hTERTp/TK/pGL3靶向抑制端粒酶活性及其对鼻咽癌干细胞的杀伤作用

［摘 要］ 目的:探讨hTERTp/TK/pGL3载体靶向抑制端粒酶活性及其杀灭鼻咽癌CD133+干细胞的作用机制。方法:将已构建的hTERTp/TK/pGL3载体及其对照处理因素（CMV/TK/pGL3和TK/pGL3载体）转染至鼻咽癌CD133+干细胞、CD133－肿瘤细胞、人脐静脉内皮细胞(ECV)(对照组)和鼻咽癌SUNE未分选细胞中,采用Stretch PCR 法检测4种细胞端粒酶活性改变。MTT法测定CD133+干细胞和ECV细胞存活率。结果:CD133+鼻咽癌干细胞体外培养7 d后细胞逐渐增多,CD133+鼻咽癌干细胞体内成瘤实验阳性。CD133+鼻咽癌干细胞转染hTERTp/TK/pGL3或CMV/TK/pGL3后端粒酶活性降低;而ECV细胞端粒酶为阴性表达;CD133+鼻咽癌干细胞分别转染TK/pGL3、CMV/TK/pGL3和hTERTp/TK/pGL3后细胞存活率平均为（87.4±0.4）％、（20.5±0.4）％和（27.9±0.2）％,ECV对照细胞组转染TK/pGL3、CMV/TK/pGL3和hTERTp/TK/pGL3后细胞存活率平均为（90.7±0.1）％、（18.1±0.2）％和（86.2±0.1）％,hTERTp/TK/pGL3杀灭鼻咽癌CD133+干细胞效率明显高于ECV细胞组（P<0.01）。结论:hTERTp/TK/pGL3载体可以通过下调端粒酶活性靶向抑制端粒酶阳性的鼻咽癌CD133+干细胞。     

C-TIRADS联合超声造影评估桥本甲状腺炎4类结节

目的 评估甲状腺结节超声恶性危险分层中国指南（Chinese-thyroid imaging reporting and data system,C-TIRADS）联合超声造影（contrast-enhanced ultrasound,CEUS）评估桥本甲状腺炎4类结节。方法 回顾性分析2022年6月至12月于益阳市中心医院就诊的79例桥本甲状腺炎患者的120个C-TIRADS 4类甲状腺结节资料。CEUS检查时如结节表现可疑的1种或多种良/恶性特征,均采取降/升一级的处理,以最终手术病理结果为金标准。绘制受试者操作特征曲线（receiver operating characteristic curve,ROC曲线）,比较诊断效能。结果 CEUS后再次分级的C-TIRADS诊断甲状腺结节良恶性的敏感度、特异性和准确性分别为93.0%、87.8%和90.8%（P<0.05）。ROC曲线下面积分别为0.811和0.904（P<0.05）。结论 C-TIRADS联合CEUS评估桥本甲状腺炎4类结节具有更好的诊断效能。     

ARFI评价急性药物性肝损伤的临床研究

目的探讨声脉冲辐射力成像(ARFI)在急性药物性肝损伤中的应用价值。方法随机选取89例急性药物性肝损伤患者(肝损伤组)及60名健康体检者(健康对照组)作为研究对象,均行超声造影检查及ARFI检查,并检测肝功能指标。比较肝损伤组及健康对照组肝左叶、肝右前叶、肝右后叶剪切波速度。将急性药物性肝损伤患者分为3个亚组,比较3亚组剪切波速度及肝功能指标。采用Spearman相关系数分析剪切波速度与肝功能指标相关性。结果肝损伤组肝左叶、肝右前叶、肝右后叶剪切波速度高于健康对照组,组间比较差异有统计学意义(P0.05);肝左叶、肝右前叶、肝右后叶剪切波速度组内比较,差异无统计学意义(P0.05)。急性药物性肝损伤3个亚组剪切波速度及肝功能指标比较,差异均有统计学意义(P0.05),其中剪切波速度从低到高依次为:C组B组A组;ALT、AST、GGT、ALP、Alb从低到高依次为:C组B组A组;GLB从低到高依次为:A组B组C组。剪切波速度与ALT、AST、GGT、ALP、Alb呈正相关(r值分别为0.518、0.309、0.715、0.474、0.691,P0.05),与GLB呈负相关(r=-0.412,P0.05),随着肝功能损伤由轻到重的转变,剪切波速度相应升高。ARFI对急性药物性肝损伤灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、诊断准率分别为89.9%(80/89)、90.0%(54/60)、90.3%(80/86)、85.7%(54/63)、89.9%(134/149)。结论 AFRI有助于急性药物性肝损伤的鉴别诊断,且有助于其病理分型,值得临床上推广应用。     

