γ射线联合HSV-tk/GCV基因治疗系统抗肿瘤体外实验研究

目的研究γ射线与人单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）／丙氧鸟苷（GCV）基因治疗系统联合应用对Lewis肺癌细胞的杀伤作用及其可能机制。方法以脂质体介导法将含HSV—tk基因的真核表达质粒体外转染小鼠Lewis肺癌细胞，建立稳定表达的细胞株；RT-PCR检测细胞tk基因表达；Hoechst33258/PI荧光活染、流式细胞术检测γ射线与HSV-tk／GCV系统单独及联合作用下的细胞凋亡；集落形成法检测细胞存活曲线，反映放射敏感性变化；同时检测旁观者效应及γ射线对该效应的影响。结果HSV-tk／GCV系统对转染基因的Lewis细胞（Lewis-Hytk细胞）具有选择性杀伤作用。γ射线与HSV-tk／GCV系统联合应用可使Lewis-Hytk细胞的凋亡和坏死率显著高于二者单独作用之和。0．1μg/ml GCV可使Lewis-Hytk细胞的放射敏感性明显增高（SER=1．47）。γ射线可增强HSV-tk/GCV系统的旁观者效应，二者联合作用后的Lewis-Hytk细胞的培养液对未处理过的Lewis细胞具有杀伤作用。结论γ射线与HSV-tk／GCV系统联合应用对Lewis肺癌细胞具有协同杀伤效应。γ射线增强HSV—tk／GCV系统的旁观者效应可能是其协同效应产生的机制之一．     

辐射诱发细胞凋亡4种定量检测方法的比较

目的 通过检测结果的比较和原理分析，提示4种凋亡检测方法鉴别凋亡和坏死的能力及优缺点。方法 采用PI染色-流式细胞测量(P-F)法、TUNEL标记-流式细胞测量(T-F)法、Annexin V-FITC／PI活染-流式细胞测量(A-F)法和Hoechst／PI活染-荧光显微镜观察(H-O)法对γ射线诱发的人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和坏死进行检测，以羟基喜树碱和叠氮钠分别为诱发凋亡和坏死的阳性对照物。结果 4种方法对γ射线、羟基喜树碱诱发的细胞凋亡显示良好的时间-剂量依赖性响应。P—F法所得凋亡率较低，曲线斜率最小；T-F法反之；A—F法和H—O法可获得凋亡和坏死两套数据，且两种方法的数值相近。A-F法和H-O法可识别叠氮钠所致的细胞坏死；而P-F法和T-F法不能反映其致坏死为主的真实情况。结论 P-F法和T-F法不能区别凋亡和坏死，A-F法和H-O法可以区别。P-F法较T-F法灵敏度低但简便经济。A-F法快速可靠，H-O法经济实用并可同时观察细胞形态学变化。