一种快速简便的缺失突变方法

为了构建能表达稳定的、不易降解的ＴＭ－ＴＮＦ突变体（ＴＭ－ＴＮＦｍ）的基因，本文用改良的Ｓ－ＰＣＲ和ＯＥ－ＰＣＲ两种定位突变技术，成功地构建了缺失３６个碱基的ｐＢＳＫ－ＴＭ－ＴＮＦ突变重组体。与ＯＥ－ＰＣＲ技术（用两对引物进行两次ＰＣＲ反应）相比较，Ｓ－ＰＣＲ技术（用一对引物做一次ＰＣＲ反应）具有快速、经济、简便等优点，但其突变率较ＯＥ－ＰＣＲ低。     

膜相关型肿瘤坏死因子—α

膜相关型ＴＮＦ－α系一以跨膜方式镶嵌在细胞膜上，分子量为２６ＫＤ的蛋白质，其杀瘤作用机制不同于１７ＫＤ分泌型ＴＮＦ，主要通过效应细胞－靶细胞直接接触发挥局部细胞毒作用，且杀瘤谱广。因此深入，细致研究这类细胞因子的作用特点，探索其分子生物学制备方法，将为肿瘤治疗开辟新的途径。     

膜结合型淋巴毒素及其LT-β亚基

淋巴毒素(LT)存在分泌型及膜结合型两种表达形式。膜型LT是由分泌型亚单位LT-α通过跨膜亚单位LT-β连接在细胞膜上,构成一个异源三聚体结构。LT-β亚基为TNF配体超家族成员之一,其相应的特异性受体为TNF受体相关蛋白(TNFRrp),也称作LT-β受体。膜型LT可能具有独特的生物学功能,特别是对正常淋巴结的发育形成可能起着重要作用。     

TNF-α的合成分泌机制不同于一般的分泌型蛋白

目的 拟借助微粒体膜和体外转录翻译系统来研究分泌型ＴＮＦα（Ｓ－ＴＮＦ－α）的产生机制及Ｓ－ＴＮＦ－α和跨模型ＴＮＦα（ＴＭ－ＴＮＦ－α）的关系。方法 首先将分子量为１７×１０＾３Ｓ－ＴＮＦ（不含编码ＴＮＦ信号肽的基因）、２６×１０＾３ＴＭ－ＴＮＦ（含信号肽基因）和１７×１０＾３Ｓ－ＴＮＦ突变体（Ｓ－ＴＮＦｍ,用ＩＬ－２信号肽密子转换ＴＮＦ信号肽序列）的全长ｃＤＮＡ片段分别亚克隆于含Ｔ７启动子的ｐ     

跨膜型TNF-α生物学活性的膜依赖性

跨膜型ＴＮＦ－α是激活的单核／巨噬细胞表达在胞膜上的完整蛋白分子。     

跨膜突变型TNF-α的基因构建及体外表达

目的：跨膜型ＴＮＦ－α易在某些蛋白酶的作用下转换下分泌型ＴＮＦ－α。拟用基因突变技术获得稳定表达的，不能转换成Ｓ－ＴＮＦ的ＴＭ－ＴＮＦ突变体。方法：ＲＴ－ＰＣＲ技术，从人外周血单细胞中扩增出编码ＴＭ－ＴＮＦ－α的全长ｃＤＮＡ序列并构建ｐＢＳＫ－ＴＮＦ－α重组体。以此为模板，借助改进的“一次重组ＰＣＲ”定位突变技术，造成ＴＭ－ＴＮＦ转换 为Ｓ－ＴＮＦ酶切位点的缺失，获得ＴＭ－ＴＮＦ突变重组体。     

膜相关型肿瘤坏死因子－α

膜相关型ＴＮＦ－α系一以跨膜方式镶嵌在细胞膜上、分子量为２６ＫＤ的蛋白质。其杀瘤作用机制不同于１７ＫＤ分泌型ＴＮＦ，主要通过效应细胞－靶细胞直接接触发挥局部细胞毒作用，且杀瘤谱广。因此深入、细致研究这类细胞因子的作用特点，探索其分子生物学制备方法，将为肿瘤治疗开辟新的途径。     

增强器官移植耐受性的新策略

当今,器官移植术已如此成熟,仅通过外科手术的改进已难以延长移植物存活时间,而免疫学领域的新进展则可能对改善移植术的疗效起关键作用。受者的免疫系统将移植器官视为“外来异物”,虽然从临床角度看,这种反应对机体不利,但借助同一机制,机体也能显示防御功能,从而有效地清除被病毒感染的细胞等。