异种VEGF融合蛋白疫苗对小鼠Lewis肺癌的抑制作用

目的:利用原核表达系统,构建异源血管内皮生长因子融合蛋白疫苗,研究该融合蛋白疫苗对小鼠Lewis肺癌肿瘤模型的抗血管生成主动免疫治疗效果.方法:将鸡VEGF基因克隆入pGEX-4T-2原核表达载体,经IPTG诱导融合蛋白表达,Ni-NTA纯化,透析复性,构建GST-cVEGF融合蛋白疫苗.将C57BL16J小鼠随机分为3组,GST-cVEGF疫苗组10只、cVEGF疫苗组10只、生理盐水组(NS) 10只.将各组样品与等体积弗氏佐剂混合,各组小鼠每只分别0、2、3周免疫100 μg GST-cVEGF融合蛋白疫苗、单纯cVEGF蛋白疫苗、生理盐水.接种Lewis肺癌细胞,观察肿瘤的生长情况和小鼠状态.接种肿瘤18 d后,处死小鼠,剥离肿瘤称重.检测小鼠血清中特异性抗VEGF抗体滴度.结果:GST-cVEGF疫苗组、cVEGF组、生理盐水组肿瘤均重分别为(1.55±0.534) g、(1.93±0.607) g、(2.87±0.642) g.GST-cVEGF疫苗组肿瘤重量明显小于生理盐水组(P<0.01).疫苗组血清产生抗VEGF抗体滴度为1:2000.结论:异种血管内皮生长因子基因重组融合蛋白疫苗可干扰机体对自身VEGF的免疫耐受,可产生较高水平的特异性抗VEGF抗体,并具有抑制小鼠Lewis肿瘤生长的效应.     

抗AFP抗体—蓖麻毒素A链偶联物对靶细胞AH66的体外杀伤效应

本文应用流式细胞仪(FACStar~(PIns))的荧光分析技术,去检测与比较羊抗大鼠甲胎蛋白抗体(αAFP)与蓖麻毒蛋白A链(RTA)偶联物(αAFP-RTA)、RTA及αAFP和BTA的混和物(αAFP+RTA)对大鼠腹水型肝癌细胞AH66的体外杀伤作用。其αAFP-RTA、RTA和αAFP+RTA的剂量均以RTA的克分子浓度计算,致死50％靶细胞的浓度(IC_(50))分别为6×10~(-9.6)mol/L、6×10~(-8.4)mol/L、6×10~(-8.2)mol/L。αAFP-RTA与RTA的IC_(50)之比为1:12,αAFP-RTA与αAFP+RTA的IC_(50)之比为1∶14。相当于αAFP-RTA中抗体量的αAFP对AH66细胞不显示杀伤作用。实验证明,αAFP-RTA有明显的导向杀伤靶细胞的效应。上述实验结果与以台盼蓝除外试验所获得的结果基本一致。     

表皮生长因子受体单克隆抗体对人肺腺癌细胞的生长抑制 …

观察表皮生长因子受体单克隆抗体对人肺癌细胞体外增殖的作用。探讨其在肺癌抗体生物治疗中的应用价值。方法 应用杂交瘤技术制备ＥＧＦＲ单在隆抗体并以噻唑蓝比色法检测ＥＧＦＲ单克隆抗体对人肺癌细胞体外增殖能力的影响。     

顺铂和血管内皮生长因子受体单抗对荷Lewis瘤小鼠联合治疗的实验 …

目的：观察血管内皮生子因子受体单抗和顺铂联合应用治疗荷Ｌｅｗｉｓ瘤小鼠的疗效。方法：将３２只Ｃ５７ＢＬ小鼠分成４组（对照组、顺铂组、血管内皮生长因子受体单抗组、血管内皮生长因子受体单抗联合顺铂组）,实验结束后分别处死荷Ｌｅｗｉｓ瘤小鼠,测量肿瘤的长、短径,称取瘤重,计算肿瘤体积、抑瘤率,对有肺转移瘤的小鼠进行计数并作肿瘤的病理检查。结果：血管内皮生长因子受体单抗联合顺铂组有明显的抑瘤作用,抑瘤率为     

