抗人CD20单克隆抗体诱导Daudi细胞凋亡的功能研究

目的　观察由基因重组抗原制备的抗人CD2 0单克隆抗体 (CD2 0 McAb) 1- 2 8对B淋巴瘤细胞的促凋亡作用 ,并探讨其作用机理。方法　利用流式细胞术测定所获 1- 2 8单抗对标准CD2 0 FITC单抗的竞争抑制作用及对胞内游离钙的影响 ;通过电镜观察其诱导Daudi细胞凋亡后形态上的改变 ,免疫印迹实验显示Daudi细胞凋亡后功能上的变化。结果　 1- 2 8能明显竞争标准CD2 0 FITC单抗与Daudi细胞表面CD2 0分子的结合。电镜结果证实了 1- 2 8能够促进Daudi细胞发生凋亡的结论 ;实验结果显示Daudi细胞与 1- 2 8作用后胞内游离钙浓度明显升高 (P <0 .0 5 ) ,细胞内Bcl 2蛋白和caspase酶原的表达量下降 ,而Bax蛋白和caspase酶原降解的活性产物表达增加。结论　 1- 2 8能竞争结合Daudi细胞表面的CD2 0分子并诱导其发生凋亡     

单克隆抗体亲和柱纯化尿激酶的研究

尿激酶是一种纤溶酶原激活剂,由肾脏合成并释放到尿中。临床上用于治疗血栓,商品酶是从大量人尿中提取,纯化方法复杂,不易得到纯品。抗尿激酶单克隆抗体亲和柱有可能简单而有效地纯化尿激酶,为此我们采用杂交瘤技术制备了七个分泌抗尿激酶单克隆抗体的杂交瘤。它们分泌的单克隆抗体分别命名为S_(31)、S_(26)、N_(14)、N_(17-2)、N_(30)、N_(34)和N_(36)。     

CD3AK细胞过继免疫治疗的实验研究

目的: 分析抗CD3分子的单克隆抗体 (mAb)yCD3的免疫学特性和生物学活性, 观察其激活的免疫活性细胞CD3AK体外及动物体内的抑瘤作用。方法: 用流式细胞术(FCM)测定yCD3的特异性, 以及CD3AK细胞的免疫表型和产生细胞因子的情况。用 3H -TdR法测定yCD3对淋巴细胞转化的作用; 乳酸脱氢酶法 (LDH)测定CD3AK细胞的体外细胞毒活性。建立荷瘤小鼠模型, 观察静脉注射CD3AK细胞后肿瘤生长的情况、转移灶数量和小鼠存活天数。结果: yCD3与T细胞呈特异性反应, 5μgyCD3可竞争抑制 70%的标准抗CD3抗体与细胞表面CD3分子的结合。yCD3刺激外周血淋巴细胞增殖的有效浓度为 8μg/L, 并与IL- 2、抗CD28抗体有协同作用。活化的CD3AK细胞中CD3 、CD8 和CD25 细胞增多; 产生IL- 2和IFN γ的CD3 细胞均有不同程度的增加, 在抗CD28抗体协同刺激下分别增加 3. 29和 2. 47倍。当效靶细胞比为 80∶1时, CD3AK细胞对体外肿瘤细胞杀伤的百分率为 57. 54%。分组观察荷瘤动物, CD3AK细胞治疗组的抑瘤率为 33. 17%, 对小鼠肿瘤肺转移的抑制率为39. 70%, 与LAK细胞联合治疗的疗效更显著。结论: yCD3可活化T细胞, 诱导的CD3AK细胞在体外及动物体内显示抑制肿瘤的作用, 在临床抗肿瘤过继性免疫治疗中具有重要意义。     

分泌抗人IgA单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

利用常规杂交瘤技术制备了一株抗人IgA杂交瘤PA_(229) ELISA结果表明,它分泌的抗体与人IgA有特异性反应,而与其它免疫球蛋白重、轻链无交叉反应,为小鼠IgG_1亚类。免疫转印结果只显示针对IgAα链的一条电泳带。用改良ELISA法测得PA_(229)的亲和常数为1.33×10~8L/mol。     

