雌激素替代治疗阿尔茨海默病的机制：生后不同发育时期小鼠基底前脑内雌激素β受体的表达

目的：研究出生后不同发育时期小鼠基底前脑内雌激素β受体（estrogen receptor β，ER—β)的表达，探讨雌激素替代治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)的机制。方法：选择出生0，3，7，14d，1，3，12，18个月的小鼠，每个时相点各5只。动物前脑经多聚甲醛-丙烯醛混合固定液固定、冷冻切片后于一抗(兔抗ER-β，sc-8974)内孵育过夜，再行常规的免疫组化并用硫酸镍铵增强DAB的显色。结果：小鼠基底前脑内ER—β免疫阳性物质位于细胞核。新生时在两性基底前脑ER—β免疫阳性细胞数目较少，生后第14天～3月龄时最多，老年(18月龄)时表达显著减少甚至消失，尤其在雌性更明显。ER—β的表达具有一定的性别差异，表现为生后早期和老年时雄性表达强于同期雌性。结论：小鼠生后不同发育时期基底前脑内ER-β蛋白的表达呈现弱-强-弱的变化模式，表明该受体可能参与了雌激素对基底前脑神经结构与功能的调节从而可能对AD的发病产牛影响，也可能是雌激素替代治疗AD的重要机制。     

小鼠室旁核内雌激素受体与催产素、加压素表达的免疫组化研究

目的研究雌激素的核受体ER-α和ER-β以及催产素、加压素在成年雌性小鼠下丘脑室旁核内的表达。方法采用硫酸镍铵增强显色的免疫组化SP法检测ER-α、ER-β、催产素和加压素在室旁核内的表达。结果雌激素的两种核受体在室旁核内都有表达,但是以ER-β为主（P〈0.001）,其免疫阳性产物均在细胞核内,未见核外免疫阳性反应。催产素的免疫阳性产物主要在细胞核周围的胞浆即核周质内,而加压素的免疫阳性物质除了在核周质内有很强的反应外,在突起内也可见很强的免疫反应。ER-α的免疫阳性胞体主要在大细胞部内侧,而ER-β、催产素和加压素的免疫阳性胞体主要在背侧帽部或大细胞部的外侧。结论室旁核内两种雌激素受体可能都参与了对催产素和加压素的调节,但ER-β可能发挥了主要的调节作用。     

免疫电镜技术运用过程中电子染色方法的选用

目的探究免疫电镜不同染色方法对免疫组化阳性实验结果影响的关系。方法组织切片经常规免疫组化（雌激素受体GPR30）并行DAB-硫酸镍铵显色后进行电镜切片，然后分为双氧铀-柠檬酸铅双染、双氧铀单染与未染色3组，以便对不同电子染色结果进行比较。结果GPR30免疫阳性产物位于细胞核外的膜性结构上，在铀-铅双染组显示很高的电子密度，但是背景染色也很深，在铀单染组的反差比较好，而未染色组的反差更好。结论免疫电镜技术中针对不同的免疫阳性反应选用不同的电子染色方法，有利于阳性结果的判断与鉴别。     

正常人体学综合课程的构建

我校在完成教育部世行贷款21世纪初高等教育教学改革项目(NO：1292813032)：高等医学基础综合课程的实践研究课题中，提出了“以系统整合的学科群代替传统的以学科为中心的课程体系，加强人教育，强调终身学习的医学教育模式”。这种模式将传统的以学科为主的医学基础课程整合为9个系统模块，其中3个新增模块属于前沿生命科学，分别为神经生物学、现代发育生物学、生物信息学及计算基础医学。     

双语教学法在医学组织胚胎学教学中的应用

近几年，以加强外语和计算机等技能培养为特征的新一轮教学、课程改革方兴未艾，“双语教学”、“探究型学习”等新概念成为“热门主题”，成为推进“素质教育”的又一着陆点。加强外语教学势在必行，外语教学正在准备新的飞跃，其中“双语教学”是最引人注目的视点之一。     

雌激素β受体在成年雄性大鼠脑内的免疫组化定位研究

目的 为了研究雌激素作用于神经系统的机制,研究了近年发现的雌激素β受体免疫阳性物质在雌性大鼠脑内的分布。方法 应用免疫组化S－P法并结合硫酸镍铵增强显色技术。结果 ①免疫阳性物质主要位于神经元的细胞核内,部分细胞的核周质和突起内也有浅谈的着色;也有部分神经元仅仅胞浆呈阳性;②最强阳性信号见于前嗅核、大脑皮质、斜角带垂直部、小脑浦肯野细胞、上丘各部、动眼神经核、红核、蓝斑、三叉神经运动核以及斜方体内、外侧核;中等强度的染色见于斜角带水平部、终纹床核、视前内侧核、乳头体内侧核以及黑质;较弱的阳性细胞见于下丘脑核团、未定带、杏仁复合体的部分核团以及脑桥网状核后部;微弱的阳性信号见于隔外侧核、苍白球、嗅结节岛、海马。结论 雌激素β受体在成年大鼠脑组织内有广泛的分布,在脑组织内雌激素可能通过β受体这一新的信号途径发挥多种重要的调控作用。     

