pET28a-Streptag I-SbpA-Ag85B重组质粒的表达与鉴定

目的 应用分子克隆技术获得纳米级Ag85B蛋白并对其进行鉴定和免疫学特性检测.方法 利用S-layer/Streptag I这一具有自我组装能力的纳米模式嵌合结核杆菌分泌的Ag85B蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pET28a（＋）中,并在大肠杆菌中表达Ag85B蛋白,表达后的蛋白经SDS-PAGE和Western blotting鉴定.结果 原核表达重组质粒pET28a-Streptag I-SbpA-Ag85B成功构建,并可在大肠杆菌中诱导表达,得到的Streptag I-Sbpa-Ag85B蛋白经SDS-PAGE和Western blotting鉴定正确,重组蛋白能被结核患者血清识别.结论 重组后的Ag85B蛋白具有较强的免疫反应性.所建立的原核表达体系为新型结核疫苗研制提供了一个新的思路.     

先天性心脏病患儿合并主动脉缩窄一例

<正>患儿,女,10月龄,70 cm, 7 kg, ASA Ⅱ级。因“发现心脏杂音1月余”入院。患儿1个月前因发育缓慢,于门诊就诊,听诊发现心脏杂音,B超提示：先天性心脏病、动脉导管未闭、室间隔缺损、肺动脉高压。无特殊处理,等待手术。近1个月来,患儿体质可,无反复上呼吸道感染,哭吵后无气促发绀史,无胸闷,病情无明显变化。既往史：足月,顺产,出生体重3.3 kg, 无出生抢救史。     

自然戒断期成瘾药物依赖者CD4^+CD25^+CD127^(low)调节性T细胞的变化特征及意义北大核心CSCD

目的研究自然戒断期成瘾药物依赖者外周血CD4+CD25+CD127low调节性T细胞(Treg)及外周血单个核细胞(PBMC)中转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达水平的变化,探讨成瘾药物对成瘾药物依赖者体内Treg的影响。方法采集自然戒断6个月和18个月半的成瘾药物依赖者各40例及30例健康人的外周血,使用流式细胞仪检测Treg,用RT-PCR检测PBMC中TGF-β1 mRNA表达水平。结果与对照组比较,戒断18个月组Treg、TGF-β1 mRNA含量显著增高,而戒毒6个月组未发现显著性变化。结论成瘾药物对依赖者Treg的影响是长期性的,其介导的Treg异常,可能是引起成瘾药物依赖者免疫功能紊乱的原因之一。     

pCMV-LC3-Ag85B重组质粒DNA疫苗对结核的免疫保护作用

目的构建结核分枝杆菌Ag85B抗原基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的DNA疫苗,探究其抗结核分枝杆菌保护效应。方法构建pCMV-LC3-Ag85B重组质粒并转染RAW264.7细胞,Western blot法检测目的蛋白的表达水平。分别以pCMV、pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-Ag85B质粒免疫BALB/c小鼠。末次免疫2周后,Ag85B刺激下培养各组小鼠脾脏淋巴细胞,ELISA检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10分泌水平。末次免疫3个月后,用H37Rv标准株尾静脉注射感染小鼠,计数肺和脾脏结核分枝杆菌载量。结果 pCMV-LC3-Ag85B在RAW264.7细胞的表达水平与质粒浓度呈剂量依赖性。与pCMV-Ag85B免疫组相比,pCMV-LC3-Ag85B免疫组的IL-2、IFN-γ分泌显著增加,而肺和脾脏内结核分枝杆菌载量降低。结论 pCMV-LC3-Ag85B可显著增强Th1型免疫应答,并显示较好的抗结核分枝杆菌免疫保护效应。     

运用实验室和医院信息系统监测临床标本质量和危急值处置效果

目的分析运用实验室信息系统(laboratory information system, LIS)和医院信息系统(hospital information system, HIS)监测临床标本质量和危急值处置效果与产生质量问题的原因,针对性地改进和提高医院临床与实验室有关试验工作质量。 方法运用LIS-HIS进一步优化泰安市中心医院临床和实验室的检验流程[包括退还标本和自动审核功能,不合格标本、标本周转时间(turnaround time, TAT)统计功能,危急值LIS-HIS反馈和危急值统计功能]后,采用回顾性研究,用其比对分析评价本院2013年7月至12月未用HIS-LIS监测191 719份临床标本采集的不合格率、TAT时间和5987份标本的血常规、生化、凝血、血气危急值处置与2014年1月至6月用HIS-LIS监测（161 308份标本和5082份危急值标本）的3项质量指标的运行效果和产生质量问题的原因以及分布状况。 结果成功建立了LIS-HIS标本质量和危急值监测系统,2014年1月至6月,共接收标本161 308份,成功退回标本1356份,报送危急值5082份。LIS-HIS标本质量和危急值监测系统使用前（2013年7月至12月）标本不合格率为1.31%（2511/191 719）,血常规24项TAT为25.9 min,血常规、生化、凝血、血气危急值处置率为95.6%;使用LIS监测和改进干预后（2014年1月至6月）标本不合格率为0.84% (1356/161 308）,下降0.47%(χ²=6.03,P<0.05);血常规24项平均TAT为18.6 min,缩短7.3 min (U=0.98, P>0.05),生化报告56项平均TAT由156 min缩短至72 min时,生化报告改进前后TAT显著缩短(U=12.9,P<0.01);通过HIS-LIS的改进,医院危急值报告时间由11.2 min降低到7.5 min,危急值报告一致性由98.8%提高到100%,医生危急值处置及时性由95.2%提高到98.2%。 结论LIS-HIS系统可及时、准确监测临床和实验室的标本运行质量;运用血常规、生化自动审核可以缩短TAT,同时提高了血常规、生化、凝血和血气的危急值监测处置效果,改进了临床与实验室的有关试验信息运用质量和管理水平。     