蓖麻毒素快速ELISA检测法的建立

目的:建立蓖麻毒素快速ELISA检测方法。方法:从8株抗蓖麻毒素的杂交瘤细胞中,筛选亲和力较高的单克隆抗体,用Westernblot和ELISA鉴定、ProteinA纯化、HRP标记,经交叉配伍筛选最佳的抗体组合。结果:建立了蓖麻毒素的快速ELISA检测方法,对蓖麻毒素的最低检出浓度为175ng/L,目视检测最低浓度为625ng/L,整个实验不需仪器可在40min内完成检测。结论:蓖麻毒素快速ELISA检测法为蓖麻毒素生物战剂的快速侦检提供了有效手段。     

FTY720介导的淋巴细胞归巢作用对外周淋巴细胞的影响

FTY720是由ISP-I衍生而来的一类新型免疫抑制剂。近年来的研究显示，FTY720在器官移植排斥以及自身免疫性疾病的一系列模型中显示出良好的治疗效果。研究表明，FTY720主要通过减少外周淋巴细胞数目发挥免疫抑制作用，但其具体作用机制仍存在争议。一部分观点认为FTY720是通过诱导外周淋巴细胞发生凋亡而引起白细胞数急剧下降；另一部分观点则认为FTY720是通过阻断淋巴细胞外流，即将淋巴细胞阻断在次级淋巴组织中，从而阻止活化的淋巴细胞迁移至移植器官或炎症组织部位，达到免疫抑制作用。本研究通过流式细胞技术以及荧光染料标记细胞跟踪技术证实：FTY720主要是通过促进外周循环中的淋巴细胞归巢而发挥其免疫抑制作用。     

抗人淋巴细胞E受体单克隆抗体的研究

用杂交瘤技术制备了一识别E受体单克隆抗体Tlla(JN20-5),间接免疫荧光分析表明Tlla(JN 20-5)与多种T细胞反应,并识别人外周血全部T细胞。此抗体对E玫瑰花生成有明显阻断作用,其相应抗原又与E受体一样对胰酶消化敏感。外周血单个核细胞经PHA刺激不同时间后与Tlla(JN 20-5)及另一CD_2抗体的反应百分率无明显增加,但反应强度增加。标准CD_2抗体Leu 5b、Anti-CCT_3都有阻断FITC标记Tlla(JN 20-5)的作用,说明Tlla(JN 20-5)为一识别E玫瑰花受体的单克隆抗体。     

抗人CD130胞内磷酸化酪氨酸单克隆抗体的制备与鉴定

目的获得一组抗人CD130胞内磷酸化酪氨酸单克隆抗体(mAb),用于研究IL-6介导的信号转导.方法按照CD130分子胞内N752-G766区的氨基酸序列,化学合成Y759磷酸化的15肽作为抗原,应用细胞融合法制备一组抗CD130磷酸化酪氨酸的mAb,并用ELISA、Western blot、免疫沉淀和免疫组化染色等技术,对这组mAb的性质和功能进行探讨.结果(1)通过细胞融合获得了4株稳定分泌抗CD130胞内Y759磷酸化mAb的杂交瘤细胞株(MIY1、MIY2、MIY3和MIY4),这组mAb仅对合成肽N752-G766产生特异性反应.(2)Western blot分析表明,这组mAb识别的靶分子的相对分子质量(Mt)为13×104～14×104的.用此组mAb免疫沉淀的Mr为13×104～14×104蛋白,可被抗CD130 mAb所识别;同时用抗CD130mAb免疫沉淀的13×104～14×104分子也可被这组mAb所识别;(3)进一步研究证实,这组mAb可识别由IL-6诱导的细胞内酪氨酸磷酸化的蛋白分子.结论成功地研制了抗人CD130胞内磷酸化酪氨酸的mAb.     

CD9类单克隆抗体的研制

本研究用血小板作为免疫原,免疫Balb/C小鼠,并按常规方法进行细胞融合.在筛选时,用血小板、幼稚B细胞(Nalm-6)及EB病毒转化后的人B淋巴母细胞系Raji细胞同时检测杂交瘤细胞上清,仅选与血小板及Nalm-6细胞反应,不与Raji细胞反应的抗体分泌杂交瘤细胞,建立了B9-1、B9-2、B9-3杂交瘤株.根据B9系列抗体与各种血液、造血细胞的反应特点,对通过对肾小球血管内皮及远端曲管上皮反应性及对其相应抗原分子量测定表明,B9系列抗体为CD9类抗体.本系列抗体与某些白血病细胞反应结果表明,与CD10类抗体配伍,可能形成更有效的针对普通型急性淋巴细胞白血病的导向药物.对B9系列抗体在血小板及白血病免疫分型中的研究前景也作了简要讨论.