VEGF及其受体研究新进展

血管内皮成长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)是1989年Ferrara等从牛垂体滤泡星状细胞的体外培养液中首先纯化出来并命名的。经测序和基因分析发现,与血管通透因子(Vascular permeability factor,VPF)为同一基因家族的同系。VEGF能通过其受体特意性作用于血管内皮细胞,强烈促进其增殖,促进血管形成,并有升高血管通透性的作用。因此,VEGF及其受体在心血管疾病、肿瘤和创伤修复等方面的应用引起了人们的极大关注,尤其是在抗肿瘤血管治疗方面有着广阔的应用前景。     

超声微泡介导微RNA治疗肝细胞癌的研究进展

基因治疗正逐渐成为肝细胞癌（HCC）、尤其晚期HCC的治疗方案。足够剂量的特定微RNA（miRNA）可抑制HCC细胞生长,超声微泡介导基因和药物递送治疗策略可促使miRNA于肿瘤区域靶向释放,从而达到治疗效果。本文对超声微泡介导miRNA治疗HCC研究进展进行综述。     

淋球菌MlaA重组蛋白表达及多克隆抗体的制备与应用

目的 原核表达、纯化淋球菌MlaA蛋白,制备并鉴定其多克隆抗体。方法 构建原核表达载体pET-28a-MlaA,转化BL21(DE3)大肠埃希菌,经IPTG诱导重组蛋白的表达。通过亲和层析法纯化目的蛋白,并进行Western blot鉴定。以纯化的重组蛋白作为抗原,与佐剂乳化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,3次免疫后取小鼠静脉血并分离血清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定抗体效价,用Western blot、间接免疫荧光试验(IFA)和流式细胞术(FCM)检测MlaA多克隆抗体的反应性和特异性。结果 Western blot显示,pET-28a-MlaA转化BL21后表达相对分子质量为35×10³的淋球菌MlaA重组蛋白。ELISA检测MlaA免疫小鼠血清抗体效价为1∶8 000～1∶32 000。Western blot、IFA和流式细胞术检测制备的抗体能识别淋球菌变性和非变性MlaA蛋白。结论 成功表达并纯化淋球菌MlaA重组蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,将制备的抗体血清作为一抗对淋球菌及其他不同类菌株进行Western Blot检测后发现,制备的多克隆...     

循环miRNA在胃癌早期诊断及预后中的研究进展

胃癌（ Gastric Cancer ）是最常见的恶性肿瘤之一,全球每年共有951000人被诊断为胃癌,其中723000人死亡,其发病率在所有恶性肿瘤中排第5位［1－2］。由于缺乏有效的临床早期诊断和治疗的肿瘤分子标志物,大多数胃癌患者确诊时已是中晚期,故而导致疗效不佳,死亡率依旧高居不下,患者的5年生存率仅有25％左右［3］。 MicroRNA是一类长度约为18～22 nt的非编码小RNA,它是生物体内重要的转录后调控子,参与细胞的多种生命过程,在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。 miRNA可以调控胃癌相关癌基因和抑癌基因的表达来影响胃癌的细胞增殖、凋亡、侵袭、转移和血管生成等过程［4］。 miRNA在组织、血清、血浆和其他各类体液中均能够稳定存在,被认为是潜在的肿瘤生物标记物［5］,对肿瘤的早期诊断和预后评估具有重要意义,本文介绍了循环miRNA在胃癌的早期诊断及预后判断的最新研究现状。     

蛋白酶激活受体-2对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响

Objective To investigate the effect of protease-activated receptor2 (PAR-2) on rat apoptotic cardiomyocytes underwent iachemia reperfusion (I/R) injury. Methods Healthy male Sprague-Dawley rats were randomly divided into five groups (n = 8 each): sham-operation group, I/R (ligating the left coronary artery for 30 minutes and followed by 120 minutes reperfusion) group and three SLIGRL-NH2 groups treated with intravenous PAR-2 agonist SLIGRL-NH2 at different doses (0.5,1,3 mg/kg) 5 minutes before reperfusion. Apoptic cardiomyocytes was detected by TUNEL staining and by DNA ladder on agarose gel electrophoresis. Bax and Bcl-2 expression in myocardium was analyzed by immunohistochemical technique. The mRNA expression of PAR-2 was determined by Real-time quantitative polymerase chain reaction(RT-PCR). Results (1) The apoptosis index and the expression of Bcl-2 and Bax were significantly increased in IR group and SLIGRL-NH2 groups than those in sham group (P<0. 05～0.01). (2) Compared with I/R group, the apoptosis index and the expression of Bax were significantly reduced while the expression of Bcl-2 and PAR-2 mRNA were significantly upregnlated by SLIGRL-NH2 in a dose-dependent manner. (3) DNA Agarose gel electrophoresis demonstrated that DNA ladder existed in I/R and 0.5 mg/kg SLIGRL-NH2 group, but not in 1,3 mg/kg SLIGRL-NH2 groups. Conclusions PAR-2 agonist SLIGRL-NH2 could reduce myocardial apoptosis by upregulating the Bcl-2 and PAR-2 mRNA level and downregnlating Bax expression in a dose-dependent manner in this rat I/R model.     

高通量筛选在抗病毒药物筛选中的应用

细胞和分子生物学的迅速发展为药物作用靶点研究提供了新的领域,大量分子细胞水平的药物筛选模型不断出现,并应用到药物筛选和研究中。多学科交叉使细胞分子水平筛选方法能实现自动化技术而形成高通量筛选(highthroughput screening,HTS)。HTS是以分子和细胞水平的实验方法为基     

HIV-1 Tat真核表达载体的构建及在内皮细胞的表达

目的:构建HIV-1 Tat真核表达质粒,为研究Tat在HIV-1致病机制中的作用奠定实验基础。方法:以pCV1(tat and rev)质粒为模板,用PCR方法扩增HIV-1 Tat基因,克隆至p cDNA3.1( )表达载体,酶切及测序鉴定重组体。重组质粒转染ECV304细胞,用RT-PCR、转染HIV-1 LTR荧光报告基因的方法检测tat基因的表达及活性。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建pcDNA3.1( )-Tat重组质粒。重组体转染ECV304细胞,建立稳定表达细胞株,应用RT-PCR可检测到Tat基因mRNA的表达;荧光仪检测Tat蛋白可明显促进荧光素酶在ECV304细胞内的表达。结论:成功构建HIV-1Tat真核表达载体,并建立了HIV-1 Tat内皮细胞稳定表达细胞株。