抑制肌动蛋白聚合对体外大鼠跟腱来源肌腱干细胞成脂分化的影响研究

目的探讨细胞骨架重塑对体外大鼠跟腱来源肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs)成脂分化的影响。方法取3周龄雄性SD大鼠跟腱组织,采用酶消化法分离、培养TSCs,取第3代细胞用于实验。将细胞分别以细胞松弛素D(cytochalasin D,CYD)终浓度为0、50、100、500、1 000 ng/m L的含15%FBS的DMEM培养基进行培养,倒置相差显微镜下观察细胞存活及形态变化,纤维肌动蛋白(fibros actin,F-actin)染色观察细胞骨架,Western blot检测F-actin/球状肌动蛋白(globular actin,G-actin)比值,根据结果选择CYD有效使用浓度进行后续实验。取TSCs分别采用成脂诱导培养基(诱导组)、含CYD的成脂诱导培养基(CYD+诱导组)以及普通培养基(普通组)、含CYD的普通培养基(CYD+普通组)培养3、7 d,收集各组细胞行实时荧光定量PCR检测成脂分化相关特异标志性基因表达,包括过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、脂蛋白酯酶(1ipoprotein lipase,LPL)、脂肪酸结合蛋白(a P2),Western blot检测PPARγ、a P2蛋白表达。结果 CYD浓度为100 ng/m L时既能有效干扰TSCs细胞骨架F-actin的聚合,又不影响TSCs的存活,选择该浓度进行后续实验。实时荧光定量PCR及Western blot检测示,3、7 d时CYD+诱导组PPARγ、LPL和a P2基因及PPARγ、a P2蛋白表达均显著高于诱导组,比较差异有统计学意义(P0.05)。3、7 d时CYD+普通组PPARγ、LPL和a P2基因表达也显著高于普通组,比较差异有统计学意义(P0.05)。结论细胞骨架重塑是TSCs成脂分化的一个先决条件,抑制F-actin聚合可促进TSCs的成脂分化,对肌腱病的发病机制研究具有重要意义。     

卵巢雌素对基底前脑内ER-β、ChAT、NOS和p75蛋白表达的调节

经由芳香化酶催化雄激素转化而来的雌激素对神经结构和功能有重要影响 ,基底前脑是雌激素和神经生长因子的重要靶区 ,与学习记忆和老年性痴呆 (AD)有着重要的联系。已经发现雌激素替代治疗可以减少 AD患者基底前脑胆碱能神经元的丢失、减少β-淀粉样蛋白的沉积 ,进而改善 AD患者的痴呆症状 ,但其机理至今仍不清楚。应用硫酸镍铵增强显色的免疫组化 SP法 ,研究了切除双侧卵巢 (OVX)后小鼠基底前脑内 ER- β、Ch AT、NOS和 p75表达的变化 ,结果发现 :OVX导致 ER-β和 Ch AT、p75、NOS表达下降 ,约第5天降至最低 ,随后恢复 ,到第 1…     

人脐带间充质干细胞联合富含血小板血浆促进大鼠跟腱损伤的修复

目的 探讨不同浓度富含血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)在体外对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)增殖、分化的影响,评估hUC-MSCs联合PRP对大鼠跟腱损伤修复的影响.方法 PRP活化后成为PRP-clot releasate (PRCR).取P3代hUC-MSCs于培养皿中培养24h后,分别加入含0％(对照组)、10％、20％、40％ PRCR的DMEM/F12培养基,于第1、2、3、4天测定hUC-MSCs的增殖速度.P3代hUC-MSCs按相同分组培养,于第1、3、5天收集细胞并提取蛋白.Western blot检测hUC-MSCs中成肌腱分化标志性基因肌腱蛋白C(tenascin c,TNC)、SCX (scleraxis)、Ⅰ型胶原的表达.选取48只8周龄雄性SD大鼠,Ⅰ型胶原酶溶液50μL注射于大鼠右侧跟腱制备跟腱损伤模型,3d后于损伤部位再次分别注射50μL生理盐水(对照)、hUC-MSCs悬液、PRP或PRP+ hUC-MSCs混悬液,术后2、4周安乐死大鼠,Western blot检测跟腱中TNC、SCX及Ⅰ型胶原的表达,跟腱切片HE染色行组织学评估.结果 PRCR在体外对hUC-MSCs增殖均有促进作用,20％ PRCR组促增殖作用最显著(P ＜0.05);20％ PRCR组较对照组在体外可以显著地促进hUC-MSCs成肌腱分化标志性基因的表达(P＜0.05);术后2、4周,PRP+ hUC-MSCs组跟腱中成肌腱分化相关基因在蛋白水平表达更高,跟腱切片HE染色显示PRP+ hUC-MSCs组纤维排列更规整,炎细胞更少.结论 适宜浓度PRP在体外显著促进了hUC-MSCs的增殖、成肌腱分化;PRP联合hUC-MSCs能有效促进大鼠受损跟腱的修复.