hMAM-EP调控HSV-TK腺病毒载体的构建及其对乳腺癌细胞的靶向杀伤

目的:分别构建人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)基因增强子和启动子(enhancer and promoter of hMAM,hMAM-EP)调控的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因和单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simple virus thymidine kinase,HSV-TK)自杀基因两种重组腺病毒载体,探讨hMAM-EP调控的HSV-TK在乳腺癌细胞特异性表达及其对乳腺癌的靶向治疗作用.方法:构建hMAM-EP-EGFP和hMAM-EP-TK重组质粒载体,将重组质粒目的基因转移到腺病毒骨架黏粒载体pAxcwit2,并转染HEK 293细胞获得重组腺病毒载体Ad-EP-EGFP和Ad-EP-TK.将Ad-EP-EGFP感染乳腺癌细胞T-47D、ZR-75-30和鼻咽癌细胞5-8F,荧光显微镜观察EGFP的表达.将Ad-EP-TK感染T47D细胞,给予1、10、20、50 μg/ml前药更昔洛韦(ganciclovir,GCV),观察TK基因对乳腺癌细胞的特异杀伤作用.结果:成功构建hMAM-EP调控的重组腺病毒载体Ad-EP-EGFP和Ad-EP-TK.Ad-EP-EGFP感染后,乳腺癌T-47D细胞可见EGFP表达,但ZR-75-30细胞和5-SF细胞无表达.与未感染组或感染Ad-EP-EGFP组相比,Ad-EP-TK重组腺病毒联合GCV(50 μg/ml)组T-47D细胞存活率显著降低[(35.69±0.07)％vs (91.74±0.02)％,(87.69 ±0.11)％;P ＜0.05],且随GCV质量浓度的增加,T-47D细胞存活率逐渐下降,在MOI=100、GCV质量浓度分别为1、10、20、50 μg/ml条件下,细胞存活率分别为(94.34 ±0.04)％、(86.26 ±0.02)％、(66.51±0.09)％、(35.69±0.07)％.结论:hMAM-EP调控的HSV-TK自杀基因在乳腺癌T-47D细胞中特异性表达,Ad-EP-TK联合GCV可靶向杀伤乳腺癌T-47D细胞.     

钙池操纵性钙通道与细胞增殖关系的研究进展

Ca2+是维持细胞正常生理功能的重要离子,参与细胞信息传递并调控一系列生命过程。钙池操纵性钙通道(SOCC)是细胞膜钙通道的一种。许多细胞内Ca2+主要通过SOCC机制影响正常细胞和肿瘤细胞的生长增殖。不同类型的细胞,SOCC通道相关蛋白的表达量及其相互作用存在差异,从而影响细胞内Ca2+浓度,造成细胞的增殖、凋亡和迁移等生物学功能的改变。