Lenti-TK介导间充质干细胞对鼻咽癌CD133+干细胞的靶向迁移及杀伤作用

目的： 观察慢病毒-胸苷激酶（lentivirus-thymidine kinase,Lenti-TK)/间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC）对鼻咽癌CD133+干细胞的靶向迁移及杀伤作用。 方法： 构建包含TK基因的重组慢病毒表达载体Lenti-TK,感染MSC后得到Lenti-TK-MSC,RT-PCR及Western blotting检测Lenti-TK-MSC中HA-TK的表达。免疫磁珠法从鼻咽癌5-8F细胞中分选CD133+细胞;Transwell小室迁移实验检测Lenti-TK-MSC对CD133+5-8F细胞的趋向性;Lenti-TK-MSC联合更昔洛韦（ganciclovir,Lenti-TK-MSC/GCV）与CD133+5-8F细胞共培养,CCK-8试剂盒检测其对细胞的杀伤作用和旁观者效应。 结果： 成功构建重组慢病毒载体Lenti-TK,其滴度为1×108UT/ml,Lenti-TK（MOI=50）感染MSC 72 h时,感染效率达（95.1±01）%。Lenti-TK-MSC迁移至CD133+5-8F细胞组的细胞数明显多于CD133-5-8F细胞组、未分选5-8F细胞组\[（83.0±8.7） vs （29.6±53）、（38.3±5.2）,P=0.000\]。Lenti-TK-MSC/GCV处理组与单独GCV处理组、Lenti-TK-MSC/GCV条件培养液（即Lenti-TK-MSC加入1 mg/L GCV培养48 h的培养上清）处理组相比,CD133+5-8F细胞的存活率明显降低\[（37.2±2.3）% vs （98.5±3.1）%、（83.8±34）%,P=0.000\]。Lenti-TK-MSC数量达到混合细胞总数（Lenti-TK-MSC和CD133+5-8F细胞)的20%时,CD133+5-8F细胞存活率为（68.2±2.3）%,表现出明显的旁观者杀伤效应。 结论： Lenti-TK感染后MSC对鼻咽癌CD133+5-8F细胞具有靶向迁移及杀伤作用。     

Nod1与Nod2模式识别受体在鼻息肉发病中的作用

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域(nucleotide binding oligomerization do main,NOD)模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)Nod1、Nod2在鼻息肉发病中的作用。方法分别采用免疫组织化学及Western-blot检测Nod1、Nod2蛋白在20例鼻息肉组织中的表达,同时以19例正常下鼻甲黏膜作对照;ELISA检测鼻息肉组织和下鼻甲黏膜组织中白细胞介素4(IL-4)的含量。结果 Western-blot结果提示:鼻息肉组织Nod1表达高于对照组,两组Nod2无明显差异。免疫组织化学示两种模式受体在两组中均有表达,主要表达于黏膜上皮细胞、腺体上皮、炎性细胞(如嗜酸性粒细胞)中,但Nod1在鼻息肉中表达强于对照组(P<0.05),Nod2在两组中的表达差异无统计学意义。ELISA检测示鼻息肉组织匀浆液IL-4高于正常下鼻甲黏膜组织,(P<0.05)。结论在鼻息肉组织中,Nod1表达增强,说明Nod1有可能参与鼻息肉的发病。     

