自身免疫肝病患者抗中性粒细胞胞浆抗体的检测及临床意义

探讨抗中性粒细胞胞浆抗体(anti-neutrophil cytoplastic antibodies,ANCA)对自身免疫肝病的临床意义。应用间接免疫荧光法和斑点法检测149例自身免疫性肝病患者[自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)患者57例,原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者42例,不明原因肝损患者50例]的ANCA和抗可提取性核抗原抗体(extract-able nuclear antigen,ENA),进而用ELISA法分析60例ANCA阳性的自身免疫肝病患者的ANCA抗原谱。以200例健康献血员为正常对照。结果ANCA在AIH、PBC、不明原因肝损中的阳性率分别为81%、40%、30%,其中非典型性pANCA的阳性率依次为70%、40%、28%。AIH组与PBC组及AIH组与不明原因肝损组间非典型性pANCA的阳性率有显著性差异(P<0.01),但PBC组与不明原因肝损组间差异不显著(P>0.05)。各疾病组ANCA抗原谱如下:AIH组中,乳铁蛋白3%阳性,MPO 11%阳性,组织蛋白酶G和BPI的阳性率分别为11%、17%;PBC组中,弹性蛋白酶和组织蛋白酶G阳性率均为5%,BPI的阳性率为16%;不明原因肝损组中,BPI阳性率为17%。大多数自身免疫性肝病患者非典型性pANCA为阳性(28%~70%),且伴有特征性自身抗体。注重非典型性pANCA的检测对明确诊断自身免疫肝病及其分类有很大的帮助。     

如何更好地保证自身抗体的临床应用质量

自身抗体对自身免疫病(AIDs)具有重要的临床价值,是临床医生诊治AIDs的重要手段,但自身抗体及其检测技术很多固有的局限性使得自身抗体的质量控制相对比较薄弱。面对临床的迫切需要和自身抗体本身的缺点,检验人员该如何破解矛盾,最大程度地保证自身抗体的临床应用质量?该文围绕这一问题,进行了比较系统、深入的阐述,旨在为从事自身抗体检测的检验人员提供一些借鉴。     

丙泊酚对呼吸机所致肺损伤大鼠的保护作用及机制

目的探索丙泊酚对呼吸机所致肺损伤(VILI)模型大鼠的保护作用,并分析其调控机制。方法利用大潮气量通气建立肺损伤模型,将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和丙泊酚组,每组10只。检测大鼠肺组织湿/干重比(W/D)、大鼠肺组织形态学变化情况、大鼠肺组织中TNF-α和IL-6含量以及JAK、STAT3 mRNA和蛋白水平,并比较3组大鼠肺组织中SOD、MDA的含量。结果与假手术组相比,模型组W/D明显较高,肺组织病理学形态较差,肺组织中TNF-α和IL-6含量明显较高,JAK、STAT3 mRNA水平较高,p-JAK、p-STAT3蛋白水平较高,MDA的含量较高,而SOD的含量较低,以上差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,丙泊酚组W/D明显较低,肺组织形态学得到改善,肺组织中TNF-α和IL-6含量明显较低,JAK、STAT3 mRNA水平较低,p-JAK、p-STAT3蛋白水平较低,MDA的含量较低,SOD的含量较高,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丙泊酚对VILI模型大鼠具有减弱炎症反应的作用,其机制可能与抑制JAK/STAT3信号通路有关。     

人TACI-linker-BR3双受体融合基因真核表达载体构建及其在COS-7细胞中的表达

目的:构建人双受体融合基因真核表达载体--pcDNA3.1( )-TACI-linker-BR3-IgGFc,观察其在COS-7细胞中的表达.方法:应用基因工程技术构建重组载体,脂质体转染COS-7细胞,通过Western印迹、ELISA以及免疫组化方法,检测目的蛋白的表达及其与BAFF、APRIL蛋白相互作用情况.结果:融合基因在瞬时转染的真核细胞中获得表达,并分泌至上清,转染效率能达到48%,融合蛋白能与BAFF、APRIL蛋白有效结合而且融合蛋白中分子标签IgGFc未影响双受体融合蛋白的结构及其生物学活性.结论:人TACI-linker-BR3双受体基因与IgGFc融合基因载体构建成功,表达的融合蛋白具有生物学活性,为进一步探讨SLE等自身免疫疾病的发病机制和生物学治疗方法奠定了基础.     

RNA干扰SOCS1对线粒体M2蛋白作用树突状细胞功能的影响

目的探讨细胞因子信号转导抑制分子1(SOCS1)干扰后,线粒体M2蛋白对外周血单个核细胞(PB-MC)来源的树突状细胞(DC)功能的影响。方法诱导和培养健康人PBMC来源DC,小干扰RNA(siRNA)抑制SOCS1的表达,用不同浓度的M2蛋白刺激DC,用流式细胞术(FCM)分析DC表型CD83、CD86的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测DC培养上清液中白细胞介素10(IL-10)和白细胞介素12(IL-12)的变化。结果DC在M2蛋白浓度为70μg/mL刺激24 h,35μg/mL刺激24、48和72 h时,与对照组比较,CD83和CD86的表达率以及IL-10和IL-12的水平均明显升高(P<0.05)。M2蛋白刺激SOCS1干扰后的DC,在不同刺激浓度和作用时间,CD83和CD86表达率以及IL-12水平与单纯M2蛋白刺激组相比均明显升高(P<0.05),而IL-10水平在两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DC在接受高浓度的M2蛋白刺激后,其成熟度、抗原递呈和Th1的极化能力增强;抑制SOCS1的表达,M2蛋白可进一步促进DC功能的增强,可能导致自身耐受的破坏。     