影响免疫毒素杀瘤作用因素初探

免疫毒素对恶性肿瘤细胞的杀伤力受很多因素的影响。本文报道温度、药物作用时间及化疗药物对半乳糖结合点封闭式免疫毒素体外杀伤力的影响。结果表明:37℃、39℃或41℃水浴1小时,再培养47小时,温度对结合物杀伤力的影响很小(P>0.05),结合物的杀伤力与药物作用时间有关,37℃,10~(-9)mol/L 浓度时,24小时、48小时及72小时的杀伤率分别为17.2%、50.3%及53.5%,10~(-10)mol/L 浓度时分别为10.6%、16.9%及18.4%;化疗药物阿霉素及丝裂霉素 C 均能使该结合物的杀伤力提高10倍。本文还对温度、药物作用时间及化疗药物影响免疫毒素杀伤力的机制进行了讨论。     

cEGFR-rFc融合DNA疫苗抗小鼠黑素移植瘤的效果

目的:构建cEGFR-rFc融合DNA疫苗, 观察其对小鼠黑素移植瘤的抑制作用.方法:以异种同源鸡EGFR(chicken EGFR,cEGFR)膜外部分与兔疫球蛋白IgG的Fc段(rabbit IgG Fc,rFc)为基础构建真核表达载体pVAX1/cEGFR-rFc,脂质体法转染黑素瘤B16 细胞,免疫荧光法检测融合蛋白在B16细胞中的表达;以融合DNA疫苗免疫C57BL/6J小鼠,Western blotting法检测融合蛋白在小鼠体内的稳定表达.疫苗免疫小鼠接种B16黑素瘤细胞,14 d后处死部分小鼠,取出瘤体称重,计算抑瘤率;同时观察小鼠荷瘤后的生存率;ELASIA法检测DNA疫苗免疫小鼠血清抗EGFR抗体滴度,流式细胞仪测定小鼠脾细胞淋巴细胞亚群.结果:成功构建融合DNA疫苗pVAX1/ cEGFR-rFc,重组载体转染B16细胞后能检测到融合蛋白显著表达,疫苗免疫小鼠后能检测融合蛋白体内稳定表达.融合DNA疫苗能够延缓小鼠黑素移植瘤的生长,抑瘤率为54%(P<0.01);能延长荷瘤小鼠的生存期(疫苗组小鼠接种瘤细胞后30 d的生存率为40%);融合DNA疫苗诱发小鼠产生高滴度抗EGFR抗体(效价1∶1 000)和T细胞免疫(疫苗组小鼠脾脏CD8 T淋巴细胞数目显著增加, P<0.01).结论:cEGFR-rFc融合DNA疫苗能产生有效对抗黑素瘤B16细胞的免疫效应.     

树突状细胞与同源细胞因子诱导的杀伤细胞共培养细胞在肿瘤免疫治疗中的作用

目的观察树突状细胞(DC)与同源细胞因子诱导的杀伤 (CIK)细胞共培养后,共培养细胞(DC-CIK细胞)的表型、体外增殖活性和细胞毒活性的变化,并探讨CIK细胞在肿瘤治疗中的作用.方法 (1)提取3名健康献血者的外周血单个核细胞(PBMC),常规诱导出DC与CIK细胞后,将其共培养,动态观察CIK细胞和DC-CIK细胞增殖活性和表型变化;并用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定其体外细胞毒活性;(2)80只BALB/c裸鼠随机分为2组,分别在前肢腋下接种A549肺腺癌细胞和BEL-7404肝癌细胞.10 d后分别选择荷A549和BEL-7404瘤大小相似的裸鼠各30只,全部一次性腹腔注射化疗药物后,每组再随机分成3组.①单独化疗组;②CIK治疗组;③DC-CIK治疗组,每组10只. 单独化疗组注射化疗药物后不再进行任何处理,另2组分别于化疗后的第2、4、6、8、10天腹腔注射CIK细胞和DC-CIK细胞进行免疫治疗.结果 (1)经DC作用后的CIK细胞CD +3CD +56双阳性细胞和CD +8细胞的数量明显升高;(2)DC-CIK细胞的增殖速度明显快于同源CIK细胞,DC-CIK细胞的细胞毒活性远高于CIK细胞;(3)在肿瘤的治疗中,CIK细胞可提高化疗的效果.化疗后25 d,CIK治疗组和DC-CIK治疗组肿瘤受抑制的程度均明显大于单独化疗组,DC-CIK组大于CIK治疗组(P<0.05).结论 DC与CIK细胞共培养细胞是一种强于CIK细胞的免疫活性细胞,在肿瘤治疗中具有更广阔的应用前景.     

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对胃癌细胞杀伤作用

目的探讨树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对胃癌细胞的杀伤作用。方法采用胃癌患者自身血液中单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),经体外诱导分别扩增出DC和CIK细胞,二者共同培养后,利用MTT法检测DC细胞联合CIK细胞体外杀伤人胃癌细胞株(MNK-45、MNK-28、SG-7901)的活性。结果DC与CIK细胞共培养后得到的细胞群高表达CD3 CD56 ,平均值达到(56.74±7.63)%。通过彼此相互作用诱导出的细胞群体对胃癌细胞株MNK-45、MNK-28、SG-7901有杀伤作用,且杀伤活性随着效靶比的增加而增强。结论DC与CIK细胞共培养后有很强的增殖能力,对胃癌细胞具有杀伤活性,且其杀伤作用与胃癌细胞类型无相关性。