鼻内镜口腔途径选择性切除儿童肥大腺样体的手术技巧及疗效分析

目的 探讨鼻内镜下经口腔电动吸切选择性切除儿童肥大腺样体手术方式及疗效分析.方法 对有多种典型临床症状(包括打鼾、鼻塞、流脓涕、听力下降、口颌面部及生长发育畸形等)的56例腺样体肥大患儿,全麻下开口器撑开口腔并拉起软腭,经口腔插入70°鼻内镜显露鼻咽部肥大的腺样体,采用弯头正反向切割吸引刀头,明视下选择性吸切阻挡后鼻孔区的肥大腺样体部分,其余腺体组织保留,并与传统的盲刮法(79例)及鼻内镜下全切除法(25例)进行疗效比较.结果 本组全部患儿术后1～3天打鼾症状基本消失,未见术后并发症.手术创伤轻,出血少,患儿恢复快,经随访1～6个月,鼻部阻塞症状消失及明显改善49例(占87.5％),13例有耳部症状者治愈及明显好转者9例(占69.2％).而对照组盲刮法鼻症状改善有效率(62％),术后反应较重,出血较多;全切法有效率(84％),出血较多,术后反应较重.结论 采用鼻内镜经口明视下选择性吸切阻挡后鼻孔区的肥大腺样体部分,具有手术在明视下操作,术腔较宽敞、安全有效、微创、出血少及术后恢复快等优点,在众多的手术方法中是一种较为理想的选择术式.     

散风通窍滴丸辅助治疗成人过敏性鼻炎的疗效及对外周血生物标志物表达的影响

目的 观察散风通窍滴丸辅助治疗成人过敏性鼻炎(allergic rhinitis, AR)的疗效及对外周血circ＿0070934/miR-199a-5p/MGAT3表达的影响。方法 纳入平煤神马医疗集团总医院2020年10月—2022年10月收治的108例AR患者,按随机数字表法分为观察组、对照组各54例。对照组予以布地奈德鼻喷雾剂治疗,观察组采用布地奈德鼻喷雾剂联合散风通窍滴丸治疗,连续治疗4周后,比较两组患者临床症状、免疫指标[嗜酸性粒细胞(EOS)、血清免疫球蛋白E(IgE)]、外周血circ＿0070934、miR-199a-5p、MGAT3表达、临床疗效及生活质量[鼻结膜炎生存质量调查问卷精简版(MINI-RQLQ)]。结果 治疗后两组患者鼻痒、鼻塞、喷嚏、鼻涕症状积分均较治疗前下降(P<0.05),且观察组各症状积分较对照组低(P<0.05)。治疗后,两组患者EOS计数、血清IgE均较治疗前下降(P<0.05),且观察组EOS计数、血清IgE均较对照组低(P<0.05)。治疗后,两组circ＿0070934、MGAT3表达均较治疗前升高(P<...     

Nods样模式识别受体在鼻息肉组织中的表达及意义

目的：探讨Nods（核苷酸结合寡聚化结构域,Nod Like receptors）样模式识别受体（PRR）在鼻息肉组织中的表达及作用。方法：分别采用实时定量RT—PCR、Western—Blot及免疫组织化学检测Nodl、Nod2、Nalp3mRNA及蛋白在鼻息肉组织中的表达（以正常下鼻甲黏膜作对照）。结果：实时定量RT—PCR显示,鼻息肉组织Nodl、Nod2、Nalp3mRNA表达与正常对照下鼻甲黏膜比较无显著差异。Western-Blot结果提示：鼻息肉组织Nodl表达高于对照组,两组Nod2、Nalp3无明显差异。免疫组织化学表明,三种模式受体在两组中均有表达,主要表达于上皮细胞、腺体上皮、炎性细胞（如嗜酸粒细胞）,但Nodl及Nalp3在鼻息肉中表达强于对照组（P〈0．05）,Nod2蛋白表达无显著差异。结论：在鼻息肉组织中,Nodl、Nod2及Nalp3均有表达,其中Nodl、Nalp3的表达高于对照组,说明Nodl、Nalp3有可能参与鼻息肉的发病。