST-hRS融合蛋白经凝血酶切后，分子量为20kD，具有抗血管生成活性。结论：hRS的成功克隆、表达为抗血管生成治疗实体瘤的研究奠定了实验基础 。     

华蟾毒精靶向KATNB1抑制肿瘤细胞微管形成和有丝分裂

华蟾素是临床广泛应用的抗肿瘤中药,但其抗肿瘤分子机制尚未完全清楚。本研究旨在阐明华蟾素活性成分华蟾毒精(cinobufagin, CBG)抑制肿瘤细胞有丝分裂的靶标及分子机制。应用碘化丙啶(PI) DNA染色法分析CBG对肿瘤细胞周期的作用;通过胸苷同步化细胞至有丝分裂时期,微管及中心粒染色法表征CBG对肿瘤细胞有丝分裂的影响;采用体外微管聚合实验、微管单体/聚体分离实验及微管α-tubulin荧光标记法从分子和细胞水平评价CBG对微管聚合的作用;通过基因编辑技术CRISPR/Cas9建立微管切割蛋白Katanin调节亚基B1 (KATNB1)敲除的肿瘤细胞, CCK-8法考察CBG对野生型和敲除细胞抑制作用的差异;利用化学生物学的技术方法研究CBG和KATNB1的结合;采用Western blot及实时定量PCR检测CBG对KATNB1蛋白和mRNA的调控。结果发现, CBG阻滞结肠癌HCT116细胞周期于G2/M期;诱导中心粒异常增生,抑制肿瘤细胞的有丝分裂;体内外的微管形成实验表明CBG显著抑制微管蛋白聚合; KATNB1敲除后缓解了CBG对HCT116细胞的抑制作用,表明KAT...     

PTEN抑 最新进展

PTEN特异性地使磷脂酰肌醇－3,4,5－三磷酸[PtdIns(3,4,50P3]去磷酸化,拮抗了PI3K／AKT信号系统,具有调节细胞生长、增殖、迁移等多种效应,在多种肿瘤中发现有PTEN的缺失或突变,最近关于PTEN的抑癌机制取得重要进展,为进一步PTEN在肿瘤发生中的作用奠定了基础。