护士长在提高妇产科护理质量中的职责探讨

目的 探讨在提高妇产科护理质量中护士长的职能与素质要求.方法 对我院妇产科的患者进行调查,了解护士长在提高妇产科护理质量中的职责.结果 护士长素质有待提高,职责有待明确,其可提高患者的满意度和护理质量.结论 通过我们的研究发现,要想切实落实提高护理质量的措施,不仅护士长要具备优良的自身素质,而且还需要给予护士长明确的职能、一定的服务监督管理权,对护士长实行责任制度,这样才能充分发挥护士长在护理丁作中的作用.     

TAT-Ag85B蛋白疫苗的制备和抗结核分枝杆菌效果评价

目的探讨利用HIV反向转导结构域(TAT-PTD)系统表达的转导性Ag85B蛋白疫苗的抗结核分枝杆菌效应。方法构建p ET28a-Ag85B、p ET28a-TAT-Ag85B质粒,原核表达纯化和鉴定后获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;将BALB/c小鼠随机分为3组:Ag85B组,TAT-Ag85B组,PBS组。重组蛋白经皮下免疫小鼠3次,末次免疫后1周处死部分小鼠,ELISA检测小鼠血清中Ag85B抗体滴度,以及脾细胞分泌的γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)的水平;用流式细胞术检测巨噬细胞经Ag85B、TAT-Ag85B蛋白刺激后表面分子CD80、CD86变化情况;剩余小鼠经尾静脉感染H37Rv结核分枝杆菌,感染后第1、2、4、8周动态监测小鼠肺和脾内结核分枝杆菌载量,并在感染后8周取肺脏进行HE染色,观察肺组织病变情况。结果成功获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;与Ag85B相比,TAT-Ag85B诱导小鼠表达高水平的Ig G和IFN-γ、IL-2,感染小鼠的脾、肺结核分枝杆菌载量明显减少,肺组织病变范围小、结核分枝杆菌数量少。另外,TAT-Ag85B增强巨噬细胞表面分子CD80/CD86的表达。结论 TAT-Ag85B蛋白疫苗增强巨噬细胞的抗原提呈能力,诱导小鼠产生强烈的Th1免疫应答,有一定的抗结核分枝杆菌保护作用。     

血清细胞角蛋白19片段抗原、糖类抗原125和50水平在肺癌中的诊断价值

目的探讨血清细胞角蛋白19片段抗原(CYFRA21-1)、糖类抗原125(CA125)和糖类抗原50(CA50)水平在肺癌诊断中的应用价值。 方法回顾性分析泰安市中心医院肿瘤科2012年1月至2013年12月收治的肺癌患者233例(研究组),其中非小细胞肺癌181例(腺癌129例,鳞癌52例),小细胞癌47例,其他类型5例;同期30例肺良性病变患者作为对照组。电化学发光法检测患者血清CYFRA21-1、CA125和CA50水平,比较3种标志物在肺癌不同病理类型患者中的水平以及联合检测对肺腺癌诊断和TNM分期的诊断价值,Kaplan-Meier生存曲线分析血清中3项标志物单项阳性和多项阳性的肺腺癌患者的生存时间。 结果腺癌组血清CA125和CA50[(125.06±42.98)U/mL,(17.43±8.51)U/mL]水平明显高于鳞癌组[(65.06±39.03)U/mL,(11.28±9.01)U/mL]和小细胞癌组[(70.32±49.88)U/mL,(7.43±6.07)U/mL](腺癌与鳞癌比较,CA125：q＝18.21,P＝0.01,CA50：q＝3.98,P＝0.05;腺癌与小细胞癌比较,CA125：q＝16.64,P＝0.03,CA50：q＝5.98,P＝0.03),腺癌组血清CYFRA21-1水平[(12.28±7.08)μg/L]高于小细胞癌组[(7.07±6.23)μg/L](q＝5.12,P＝0.03);腺癌TNM分期中,Ⅰ期患者的CYFRA21-1、CA125水平[(9.12±8.09)μg/L,(35.23±18.77)U/mL]明显低于Ⅳ期患者[(48.40±13.61)μg/L,(179.36±33.19)U/mL](CYFRA21-1：q＝8.28,P＝0.02;CA125：q＝31.21,P＝0.00);3项标志物联合检测敏感度为89.97%,特异度为85.09%;3项标志物单项阳性患者的生存时间长于多项阳性的肺腺癌患者(χ²＝2.91,P<0.01)。 结论血清CYFRA21-1、CA125和CA50水平检测在肺癌诊断、分期和预后中具有重要作用。