丙型肝炎病毒亚单位融合蛋白的表达及免疫原性测定

目的获得高纯度的丙型肝炎亚单位融合蛋白并评价其免疫原性。方法利用原核表达系统,以pET—11d作为载体,在大肠埃希菌BL21（DE3）中经IPTG诱导表达获得融合蛋白,之后采用DEAE阴离子交换和镍离子柱亲和层析进行纯化。通过Western Blot验证融合蛋白的抗原活性。同时以该蛋白免疫实验动物后测定血清中的抗体滴度。结果成功获得很高纯度的丙型肝炎亚单位融合蛋白,EIA显示融合蛋白能够诱生出高滴度的抗体。结论原核表达系统表达的丙型肝炎病毒亚单位融合蛋白具有较强的免疫原性,为丙型肝炎病毒治疗性和预防性疫苗的研制提供了一条新的途径。     

乙型肝炎病毒表面抗原基因点突变对HBsAg抗原性的影响

目的 研究乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)常见基因点突变对HBsAg抗原性的影响,了解我国目前常用的HBsAg检测试剂对HBV S基因突变株的检测灵敏性,减少漏检,有效控制乙肝病毒(HBV)感染的传播.方法 构建HBsAg重组野毒株和重组变异株表达质粒,分别将重组野毒株HBsAg表达质粒pSS1adw2及pSS1adr和重组变异株HBsAg表达质粒pSS1adw2-145Arg、pSS1adr-126 Ser和pSS1adr-126 Asn转染COS-7细胞,进行瞬时转染.采用市售HBsAg ELISA检测试剂盒对细胞上清进行抗原性检测.结果 野毒株HBsAg和两种126位变异株HBsAg具有较好的抗原性;145位点突变后、导致HBsAg的抗原性下降.结论 推测是由于145位点变异影响了"a"抗原决定簇的空间结构,从而降低了其与抗-HBs的结合能力.     

抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1单克隆抗体的制备和鉴定

目的 制备具有中和活性的抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1的单克隆抗体.方法 人工合成SP55和SP70(分别包含VP1的第163-177,208-222位氨基酸)两段VP1的多肽,分别免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术进行细胞融合,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选阳性杂交瘤细胞并测定效价.用分泌的单抗和EV71病毒在RD细胞上进行中和试验以检验其中和活性.结果 得到2株能稳定分泌抗肠道病毒EV71型VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,2株单抗的中和效价分别为1:8和1:16.结论 成功制备出2株具有中和活性的抗肠道病毒EV71型VP1蛋白单克隆抗体,为其下一步应用打下基础.     

河南省人民医院门诊患者戊型病毒性肝炎的阳性率调查

目的 通过检测部分门诊病例血清的戊型肝炎病毒标志物（HEV IgG）,简要描述本地区的戊型病毒性肝炎的感染水平.方法 收集河南省人民医院内科门诊病例血清415份,应用万泰公司的戊型病毒性肝炎诊断试剂盒进行ELISA检测,检测结果进行统计学分析,对不同分组进行x2检验.结果 415例门诊病例的HEV阳性率为21.93％,在性别间、年龄分组间,差异有统计学意义,而在城乡间的差别无统计学意义.结论 我市的戊型病毒性肝炎阳性率处于全国HEV感染率的平均水平,成人的HEV阳性率显著性高于青少年.在低年龄阶段进行有效的疫苗接种,可以控制戊型病毒性肝炎在我省的流行.     

b型流感嗜血杆菌D蛋白原核可溶性表达研究

目的 通过原核表达系统可溶性表达重组D蛋白,为多糖结合疫苗的制备提供蛋白载体.方法 将Hib CMCC株基因组DNA中去除信号肽的hpd基因片段插入pET43.1a表达质粒,转化入感受态大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白,经过硫酸铵沉淀和DEAE阴离子交换柱层析纯化后,用Western Blot的方法鉴定其免疫反应原性.结果 表达的重组蛋白以可溶性形式存在,表达量约占菌株总蛋白的44％,经过初步纯化后的重组蛋白可以和Hib抗血清发生特异性反应.结论 成功构建了D蛋白重组表达质粒,并在原核细胞中以可溶性形式表达出具有良好免疫反应原性的D蛋白.     