B淋巴细胞活化因子特异的单链DNA适体的人工进化

目的: 进化筛选与B淋巴细胞活化因子（B cell activating factor belonging to the TNF family，BAFF）特异结合的单链DNA适体，鉴定其结合力。方法:应用指数方式富集的配体系统进化（systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX）技术，将随机序列寡核     

系统性红斑狼疮的分子标志物研究进展

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的实验室诊断和病情判断主要依赖于抗核抗体、抗双链DNA(ds DNA)、抗Sm、抗磷脂抗体等自身抗体。但这些自身抗体存在敏感性或特异性差的缺陷,大大限制其临床价值。因此,迫切需要研发一些新技术及新标志物来解决这些问题。随着分子生物学技术的迅速发展,大量新的分子标志物被发现并鉴定,有望为提升SLE临床诊疗水平提供新契机。该文概括性综述了近年来在SLE中新发现的各种分子标志物,包括基因转录、变异谱、表观遗传谱、游离基因分子谱、胞外颗粒表达谱等,并对这些分子标志物的应用前景和存在的问题进行讨论。     

Toll样受体4在强直性脊柱炎患者外周血白细胞中的表达及临床意义初探

目的：探讨Toll样受体4（Toll-likereceptor 4,TLR4）在不同人群外周血白细胞的差异表达及其在强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,As）中的意义。方法：应用流式细胞术检测60例AS患者及40例健康对照外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞TLR4的表达。结果：TLR4在外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞均有表达,以单核细胞表达为主;HLA-B27阳性和阴性AS患者外周血3种细胞TLR4的阳性表达率均明显高于对照组（P〈0．001）,但两者之间并无显著差异。结论：TLR4主要表达于外周血单核细胞,但AS患者外周血3种细胞表达均上调,这种上调与HLA-B27阳性与否无关,提示TLR4信号通路的异常与AS的发病相关。     

抗线粒体抗体在原发性胆汁性肝硬化筛查中的应用

目的探讨临床医生对抗线粒体抗体(AMA)检测的应用情况。方法回顾性分析上海长征医院2011年1月至2015年8月259例AMA阳性患者信息,并在临床医生提出AMA检测要求组与未提出检测要求组之间进行比较。结果 259例AMA阳性患者中,临床医生提出AMA检测要求的181例(占70%),没有提出AMA检测要求的78例(占30%);确诊为原发性胆汁性肝硬化(PBC)的204例(占80%),未确诊PBC的55例(占20%)。临床医生提出AMA检测要求组感染科和消化科送检比例和PBC确诊比例均显著高于未提出AMA检测要求组(P0.01)。在临床医生提出AMA检测要求组中,送检例数由多到少的科室依次为消化科、感染科、肝移植科、风湿免疫科和其他科室;而在临床医生未提出AMA检测要求组中,送检例数由多到少的科室依次为风湿免疫科、肾内科、神经内科、感染科、消化科和其他科室。在临床医生提出AMA检测要求组中,未确诊PBC 18例,未确诊原因包括已诊断为乙型肝炎肝硬化7例,患者不同意肝活检6例,患者失联5例。在临床医生未提出AMA检测要求组中,未确诊PBC 37例,未确诊原因包括实验诊断科未告知临床医生AMA阳性16例,患者不同意肝活检12例,患者失联6例,实验诊断科告知临床医生但后者未安排患者做进一步检查3例。结论消化科和感染科的临床医生对PBC的认识较为深入,较少出现忽视AMA检测的情况;但风湿免疫科、肾内科和神经内科的临床医生对PBC常常忽视AMA的检测,而这些科室AMA阳性并不罕见。     

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在强直性脊柱炎患者血清中的表达及临床意义

目的探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(sTRAIL)在强直性脊柱炎(AS)患者和健康个体血清中的表达及其临床意义。方法应用ELISA法检测60例AS患者和30例健康对照血清sTRAIL的浓度;应用ESR自动化分析仪和特定蛋白分析仪分别测定红细胞沉降率(ESR)和血浆C反应蛋白(CRP);分析HLA-B27阳性和阴性的AS患者血清sTRAIL水平与ESR、CRP的相关性。结果AS患者血清sTRAIL浓度明显高于对照组(P<0.01),且HLA-B27阳性和阴性AS患者均明显高于对照组(P<0.01),但两者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。在HLA-B27阳性AS患者中,血清sTRAIL水平与CRP呈明显的相关性而与ESR的相关性并不明显;而HLA-B27阴性AS患者血清sTRAIL与ESR及CRP均无显著相关性。结论血清sTRAIL水平在AS中明显上调,与HLA-B27阳性与否无显著相关性。AS患者血清sTRAIL与ESR无相关性,而与CRP是否具有显著相关性受到HLA-B27阳性与否的影响。总之,血清sTRAIL水平的改变可能与AS的发生和发展密切相关。