我国部分地区人群中水痘-带状疱疹病毒流行率

本文首次报导我国部分城市居民中水痘－带状疱疹病毒（Ｖａｒｉｃｅｌａ－ｚｏｓｔｅｒｖｉｒｕｓ，ＶＺＶ）血清学流行率。标本来自上海、北京、大连、广州和成都市１～４５岁人群，共收集血清３０７６人份。用ＥＬＩＳＡ方法检测。结果显示，我国部分人群中ＶＺＶ抗体阳性率平均为６８７６％，年龄别流行率在１～３岁、４～６岁、７～１３岁和３６～４５岁组，分别为１５９６％、４９９０％、６９９４％和９３１２％。此结果将为我国ＶＺＶ疫苗免疫中免疫对象的选择提供科学依据     

甲型肝炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的比较

目的 比较本实验室内部建立的甲型肝炎病毒核酸定量体系和另外两个商品化实时荧光定量PCR检测试剂盒的检测效果.方法 本实验室内部建立的HAV核酸检测系统选取HAV基因组的高保守区段5 ′非编码区作为扩增靶点,定量标准品采用体外转录获得的RNA分子,HAV疫苗株储存液倍比稀释成10-8 ～ 10-1后提取RNA作为模板用以比较该反应体系与市售商品化试剂盒的准确性、灵敏度以及特异性.结果 本实验室内部建立的HAV核酸检测体系十分适宜于HAV的检测,最低检测极限达到10 TCID50/ml,比国内某厂商生产的HAV定量PCR检测试剂要灵敏,然而Qiagen公司的RealArt HAV LC RT-PCR检测试剂效果最好,其检测极限可以达到5 TCID50/ml.结论 本实验室内部建立的HAV核酸定量体系可重复性好,敏感度高,特异性强,在临床样本,环境样本以及食品样本的检测方面具有广阔的应用前景.     

中国丙型肝炎血清流行病学研究

目的 了解中国现阶段丙型肝炎病毒(HCV)感染现状。方法利用中国疾病预防控制中心“2006年中国乙型病毒性肝炎血清流行病学调查”保留的血清,以美国Murex 3.0和Ortho 3.0抗-HCV试剂为金标准建立标准血清库,筛选中国抗-HCV检测试剂,并用Chiron HCVRIBA 3.0复核检测结果。结果 中国1～ 59岁人群抗-HCV调整流行率为0.43％(95％CI:0.33％～0.53％),男性和女性抗-HCV流行率分别为0.46％和0.40％,城市和农村人群经调整后均为0.43％。东、中和西部地区人群抗-HCV流行率分别为0.37％（95％CI:0.21％～0.53％）、0.67％(95％CI:0.40％～0.94％)和0.31％ (95％CI:0.20％ ～ 0.42％),3个地区人群抗-HCV流行率的差异无统计学意义;南方和北方地区人群抗-HCV流行率分别为0.29％(95％CI:0.21％～0.52％)和0.53％(95％CI:0.38％ ～ 0.64％)。结论经综合性防治,目前中国属丙型肝炎低流行区。     

四种乙肝病毒表面抗原ELISA诊断试剂的评价

目的 对四种国内乙肝病毒表面抗原诊断试剂进行评价。方法 用四种试剂分别对标准品和未知血清进行检测，用几种常用诊断试验评价方法对检测结果进行分析和比较。结果 四种试剂对标准血清的检测结果较好，A、B两种试剂的总符合率为100％，另两种的总符合率也在90％以上，其中B试剂有较好的精密性。δ值比较显示A和B两种试剂有较好的诊断特性。四种试剂在一定的抗原浓度范围内都有良好的线性关系。针对于未知样本的检测中，四种试剂与采用电发光法的罗氏诊断试剂有较好的一致性。结论 国内主要厂家的HBsAg ELISA诊断试剂具有较高的检测效能。在实际工作中，可以通过常用的诊断试剂筛选实验，经统计分析后筛选出较高效能诊断试剂用于检测。